使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 分析生物样品中的维生素 D 代谢物

    摘要

    生物样品中的脂类会对 25-羟基维生素 D2 和 D3 代谢物的分析产生不利影响。传统的样品前处理技术（如蛋白质沉淀）无法去除脂质干扰，而固相萃取则需要多个步骤以及方法开发。一种稳定可靠的样品前处理方法使用Agilent Captiva EMR-Lipid 进行基于 96 孔板的原位蛋白质沉淀和通过型脂质净化。创新的化学吸附剂能够选择性去除脂类，不会影响目标分析物。日内准确度和日间准确度范围为 90%-110%，且所有 QC 浓度下的精密度均 < 10%RSD。由于可实现高效脂质去除，因此该方法与蛋白质沉淀相比，其分析灵敏度和稳定性均得到显著改善，而这一改善也通过柱后注射、基质效应和磷脂分析实验得到了证实。

    前言

    通过监测血浆和血清等生物样品中的25-羟基维生素 D2 和 D3（25-OH D2 和D3）代谢物，对维生素 D 进行常规分析。LC/MS/MS 作为维生素 D 代谢物的分离和准确定量分析技术被业界广泛接受。虽然质谱法为目标分析物提供了高分析灵敏度和选择性，但生物样品中含有干扰物质（即磷脂），如果这些物质不经去除，可能会对分析性能产生影响。这是与蛋白质沉淀 (PPT)等标准样品前处理方案相关的一个常见问题。固相萃取可有效去除基质干扰，但需要多个步骤以及方法开发。

    Agilent Captiva EMR-Lipid 有助于对血浆、血清和血液等杂质多的生物样品进行 PPT 和脂质净化。使用 96 孔板和1 mL 小柱，并包含支持原位 PPT 的溶剂保留滤芯。当洗脱液通过 EMR-Lipid吸附剂进行净化时，沉淀的蛋白质将被滤除。与市售脂质去除产品不同，Captiva EMR-Lipid 具有较高的抗堵塞性，且包含一种创新的选择性化学吸附剂1。通过体积排阻和疏水相互作用的组合机制去除脂质，提供直接用于分析的纯化洗脱液。

    本应用简报介绍了如何利用 LC/MS/MS对血清中 25-OH D2 和 D3 进行验证2。对日内及日间准确度和精密度进行评估，确保获得稳定的方法性能。CaptivaEMR-Lipid 提供了有效的原位蛋白质沉淀和洁净的萃取物，通过基质效应、柱后注射和磷脂实验得到证实，获得了更高的方法可靠性和稳定性。

    结论

    使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 96 孔板对维生素 D 代谢物进行多日方法验证，获得了优异的准确度 (90%-110%)、精密度 (< 10 %RSD) 和净化结果（磷脂去除率 > 99%）。使用原位蛋白质沉淀可有效滤除血浆和血清样品中的蛋白质，不发生堵塞，同时可采用新开发的 EMR-Lipid 吸附剂采集脂类。该方法易于执行、快速，并可实现优异的基质去除，可确保获得最高的分析灵敏度、最小的交叉污染和高重现性。吸附剂对脂类的选择性支持进行多种类药物分析3，未来的工作会将应用扩展至迫切需要多种类、多残留分析的其他复杂样品（如食品）领域。