科学家及专家们表示UPLC、质谱仪器以及信息学让他们实现了科学和商业的成功 视频剪辑集聚50余位行业领导者、研究学者和实验室管理者的发言 　　米尔福德， 马萨诸塞州 - 十月， 2009——沃特世公司(NYSE:WAT)已发布全新在线视频展示，主要涵盖对制药研发、食品安全、环境分析、运动药物、疾病发现和临床毒理学以及临床研究领域内逾50名科学家、发展合伙人和产品专家进行了引人关注的访问。该视频中，科学家们讲述了他们的研究和商业任务，他们与沃特世公司的合作关系，以及沃特世ACQUITY® UPLC超高效液相色谱，Xevo™ 和 SYNAPT™ 质谱系统， 以及 Empower™和NuGenesis™ SDMS 软件、信息学实验解决方案在促成科学研究和商业成功上的影响。可登录www.waters.com/customers 浏览沃特世视频展示，同时该视频也是迄今为止行业内最大的专业鉴定论述汇总。 　　凭借着前瞻远瞩的理念，引领科学家们和专家利用独特的平台施展他们对科学的热情，同时通过仪器和软件帮助他们实现愿望，沃特世视频展示已经向人们开启了窗口，让人们了解疾病生物学、发现新药物成分、确保饮食安全以及饮用水安全、诊断新陈代谢紊乱，并给慢性病患者带来希望。不断扩充的视频展示主要聚焦如下领先的科学家们、学术机构、独立实验室以及制造商，包括AIT Laboratories公司，Alexza 医药品， Apotex公司， 北京辐射医疗学研究院，认可实验室， Dominion Diagnostics， 杜克大学， ICON Development Solutions， 帝国理工学院， 伦敦大学国王学院， Lundebeck USA， 东北大学， 康龙化成北京新药有限公司，PharmaVite， Quotient Bioresearch， 阿姆斯特丹大学， 西班牙卡斯特隆大学， 加利福尼亚戴维斯大学， 伦敦剑桥大学， 利兹大学， 华威大学， Van Andel 研究中心， 以及Xenotech LLC等。 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世公司(NYSE:WAT)为实验室型组织提供实用、可持续的创新技术，帮助他们在全球范围内的保健服务、环境管理、食品安全以及水质等领域保持领先水平。 　　沃特世技术创新和实验室解决方案在一系列分离科学、实验室信息管理、质谱和热分析等相关领域均处于领先地位，为客户的成功提供了长远持久的平台。 　　2008 年，沃特世公司年收入达 15.8亿美元，拥有 5000 名员工，为推动全球客户的科学发现和卓越运营不懈努力。

Hongwei Xie, Weibin Chen, Martin Gilar, St John Skilton, and Jeffery R. Mazzeo Waters Corporation, Milford, MA, U.S. 前言         流感是一种呼吸道病毒感染，它是美国主要的致死原因之一，每年有超过50,000人死于流感1。流感疫苗是一种主要的流感预防措施，也是降低季节性流感发病率和死亡率的主要策略。疫苗通过结合病毒血凝素（HA）抗体为人体提供保护，血凝素在流感感染中起到关键的作用。         经批准的季节性流感灭活疫苗通常含有规定量的HAs——H1、H3和B的混合物，对应3种最常见的病毒流感A亚型的H1N1和H3N2和流感B的HA蛋白。这些HA蛋白是糖蛋白类，每个糖基化位点均含有多种N-糖基化基序且每个位点含多种糖形。由于HAs在流感结合至宿主细胞，即感染过程中的重要决定作用，HAs中糖基化的精细鉴定和监测对疫苗的开发和生产都非常重要。         目前，N-糖基化鉴定方法包括释放的游离聚糖分析2-4和完整质量分析5-7。这些方法对于分析含确定糖基化位点的糖蛋白类是有效的，如单克隆抗体。聚糖谱分析可在完整蛋白水平（完整质量分析）或作为碳水化合物（游离聚糖谱）进行。由于糖基化的天冬酰胺（N）残基的质量在去糖基化时增加了1 Da，糖基化位点通常可由经酶（通常是PNGase F）去除聚糖部分后的肽谱来检测。          然而，这些方法很难区分同一蛋白不同糖基化位点上的聚糖分子，因此用这些方法表征含多个糖基化位点的糖蛋白，如HAs，是极富挑战的。而且，如疫苗等复杂样品均含有带-NXS/T-基序的多个N糖基化位点。由于N位点修饰后1Da 质量增加可能是由其他位点糖基化或脱酰胺作用造成，通过肽谱确定N-链糖基化位点是非常困难的。        采用UPLC®革新的分离能力，经由LC/UV-MS系统分析了单克隆鼠lgG1抗体胰蛋白酶消化所得胰蛋白酶肽的四种主要的N-糖形9。结果显示该方法可检测并量化糖基化。且采用该方法可同时鉴定糖基化位点和聚糖分子。        在以前的研究中10-11，我们证实采用UPLC/MSE获得的胰蛋白酶肽谱能够准确的分离和鉴定位点特异性修饰，如N-去氨酰作用和M-氧化。        在本应用实例中，我们证明UPLC/MSE可区分离并鉴定由昆虫细胞-杆状病毒重组表达系统（BEVS）表达的流感疫苗候选物HAs蛋白的N-糖基化。糖肽和糖形可由ACQUITY UPLC®系统在多肽水平分离，并由SYNAPT™ MS系统在线检测。UPLC/MSE数据经BiopharmaLynx™ 软件处理并报告N-糖基化信息。该方法改进了表征质量并减少数据处理时间。