近些年,随着科学家对于免疫学和诊断医学等领域的研究不断探索,传统的流式细胞仪已经难以满足部分实验对于40色甚至超多色流式检测的需求。自索尼生物技术公司于2013年推出第一台商用光谱流式分析仪以来,光谱流式细胞仪已成为近年来市场上的技术趋势,各家流式仪器企业纷纷布局光谱流式赛道。
近期,安捷伦正式推出了流式重磅新品——NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪,该仪器可配置三到五个激光器,支持多达73个高性能检测通道。既可以支持研究人员采用更多抗体染料组合的复杂流式配色方案,同时仍保留了 NovoCyte 产品系列易于使用的特点,充分将流式细胞分析仪器的高性能与易用性融为一体。
为深入了解该新款产品,仪器信息网特别邀请安捷伦细胞功能和表型业务总经理王小波博士,就NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪的产品技术研发与创新、光谱流式的市场格局等热门话题进行了探讨。本次图文采访报道共分为上下两期,以飨读者。
王小波博士 安捷伦细胞功能和表型业务总经理
王小波博士2018年加入安捷伦科技公司,现任安捷伦全球副总裁及细胞功能和表型业务总经理。
在加入安捷伦之前,他于2002 年担任ACEA Biosciences 的联合创始人、首席技术官兼总裁。 他领导了创新的xCELLigence实时细胞分析技术和新兴的NovoCyte流式细胞仪产品系列的开发、制造和商业化。在加入ACEA之前,王小波博士是AVIVA Biosciences的研发高级总监,领导了高通量离子通道膜片钳仪器的开发,以及检测母体血液中循环产前细胞的技术和解决方案。在加入AVIVA之前,他在英国威尔士大学班戈分校获得电子工程博士学位后,是德克萨斯大学MD安德森癌症中心的助理教授。
多年来,王小波博士不仅在学术界取得一定成果,于国际期刊发表60余篇论文,并取得30多项已授权发明专利。 此外,就职业生涯而言,他在创新技术开发和商业化方面表现出了强烈的热情和成功的记录,专注于创造和提供差异化的客户价值。
新品NovoCyte Opteon:"硬控"整合创新,"软控"简便易用
仪器信息网:请您分享安捷伦推出光谱流式细胞仪产品的背景和市场定位。
王小波:2024 年是 NovoCyte 流式细胞分析平台全球推出 10 周年。2014 年, 我们开发和推出了基于光电倍增管 (PMT)作为检测器的第 一代 NovoCyte流式细胞仪, 其配置涵盖 1激光2色至3激光14色,同时可以选配561nm激光器。
随着检测器生产工艺的提升,我们开发了基于硅光电倍增管(SiPM)的新一代 NovoCyte 细胞仪,具有更高的检测灵敏度,同时保持较小的尺寸,包括具有多达4激光25个荧光通道的 NovoCyte Quanteon(2018 年), 1至3激光同时最多21个荧光通道的NovoCyte Advanteon(2019 年),和5 激光 30 个荧光通道的NovoCyte Penteon(2020 年)。
2023 年,我们推出了符合FDA CFR21 part 11的新一代NovoExpress 软件,确保数据的完整性和可追溯性,满足了客户在药物生产制造中的电子记录可靠性, 可信性要求 。
自索尼生物技术公司于2013年推出第一台商用光谱流式细胞仪SP6800以来,光谱流式细胞仪已成为近年来市场上的技术趋势。 2024 年,安捷伦发布了 NovoCyte Opteon,给客户提供了完整的流式细胞仪产品组合,在为客户提供先进的光谱流式功能的同时也保留了 NovoCyte 的卓越性能、高可靠性和易用性的传统。
安捷伦NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪
仪器信息网:新品NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪有哪些显著创新点?
