2018/06/24 21:51
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Agilent 1290 Infinity II 四元液相色谱系统
型号: 1290 Infinity II 四元
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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摘要
生物样品中的脂类会对 25-羟基维生素 D2 和 D3 代谢物的分析产生不利影响。传统的样品前处理技术(如蛋白质沉淀)无法去除脂质干扰,而固相萃取则需要多个步骤以及方法开发。一种稳定可靠的样品前处理方法使用Agilent Captiva EMR-Lipid 进行基于 96 孔板的原位蛋白质沉淀和通过型脂质净化。创新的化学吸附剂能够选择性去除脂类,不会影响目标分析物。日内准确度和日间准确度范围为 90%-110%,且所有 QC 浓度下的精密度均 < 10%RSD。由于可实现高效脂质去除,因此该方法与蛋白质沉淀相比,其分析灵敏度和稳定性均得到显著改善,而这一改善也通过柱后注射、基质效应和磷脂分析实验得到了证实。
前言
通过监测血浆和血清等生物样品中的25-羟基维生素 D2 和 D3(25-OH D2 和D3)代谢物,对维生素 D 进行常规分析。LC/MS/MS 作为维生素 D 代谢物的分离和准确定量分析技术被业界广泛接受。虽然质谱法为目标分析物提供了高分析灵敏度和选择性,但生物样品中含有干扰物质(即磷脂),如果这些物质不经去除,可能会对分析性能产生影响。这是与蛋白质沉淀 (PPT)等标准样品前处理方案相关的一个常见问题。固相萃取可有效去除基质干扰,但需要多个步骤以及方法开发。
Agilent Captiva EMR-Lipid 有助于对血浆、血清和血液等杂质多的生物样品进行 PPT 和脂质净化。使用 96 孔板和1 mL 小柱,并包含支持原位 PPT 的溶剂保留滤芯。当洗脱液通过 EMR-Lipid吸附剂进行净化时,沉淀的蛋白质将被滤除。与市售脂质去除产品不同,Captiva EMR-Lipid 具有较高的抗堵塞性,且包含一种创新的选择性化学吸附剂1。通过体积排阻和疏水相互作用的组合机制去除脂质,提供直接用于分析的纯化洗脱液。
本应用简报介绍了如何利用 LC/MS/MS对血清中 25-OH D2 和 D3 进行验证2。对日内及日间准确度和精密度进行评估,确保获得稳定的方法性能。CaptivaEMR-Lipid 提供了有效的原位蛋白质沉淀和洁净的萃取物,通过基质效应、柱后注射和磷脂实验得到证实,获得了更高的方法可靠性和稳定性。
结论
使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 96 孔板对维生素 D 代谢物进行多日方法验证,获得了优异的准确度 (90%-110%)、精密度 (< 10 %RSD) 和净化结果(磷脂去除率 > 99%)。使用原位蛋白质沉淀可有效滤除血浆和血清样品中的蛋白质,不发生堵塞,同时可采用新开发的 EMR-Lipid 吸附剂采集脂类。该方法易于执行、快速,并可实现优异的基质去除,可确保获得最高的分析灵敏度、最小的交叉污染和高重现性。吸附剂对脂类的选择性支持进行多种类药物分析3,未来的工作会将应用扩展至迫切需要多种类、多残留分析的其他复杂样品(如食品)领域。
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