此外，该方案有一个为非专业研究者提供了解决这类问题的通用流程，工作流程化可使整个团队受益。 实验 由昆虫细胞BEVS系统表达的含有HA蛋白H1，H3和B的流感疫苗候选物经胰蛋白酶消化。肽段混合物含有N-糖肽及来自于目的蛋白的其它肽段。制备的过程包括： 1. 蛋白溶解于0.05% RapiGest™ SF、pH 7.4的溶液中，80 °C 加热10 min变性 2. 56°C，DDT还原30 min 3. 黑暗，室温下采用碘乙酰胺烷基化30 min 4. 37 °C，pH 7.4下，胰蛋白酶消化4 hrs 5. 加入0.1%甲酸终止反应，并灭活胰蛋白酶。        消化产物经汗0.1%甲酸的5%乙腈（ACN）溶液稀释成0.2 μg/μL，用于UPLC/MS分析。        UPLC/MSE实验采用ACQUITY UPLC-SYNAPT质谱偶联系统分析。UPLC系统配置2.1 x 150 mm、BEH300 C18 1.7-μm肽分离柱。取20-μL含约4 μg肽混合物进样，采用120-min 梯度洗脱（1至40% ACN0.1% FA溶液），流速0.2 mL/min，柱温60 °C。重复进样四次。        采用ESI阳离子模式获得MSE 数据，低碰撞能（5 V）采集肽前体（MS）数据和提高能量（20-40V之间调整）获得肽片段（MSE）数据。扫描时间为0.5秒（总工作周期1 sec）。分析中各种参数为：柱压3.0 kV，源温度100 °C，锥孔电压 37 V，且锥孔气流10 L/h。该系统调至最低分辨率10,000（V-模式），并采用100 fmol/μL Glu1-fibrinopeptide B（GFP）校正, GFP由含0.1% FA 50:50 ACN/水溶液配制，通过LOCKSPRAY通道每分钟进样一次以确保高质量准确度。         采集的数据经BiopharmaLynx, v. 1.2，MassLynx™ 软件的应用管理程序进行处理，采用strict tryptic cleavage rule，且设置cysteine carbamidomethylation为固定修饰，以及N-糖基化作为可变修饰。其它BiopharmaLynx 方法设置参照我们以前发表的文章。12 结果和讨论        据报道，昆虫细胞系表达的糖蛋白具有两种主要的N-聚糖类型：少甘露糖苷结构（Man (1-3) GlcNAc2 or Man (1-3) GlcNAc[Fuc]GlcNAc）和寡聚甘露糖结构（Man(5-9)GlcNAc2），这里Man表示甘露糖，GlcNAc为N-乙酰葡糖胺，而Fuc是海藻糖。BiopharmaLynx含有11种可能的可变N-糖基化修饰糖形。HA 蛋白H1、H3和B的可能的N-糖基化位点（含-NXS/T基序）数目分别为9、12和10。对采集的UPLC/MSE数据经BiopharmaLynx处理后，可分别判定H1、H3和B 7、4和6个N_糖基化位点。每个N_糖基化位点可能有多种连接的糖形。以下我们挑选出3个典型样品（其中一个来自于疫苗样本中的HA蛋白），以阐释UPLC/MSE 是如何用于分离和表征糖肽和糖形。         图1显示了HA蛋白B中糖基化和未糖基化的胰蛋白肽T8（分别命名为B_T8*和B_T8，在后面的文章中，所有的糖基化肽均采用型号（*）标记以表明相应的修饰形式）的分离和鉴定。        由于添加的糖基团增加了亲水性，B_T8*洗脱较B_T8早（图1A）。胰蛋白酶肽序列由MSE谱确定（图1B和1C）。         B_T8*的糖基化由一系列低m/z 范围的特征糖离子m/z 138.05，m/z 204.09，m/z 366.14和m/z 528.12展示，并由y28离子确证。y28糖基化修饰前后1038.36的质量变化与一种聚糖分子质量相对应（-Man3NAcGlc[Fuc]NAcGlc）。高m/z 范围的糖基碎片离子可以给出所连接聚糖分子的进一步结构信息。基于BiopharmaLynx的质谱信号强度和前体物质的提取离子流色谱面积，B_T8*的相对浓度为 20%。 图1. HA蛋白B 中糖基化和未糖基化胰蛋白酶肽段 T8的分离和鉴定 A) 前体的提取离子色谱 B) B_T8（未指定离子m/z 1199.65 和m/z 1023.5为在疫苗制剂的过程中加入的Twin-20碎片）的MSE谱 C) B_T8*MSE 谱         与B_T8*不同，大多数已经鉴定的糖肽类是由多种糖形完全糖基化的，如HA蛋白H1肽段T24，未检测出未修饰的H1_T24，但H1_T24*的四种修饰糖形经层析法获得分离和鉴定（图 2A）。糖形的洗脱顺序与聚糖的大小有关。聚糖越重，这种聚糖形的糖基化肽洗脱越早。该肽含有两个N位点，但MSE 谱确定糖基化仅发生在含有-NSS-基序的N286，而含有-NVH-基序的N293则无糖基化修饰。这一现象与N-糖基化仅发生在含有-NXS/T-基序的N位点的定律一致。图2B中显示了H1_T24*-Man3NAcGlc2的MSE谱。同样的，低m/z范围的特征糖离子和高m/z范围的糖基碎片离子进一步确认了糖基化并提供了聚糖分子的结构信息。  