使用安捷伦 1260 Infinity 液相色谱和柱后光化学衍生方法同时测定四种黄曲霉毒素

    摘要

    在这篇应用报告中，我们开发了一个用于测定食品基质如谷物，芝麻酱等中黄曲霉毒素的方法，并对检出限(LOD)，定量限(LOQ)，重现性，回收率等方面进行了方法学考察。分析谷物，坚果等食品基质中黄曲霉毒素是保证食品安全的重要工作。在这篇报告中，我们介绍了一种同时测定四种主要黄曲霉毒素的柱后光化学衍生液相色谱荧光检测方法：样品经过免疫亲和小柱净化，采用柱后光化学衍生方法和荧光检测进行测定，这种方法可以满足各个主要法规对于定量限的要求，并且比起常用的柱后电化学衍生方法更加容

易操作。

    简介

    黄曲霉毒素是一种由真菌产生的有毒的致癌物质。这种真菌在合适的温度湿度条件下会在土壤，谷物，坚果或腐烂的植物中生长。自然界中自然产生的黄曲霉毒素至少有14 种之多，其中毒性最大的是黄曲霉毒素B1。因此，很多国家和法规机构都对食物中黄曲霉毒素B1 的含量做了严格规定，通常，对毒性比B1 略小的其他三种黄曲霉毒素B2，G1 和G2 的含量也会做出相应规定。例如欧盟规定黄曲霉毒素B1 的在食物如谷物，坚果中的含量最大允许范围在2.0 到8.0 μg/kg (ppb) 之间，上述四种黄曲霉毒素总含量允许值范围在4.0 到15.0 μg/kg (ppb) 之间[1,2]。美国FDA 规定食品含量限定值为20 μg/kg，饲料含量限值为300 μg/kg[3]。中国国标GBT 18979-2003 规定四种黄曲霉毒素总量检出限应为1 μg/kg[4]。

    黄曲霉毒素测定通常使用液相色谱-荧光检测的方法完成。但是由于有些黄曲霉毒素在含水流动相中会发生荧光淬灭，所以需要采取一定的衍生技术将它们衍生为不会淬灭的型态[5]。目前应用比较普遍的衍生方法是在溴的作用下进行柱后电化学衍生[6,7]。这种方法有很好的灵敏度，但是也有很多缺点，比如需要使用到对仪器有强烈腐蚀作用的含溴流动相，并且衍生装置需要定期维护。另一种衍生方法是使用紫外光使黄曲霉毒素与水进行衍生反应，由于水是反相色谱中的常用溶剂，所以这种方法操作十分简便，并且在灵敏度上与电化学衍生方法也有较好的可比性[8]。

    在这篇应用报告中，我们在安捷伦1260 Infinity 四元泵液相色谱系统上开发了一个灵敏快速的用于分析黄曲霉毒素B1，B2，G1 和G2 检测的柱后光化学衍生-荧光检测方法，这个方法在定量限和检出限上的表现完全可以满足各个主要法规的要求。

    小结和讨论

    在这篇应用报告中，我们开发了一个使用简单的柱后光衍生设备及荧光检测同时测定食品基质中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2 的方法。方法线性及重现性良好，在检出限和定量限上完全可以满足现行法规的要求，根据对实际样品的测试，此方法可以很好的将被测成分与基质干扰峰分离。比起电化学柱后衍生方法，所需要的设备简单，而且避免了使用对于仪器损害严重的流动相添加剂。虽然光化学衍生的方法比电化学衍生法的灵敏度略低，但是仍旧可以很好的满足现行法规和标准的要求。