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使用 HILIC LC/MS 对哺乳动物细胞培养基进行监测
2018/08/10 16:54
阅读：331
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产品配置单：
Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统
型号： 6470
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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OpenLAB 软件
型号： OpenLAB
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
将 Agilent InfinityLab Poroshell HILIC-Z 色谱柱与 Agilent 6545 Q-TOF LC/MS 结合使用，对六天内采集的哺乳动物细胞培养基中的养分吸收和分泌废物进行监测。HILIC-Z 色谱柱可保持良好的峰形与保留时间重现性，能适应高盐样品（如细胞培养基）。该方法通过优化流动相、梯度和仪器参数，可用于在负离子模式下的单次分析运行中对生长培养基的养分（即葡萄糖和氨基酸）与代谢废物（即乳酸及 TCA 循环相关的其他有机酸）进行监测。
前言
质谱 (MS) 是一种高灵敏度分析技术，常用于针对各种小分子的代谢组学研究。哺乳动物细胞代谢组学一跃成为在多个研究领域中具备应用潜力的新兴工具，研究细胞培养基中细胞消耗与分泌的多种代谢物变得越来越重要。分析仍然面临一些挑战，包括阴离子代谢物的保留4、样品基质效应，以及螯合有机酸和磷酸化合物的分析性能。
为应对这些挑战，开发了一种稳定且可重现的亲水相互作用色谱 (HILIC) LC/MS 方法，方法中采用 InfinityLab 去活剂添加剂作为流动相改性剂，以增强金属螯合有机酸和磷酸化分析物的峰形和检测信号。作为色谱优化与 HILIC 色谱柱测试的一个步骤，对样品基质中盐浓度的影响进行了研究。研究中建立了一种分析细胞生长培养基中代谢物消耗和分泌的方法。
结论
在进行哺乳动物细胞培养基中各种代谢物的分析时，基于 HILIC 的色谱方法与 6545 Q-TOF LC/MS 联用，提供了卓越的分析性能。带 PEEK 内衬硬件的 InfinityLab Poroshell HILIC-Z 色谱柱可为高盐样品提供可靠的保留时间重现性与灵敏度。PEEK 内衬 HILIC-Z 色谱柱与 1290 Infinity 液相色谱系统和 6545 Q-TOF 系统联用，具有卓越性能，是代谢组学分析的理想平台。总之，这些特征能够在单一方法中对阴离子和疏水性更强的产物进行检测与分离，并可用于监测生物制造过程。
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