图2. HA蛋白H1中糖肽T24*的糖形的分离与鉴定 A) 前体的提取离子色谱 B) H1_T24*-Man3NAcGlc2 MSE 谱 # –特征糖离子            然而，并非所有已鉴定的糖形均可用层析法分离，如HA蛋白H3的胰蛋白酶肽T21中经鉴定的5种糖形（见图3A），但这些糖形在91.65 min 的同一个LC峰被洗脱。它们在提取离子色谱的保留时间仅有微小差异（~ 2秒）（数据未显示）。这些证据和上述的例子表明糖形的色谱行为与聚糖连接的肽序列的性质有关。H3_T21的肽段序列和糖基化可由MSE 谱确定。图3B中展示了一个H3_T21*-Man9NAcGlc2 MSE谱的例子。 图3. HA蛋白H3中糖肽T21*糖形的分离和鉴定. A） MS谱 B） H3_T21*-Man9NAcGlc2.的MSE谱 # – 特征糖离子 讨论         本文的数据表明UPLC/MSE 可分离并鉴定流感疫苗样品血凝素糖蛋白中多个糖肽及多种糖形。由于HA 蛋白有多个糖基化位点和多种糖形，传统的方法如聚糖分析和完整质量分析很难胜任流感疫苗样本糖基化的鉴定。        与传统的糖基化鉴定方法不同，本研究中糖基化位点已采用MSE技术清晰的进行鉴定。MSE中的糖碎片离子的聚糖分子提供了有用的结构信息。此外，这些方法无需任何额外的富集或纯化流程，获得的数据可由BiopharmaLynx自动进行处理。        进一步的优化可使得该方法不仅适用于复杂样品，如流感疫苗的糖基化的鉴定，也可作为一种鉴定糖蛋白的快速和常规方法。 参考文献 1. Stevens J, Corper AL, Basler CF, Taubenberger JK, Palese P, Wilson IA. Science. 2004; 303:1866-1870. 2. Yu YQ, Gilar M, Kaska J, Gebler JC. Rapid Commun. Mass Spectr. 2005; 19:2331-6. 3. Ahn J, Yu YQ, Gilar M. Rapid sample cleanup method development for 2-AB labeled N-linked glycans released from glycoproteins. Waters Application Note. 2008; 720002622en. 4. Gillece-Castro B, van Tran K, Turner JE, Wheat TE, Diehl DM. N-linked glycans of glycoproteins: a new column for completed resolution. Waters Application Note. 2009; 720003112en. 5. Oliviva P, Chen W, Chakraborty AB, Gebler JC. Rapid Commun. Mass Spectr. 2008; 22:29-40. 6. Chakraborty AB, Berger SJ, Gebler JC. Characterization of an IgG1 monoclonal antibody and related sub-structures by LC/ESI-TOF-MS. Waters Application Note. 2008; 720002107en. 7. Chakraborty AB, Chen W, Gebler JC. Characterization of reduced monoclonal antibody by online UPLC-UV/ESI-TOF MS. Waters Application Note. 2009; 720002919en. 8. Orlando R. Rapid Commun. Mass Spectr. 2007; 21:674-682. 9. Gillece- 9. Castro BL, Wheat TE, Mazzeo JR, Diehl D M. UPLC technology for the analysis of antibody glucopeptides. Waters Application Note. 2008; 720002382en. 10. Xie HW, Gilar M, Gebler JC. Analysis of deamidation and oxidation in monoclonal antibody using peptide mapping with UPLC/MSE. Waters Application Note. 2009; 720002897en. 11. Xie HW, Gilar M, Gebler JC. Anal. Chem. 2009; 81:5699-5708. 12. Ahn J, Gillece-Castro BL, Berger S. BiopharmLynx: A new bioinformatics tool for autumated LC/MS peptide mapping assignment. Waters Application Note. 2008; 720002754en. 13. Tomiya NT, Narang S, Lee YC, Betenhaugh MJ. Glycoconjugate J. 2004; 21:343-360.  