王小波:NovoCyte Opteon 开发并实施了多项技术创新。
1.新型用于荧光收集、分光和检测的专有光学子系统,整合了总共 73 个光学探测器,同时还保持小型台式仪器体积。NovoCyte Opteon 采用了雪崩光电二极管,以实现更好的光谱测量,特别是随不同增益设置自动准确生成参考光谱。
2.创新的光学子系统与不同流速下稳定的鞘液/样品流的协同工作,搭配先进的高性能模数转换电路确保高度可重复的荧光测量值。通过带有降噪和信号增强的专有信号处理算法转化为 24 位分辨率的电子信号输出。
3.用于实时监测仪器状态的板载温度和流体传感器反馈电路,确保在不同的环境和不同的流速下进行一致可靠的数据采集。
4.开发并实施了创新的光谱解混算法,能够与不同的参考对照设置配合使用,以得出单个荧光染料的相对贡献。
针对光谱流式细胞术由于荧光检测通道数量众多、需要构建单色参考对照以及光谱解混带来的技术和工作流程复杂性。在为NovoCyte Opteon开发 NovoExpress软件时,我们的主要目标是为运行实验和进行数据分析提供简便、直观的工作流程体验,主要体现在以下几个方面:
(1)NovoExpress 软件具有内置的荧光染料库(937种荧光染料,基本涵盖主要的市售荧光染料),每种荧光染料都可以很容易地找到并添加到检测组合中,包括荧光染料名称、第一激发波长、最大发射波长等基本信息。NovoCyte Opteon 将雪崩光电二极管应用于荧光检测,提供信号输出与增益的线性关系,为生成在不同增益设置下获得的参考对照光谱(来自单染细胞样品或单染微球样品)提供了灵活的选择,即使在不同时间进行光谱流式实验也可以用于光谱对照。 解混工作流程可用多个参考对照选项和未染样品,以检查哪种参考对照效果最佳。
(2)细胞内源性分子(如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)、黄素和脂褐素等)发出的细胞自发荧光可能掩盖抗体标记的荧光染料的信号,特别是在包含更大颗粒的细胞样本中。光谱流式细胞术将自发荧光视为一种附加染料,允许通过光谱解混将其去除。该过程增强了低表达靶标和较暗的荧光信号水平的分辨率。 NovoExpress 提供多个自发荧光(AF)同时去除功能,为探索不同的 AF 群体进行光谱解混提供了简单的工作流程。
(3)通过对每个荧光染料分子进行虚拟滤光片的整合和使用,NovoExpress 软件保留了用户已经熟悉的传统补偿矩阵的数据分析功能。
(4)NovoExpress 软件提供的其他强大功能包括相似性指数矩阵、溢出扩散矩阵等,可显著简化面板设计优化。 在数据采集过程中可以同时实现光谱解混。 易于使用的补偿调整工具,在解混后进一步帮助用户优化光谱解混结果并提高数据质量。 强大的 NxN 图,以点图形式显示两种荧光染料的所有可能组合,可以轻松可视化和查看解混结果。
(5)最后,荧光光电探测器的增益既可以单独调整,也可以按激光调整,还可以全部调整,以适应多色方案的需求。
NovoCyte十年之“旅”,持续推动流式检测普及化
仪器信息网:新品NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪着力解决哪些实际应用问题?
王小波:与其他光谱流式细胞仪类似,NovoCyte Opteon 特别适用于需要以单细胞分辨率测量大量生物标志物(例如>20、30甚至40标记)的大型流式检测组合的应用。一些重要的应用领域包括基础免疫学研究、细胞免疫疗法的开发和生产,以及细胞免疫治疗后患者样本的监测。
对于免疫学研究,需要一个大型、复杂的抗体组合来全面研究不同类型的免疫细胞,以及它们的功能状态,如活化、耗竭、分化和成熟。 在某些情况下,原代细胞样品可能表现出高自发荧光,与传统的非光谱流式相比,光谱流式细胞仪 Opteon 可以为低表达生物标志物提供更好的分辨率和灵敏度。
对于细胞疗法开发,需要相对多的生物标志物组合,无论流程测定是用于患者(自体疗法)或供体(同种异体疗法)免疫细胞表征,还是用于细胞疗法分析开发(开发和验证用于监测和鉴定细胞疗法的生产过程)。 光谱流式具有相对容易的独特优势,并且能够将一种或多种生物标志物添加到已经开发的panel中,以满足对个体患者进行检测的需求。
仪器信息网:对于新品的市场表现预期如何?
王小波:我们的“NovoCyte之旅”始于 10 年前,当时我们希望通过提供可供广大科学家或研究人员轻松使用的高性能台式流式细胞仪,来实现流式细胞术检测的普及化。今年发布的NovoCyte Opteon是一款具有易用性和高效工作流程的高质量光谱流式细胞仪,是这一旅程中的最新里程碑。我们对NovoCyte Opteon 在未来几年的潜力感到兴奋,它能够帮助用户生成高质量和可靠的数据,并获得更深入的生物学和细胞学见解,以推进他们的科学研究和治疗药物的开发。
(编辑:刘立东)
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下篇,王小波博士将继续围绕光谱流式的市场格局进行分享,点击查看。
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