Claude R. Mallet, Dimple D. Shah , 沃特世公司 Milford MA U.S.A. 简介         在1938年，美国政府通过了联邦食品、药物和化妆品法令(FFDCA, FDCA, 或FDA)，赋予美国食品和药品监督管理局(FDA)督察食品、药品和化妆品的权利。如今，美国FDA管理着除了美国农业部管理的肉类、家禽肉和某些奶制品之外的国内和进口的所有食品。现在，所有的牛奶都要由FDA、美国政府和牛奶生产商共同努力监控药物残留。在2007年的财政年报1中，有超过400万的样品都要分析广大范围的抗生素，如内酰胺、大环内酯和四环素。例如，美国FDA建议牛奶中某种大环内酯类抗生素替米考星的最大残留量(MRL)50ug/kg，这个标准也被欧盟接受。许多国家都遵从美国食品和农业联合组织/世界卫生组织(WHO)的40μg/kg的最大残留量，而不是为每种药物设置各自的最大残留量。       大环内酯类是一组药物，它的活性来源于大环内酯环的存在，而大环内酯环上有可能有一个或多个脱氧糖，经常为二脱氧甲基已糖和脱氧糖胺。内酯经常是14-、15-或16-环的。大环内酯类抗生素被广泛应用于兽医药物，以治疗许多疾病，例如哺乳期奶牛的呼吸道疾病、临床症状不显的乳腺炎，或者它们可以被作为饲料添加剂以促进生长。如果牛奶提取期太短，抗生素残留可能仍然存在，可对消费者带来直接的毒副作用(过敏反应)2。 图1.大环内酯类抗生素 离线的SPE萃取方案         传统上，微生物检测3被用来监测食品基质中的抗生素。这些方案都有很好的定量结果，但越来越缺乏高度的专属性。随着现代实验室LC/MS或LC/MS/MS系统的普遍使用，多残留方法是更被常规工作所认可的方法。        包含食品基质的分析方案通常是很复杂的，需要数个小时的手动操作。例如，饮用水方案(较低的样品复杂度)由下列步骤组成：直接上样到SPE小柱、少量的清洗步骤、洗脱，以及最后的蒸干和用流动相复溶。象食品样品之类的固体基质(较高的样品复杂度)必须先用水溶液或有机提取缓冲液均质提取，然后是一些离心步骤、液液萃取(可选项)，最后在实 施SPE萃取方案前用水溶液稀释。关于牛奶分析，最常用的萃取方案是用乙腈沉淀蛋白4。混合物然后离心数分钟。上清液可以用其它的萃取技术进一步提纯。 离线的SPE牛奶方案： 步骤1:加入5mL的牛奶到50-mL的离心管中。 步骤2:加入15mL的乙腈。 步骤3:涡旋并在3200RPM转速下离心15min。 步骤4:转移上清液到50-mL的离心管中。 步骤5:加入20mL的正己烷。 步骤6:涡旋15min。 步骤7:在3200RPM转速下离心15min。 步骤8:移去正己烷层。 步骤9:蒸发乙腈/牛奶上清液到3mL。 步骤10:加入15mL 0.1M、PH为8.0的硫酸盐缓冲液。 步骤11用10mL的甲醇活化Oasis® HLB(6cc)。 步骤12:用10mL的水活化Oasis® HLB(6cc)。 步骤13:用10mL2%的NaCl活化Oasis® HLB(6cc)。 步骤14:用2mL 0.1M、PH值为8.0的磷酸盐活化Oasis® HLB(6cc)。 步骤15:上载复溶的样品(步骤10)。 步骤16:用5mL的水清洗。 步骤17:用5mL40%的甲醇水溶液清洗。 步骤18:使Oasis HLB流干5min。 步骤19:用5mL95%的甲醇水溶液洗脱。 步骤20:蒸发近干(45min)。 步骤21:用1mL的初始条件流动相复溶。 步骤22:用0.45μm的聚偏二乙烯氟化物(PVDF)过滤萃取物。  在线的SPE萃取方案：         以前的出版物(在线SPE/LC/MS/MS部分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)介绍了新颖的自动化萃取/分析技术：Waters AquaAnalysis 系统。总体解决平台带来了多种好处：减少手工操作、减少溶剂消耗和减少样品体积。使用在线的SPE/LC/MS/MS技术平台省去了消耗时间的蒸干/复溶步骤。         在线的SPE/LC/MS/MS技术不仅仅适合于饮用水分析。饮用水样品可直接上样到自动进样器，然后就是完全自动化的电脑控制的萃取/分析步骤。对于食品分析，固体样品要先转变成液体形式。分析开始于均质化以释放被束缚的分析物到液相萃取缓冲液。均质化需要经过离心步骤，然后上清液被转移出来。在这时，目标分析物以合适的形式存在，以便于其它的净化、浓缩或萃取步骤，例如，液液提取(LLE)和SPE。通过使用软件控制下的在线SPE方案，食品样品的萃取/分析过程现在仅需要均质化、离心和稀释步骤。 在线的SPE牛奶方案： 步骤1:加入1mL牛奶到50mL的离心管中。 步骤2:加入20ul一定浓度的氨水。 步骤3:加入2ml的乙腈(2:1的比例)。 步骤4:涡旋并在3500RPM的转速下离心15min。 步骤5:转移2mL的上清液到20ml的进样瓶。 步骤6:加入18mL的水。 步骤7:进样5mL。 实验       大环内酯所用的MRM条件都列在了表1中。使用的SPE萃取柱是Waters® Oasia HLB 2.1x20 mm，25μm，中性pH值上样，流动相(无添加物)。使用的分析柱是XBridgeTM C18 2.1x50 mm 3.5μm，低pH值流动相洗脱。清洗和再活化参数都列在了下面。   表1.大环内酯的MRM条件 SPE和LC工作条件： 载样泵： 管路A:100%水 管路B:100%甲醇 载样流速： 4.0 mL/min 清洗液： 20%的甲醇/乙腈(30/70)+0.5%甲酸 再平衡泵： A:50/50的甲醇/丙酮 B:80/20的乙酸乙酯/丙酮 C:80/20的正己烷/丙酮 再平衡流速：4.0 mL/min 萃取柱： Oasis HLB 2.1x2 mm, 25.0μm 分析柱： XBridge C18 2.1x50 mm, 3.5μm 结果和讨论 图2为添加了0.5ppb每种抗生素的牛奶样品的具有代表性的提取离子色谱图。抗生素在微量水平都具有良好的信号和峰形。对于食品样品，样品的复杂度要高于饮用水样品，而且清洗步骤需要优化以最大程度的清除干扰物质，而不洗脱掉所感兴趣的分析物。图3为添加了100ppb红霉素，分别用5%、10%、20%、30%和40%甲醇清洗的色谱图。在图2中，20%甲醇清洗与5%甲醇清洗相比，会产生更高的信号。5%甲醇的弱信号可归因于离子抑制效应。可是，当清洗步骤中的有机相比例增加的过多时，信号的灵敏度由于部分洗脱而有下降趋势。 图2.添加了0.5ppb的牛奶的提取离子色谱图 图3.牛奶提取的优化清洗 图4为红霉素浓度从1.0ppb到500.0ppb、线性系数为0.9902的校正曲线图 图4.红霉素的校正曲线         表2是在线和离线SPE萃取方案肩并肩的对比，从文献到处理天然的牛奶样品到适于LC/MS或GC/MS分析的理想形态。当评价在线SPE/LC/MS/MS和离线方案时，通常的萃取程序和溶剂、实验室人员和时间的整体应用都是很重要的。其它的食品样品有各种各样的结构，在SPE萃取前可能需要其它的处理程序。例如，牛奶样品在用SPE装置进一步净化前需要简单的蛋白沉淀和离心。对于像水果和蔬菜这样的固体样品，使用萃取缓冲液的低温碾磨或均质化步骤是优先考虑的方法。对于通常的萃取程序，很容易找到每个萃取步骤都使用广大范围的体积和时间的文献报道。通常，使用SPE方案，上样、清洗和洗脱体积都根据SPE装置的床台尺寸估量。这可以首先保证在每个步骤中SPE吸附剂的整体润湿。一旦这个数值定下来，这可以增加数倍(依赖于化合物)确保多个体积置换以使清洗步骤最小化清除干扰和洗脱步骤最大化回收率。在实际的操作中，柱床上样量诱捕能力的增加需要SPE程序中体积的增加；这最终会增加样品制备时间和溶剂消耗量。 表2. 牛奶样品的离线和在线萃取方案的溶剂消耗量和处理时间 结论         在过去的这些年里，许多国家已经尽了很大努力来进一步提高他们的国内和进口的食品供应的安全性，以使消费者能够享受安全的食品供应。正因为这样，许多分析方法都可以得到，并在常规的分析中被使用。随着最小化溶剂使用量和最大化实验室人员使用的需求增加，自动化平台的使用绝对会满足这些要求。这篇应用文献描述了牛奶样品中抗生素的自动化萃取和分析。传统的萃取前处理步骤是极其消耗时间的；他们需要更大数量的化学品和各种各样的试剂。使用Waters AquaAnalysis 系统处理牛奶样品的时间大约为20min，这与离线方案相比可以减少70-90%的时间。 参考文献 1. U.S. FDA National Milk Drug Residue Database. Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Drug Administration, 2007. Available online: http://www.cfsan.fda.gov/~ear/p-mis.html 2. W A Moats, M B Medina. Veterinary Drug Residues, ACS Symposium Series 636, American Chemical Society, Washington, DC, 1996, p.5. 3. 43rd Meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives. Evaluation of Certain Veterinary Drug Residues in Food, WHO Tech. Rep Ser., No 855, 1995, p.85. 4. J Wang, D Leung, S P Lenz. J. Agric. Food Chem. 54: 2873, 2006. 5. M Dubois, D Fluchard, E Sior, P H Delahaut. J. Chromatogr. B. 753: 189, 2001. 6. S B Turnipseed, W C Andersen, C M Karbiwnyk, M R Madson, K E Miller. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22: 1467, 2008.

  Claude R Mallet, Dimple Shah Chemical Analysis, Waters Corporation, 34 Maple St., Milford, MA 01757-3696 概述         世界各国为保证公民的健康安全，都时刻高度警惕。在当今的农业实践中，肉类动物养殖严重依赖药物的使用，这对于动物的健康和该产业经济状况是至关重要的。兽用药物或残留会进入人类食物，所以人们在使用了接受过药物治疗动物的产品后，会增加患病的风险。因而，许多政府机构已经规定了动物组织、牛奶和其它食物产品中各种兽用药物的最大残留量（MRLs）。        与饮用水不同，食物产品中药物残留的分析需要复杂的样品提取和净化方案，以使基质效应最小化。但是，有一个主要缺点：就是需要大量的人力劳动以得到干净的提取物。一个典型的提取方案通常开始于将样品在水或有机缓冲液中混匀。然后离心、浓缩以及净化该混合物，而净化需采用各种提取技术例如液液萃取、分散技术或使用SPE等等。随着现在可用系统的发展，许多步骤都可以自动化，这就带来了直接的好处，减少了许多为得到最终提取物所需要的体力劳动。使用在线的SPE/LC/MS/MS系统，粗糙的提取可以被进一步精炼。        此研究将展示在SPE/LC/MS/MS系统在牛奶的药物残留分析中的性能。牛奶样品先用乙腈（1：1的比例）沉淀蛋白，然后在3500rpm转速下离心15min。然后用3ml的水稀释收集到的上清液。稀释是为了降低有机相的比例到20%，以避免上样时流穿。        所有体积（5ml）进样到在线的SPE/LC/MS/MS系统以富集、净化和分析。低ppb水平的结果显示了很好的信噪比。 大环内酯类抗生素  离心SPE方案 步骤1：转移5ml牛奶到离心管 步骤2：添加15ml乙腈 步骤3：涡旋并且在3200RPM转速下离心15min 步骤4：转移乙腈上清液到第二个离心管 步骤5：添加20ml正乙烷 步骤6：涡旋15min 步骤7：在3200RPM转速下离心15min 步骤8：移去正乙烷层 步骤9：挥干乙腈上清液到3ml 步骤10：添加15ml0.1M，PH值为8.0的NaPO4缓冲液 步骤11：用10ml甲醇活化SPE 步骤12：用10ml水活化SPE 步骤13：用10ml2%的NACL溶液活化SPE 步骤14：用2ml0.1M，PH值为8.0的NaPO4缓冲液活化SPE 步骤15：上样复溶后的样品（步骤10） 步骤16：用5ml水清洗 步骤17：用5ml40%的甲醇水溶液清洗 步骤18：干燥SPE5min 步骤19：用5ml95%的甲醇水溶液洗脱 步骤20：挥干至干（45min） 步骤21：用1ml的起始流动相复溶 步骤22：用0.45μ的PVDF膜过滤提取物 在线SPE方案 步骤1：转移1ml牛奶到离心管 步骤2：添加20μL浓缩的氨水 步骤3：添加2ml乙腈（2：1的比例） 步骤4：涡旋并且在3500RPM转速下离心15min 步骤5：转移2ml的上清液到20ml的样品瓶 步骤6：添加18ml的水 步骤7：进样5ml 在线实验方案 载样泵：A：100%的水 B：100%的甲醇 载样/清洗/再平衡流速：4.0ml/min 清洗：20%的甲醇水溶液 洗脱泵：A：100%水+0.5%甲酸 B：70/30的乙腈/甲醇+0.5%甲酸 洗脱流速：0.4ml/min 再平衡泵：A：50/50的甲醇/丙酮 B：80/20的乙酸乙酯/丙酮 C：80/20的正乙烷/丙酮 萃取柱：2.1x20 Oasis HLB 25μm 分析柱：2.1x20 Xbridge C18 3.5μm 结果     图1：添加了0.5ppb的牛奶的提取色谱图 图2：罗红霉素的优化清洗 溶剂消耗和处理时间的对比 线形 图3：浓度范围从1到500ppb的红霉素的校正曲线图 结论 -完全自动化的提取和分析 -ppb以下的检测水平 -样品处理时间大约为20min -人力劳动减少量高达90% -宽PH值范围的SPE和LC吸附剂 -可使用化学的广发选择性 -高水平的重视性和耐受性 参考文献： 1. S.B Turnipseed, W.C. Andersen, C.M Karbiwnyk, M.R. Madson, K. E. Miller, Rapid Commun. Mass Spectrom. 2008; 22: 1467 2. M. Dubois, D. Fluchard, E. Sior, Ph. Delahaut, J. Chromatogr. B. 2001; 753: 189 3. J. Wang, D. Leung, S. P. Lenz, J. Agric. Food Chem. 2006; 54: 2873

超越HPLC        在过去30年间，高效液相色谱法（HPLC）已经成为世界各地实验室应用最广泛的技术之一。这是因为HPLC是一种强大的多用途技术。它的强大体现在其应用范围广泛，覆盖从毛细管级到制备级的各个范围；在相关的检测技术范围内，它是一种多用途技术，能检测多种化合物。从根本上说，目前，HPLC技术的发展方向主要有三个方面：化学、检测器和系统／数据管理。色谱法在这些方面的进展使该技术得到了广泛认可。尽管如此，色谱技术仍有进一步发展的空间。那么，HPLC的未来将是怎样一幅图景？后续有哪些发展成果能扩大和延展这种公认技术的功用？ UPLCTM的定义          液相色谱法的前沿技术正在研发中。北加利福尼亚大学的J. Jorgensen博士和杨百翰大学的M. Lee博士最近都发表了关于色谱实验室未来分析范围的深刻见解。他们的研究为分离科学描绘了一幅新图景。通过使用比以前小得多颗粒，使分离过程达到了一个新的终点。该方法的基本原理体现在范第姆特方程中。范第姆特方程是一个描述线速度与塔板高度（柱效）关系的经验式。         鉴于颗粒大小是变量之一，因此，它可用来描述各种颗粒大小的理论性能（图1）。从图1可以看出，一旦填料的颗粒大小低于2 μm，色谱技术就能达到一个新水平：不仅柱效更高，而且随着流速的提高不会使柱效降低。 图1：这些范第姆特曲线表明过去30年间颗粒大小的减小过程。理论塔板高度的降低意味着效率的提高。但即使是2.5 μm的颗粒，其效率也会在较高的流速下开始下降，而系统反压则会相应增高。如果使用UPLCTM技术和2 μm以下的颗粒，那么即使在较高的线速度下，效率也能得以保持。更短色谱柱和／或更高流速的使用加快了分析速度，提高了分辨率和灵敏度，从而使现在有可能充分利用色谱原理进行分离。         这就呈现了这样一种情景：峰容量和分离速度均被提高至新的极限。简言之，峰容量被定义为色谱法每单位时间内所能分辨的峰数量。峰容量和分离速度等性能指标得到提高后的色谱法被称为超高效液相色谱法，或UPLCTM。图2说明了当颗粒大小从5 μm减小至1.7 μm时，增加的峰容量对色谱分离性能的影响。 图2：比较5 μm颗粒与1.7 μm颗粒。峰容量和分辨率显著增加。 速度、灵敏度和分辨率         源于更小颗粒的额外效率可带来更多的明显益处。更短的色谱柱或更高的流速加快了速度，同时小颗粒也提高了分辨率。对于任何给定的分离，都可通过调节这些变量而达到速度和分辨率的最佳组合。图3显示了UPLC与HPLC的速度比较结果。该实验比较了相同分辨率下，3 μm颗粒和1.7 μm颗粒的分离速度；结果表明较小颗粒的分离速度更快。效率的提高还带来了进一步的益处：灵敏度提高。由于分离过程中的区带变窄，因此分析物会更集中在检测点上。当考虑UPLC的仪器设计要求时，将对这一点进行更详细的论述。         应该指出的是：3 μm是15 cm长普通色谱柱颗粒大小的极限。这是在色谱柱达到最佳流速而又不超出市售仪器（使用任何配比的甲醇－水混合溶剂）的压力限制范围的条件下，运行系统所能使用的最小颗粒大小。（注意：迄今为止，用于HPLC的最小颗粒是0.67 μm [3]。）          如上文所述，范第姆特方程式（及其曲线）表明有必要使用2 μm以下的颗粒，以实现柱效的提高。因此，需要能使UPLC构想得以应用于色谱实验室的技术革新2。 图3：顶部的色谱图是分别使用普通（3 μm）HPLC和1.7 μm UPLC得出的5组分混合样品叠加图谱。底部的色谱图是分离过程的前6分钟的展开图，表明UPLC提高了分离速度而又使分辨率保持不变。UPLC的溶剂用量也大幅度减少。 更小的颗粒，更大的峰容量 研制并填充2 μm以下的颗粒至可重现而耐用的色谱柱中本身就是一个挑战。图4显示出了目前实验室常用的5 μm颗粒与建议用于UPLC柱的更小的1.7 μm颗粒的明显差异。目前，非多孔型1.5 μm颗粒已经上市。虽然这类颗粒效率较高，但它们的缺点是表面积较小。表面积小会导致载样量小和保留时间短。为了与HPLC保持相近的保留时间和载样量，UPLC必须使用多孔型颗粒。UPLC需要一种新颖的耐高压多孔型颗粒。填充床的均匀性也是至关重要的；特别是当较短的色谱柱用以保持分辨率的稳定，而同时又要达到加快分离速度的目标时。另一项要求是色谱柱的内表面必须足够光滑，以便于填充较小颗粒。应重新设计色谱柱两端的筛板，使之既能留住小颗粒又能避免堵塞。  图4：为了说明5 μm颗粒和1.7 μm颗粒的显著差异，该扫描电子显微图将两种颗粒与60 μm的人体头发相比较。在测量距离相同时，该头发的直径约等于12个5 μm的颗粒，33个1.7 μm的颗粒。 UPLC系统的设计要求         为了达到颗粒小、峰容量大的分离效果，需要比目前使用的HPLC仪具有更广的压力范围。在能达到最大效率的最佳流速下，对于10 cm长装有1.7 μm颗粒的色谱柱，计算得出的压力降是~15,000 psi。因此，需要一个能在该压力下传送溶剂的泵。另一方面的考虑是在这些条件下，溶剂的可压缩性将会变得显著，特别是在多溶剂和梯度分离条件下。UPLC的溶剂传送系统应不仅仅具有高压泵抽吸功能，同时在等度和梯度分离模式下使用各种溶剂，溶剂传送系统必须能抵消溶剂可压缩性引起的大范围潜在压力波动，以实现平稳而可重现的流体输送。         进样也是很关键。普通进样阀，不论是手动的还是自动的，都不具有极端压力下的耐用功能。进样的可重现性和线性的典型性能标准是分析应用所需要的，但其它特征也是必要的。为保护色谱柱免受极端压力波动的影响，进样过程应尽可能排除脉冲干扰。仪器的系统体积要小，以减小所检测样品可能的区带展宽。在快速进样循环中，UPLC能以最大速度、较大的样品通量进行工作，并可长时间不需人工照看。同时低体积进样量和最小的交叉污染很好匹配了灵敏度的提高。         理论情况下，配备1.7 μm颗粒的UPLC系统能产生半峰宽小于1秒的检测峰。这给UPLC检测带来了挑战。首先，检测器必须具有较高的采样速率，以在检测峰通过时捕捉足够的数据点，从而对分析物的检测峰进行准确而可重现的识别（和积分）。其次，检测器必须有最小的扩散体积，以确保分离效率不降低。检测器的光学部件也必须具有能体现UPLC灵敏度优势的性能指标。从概念上讲，对于不同的检测技术，UPLC检测的灵敏度应是HPLC分离灵敏度的2-3倍（图5）。例如，质谱检测会极大得益于UPLC的性能特征。检测峰浓度的提高以及较低流速（不需分流）下减少的色谱扩散将会促进离子源效率的提高，从而使与UPLC相连的质谱仪的灵敏度至少提高3倍。   图5：在进行高峰容量的色谱分析时，降低分析物的色谱展宽可能有助于提高灵敏度。 全面的系统方法          通过思考色谱过程以及如何将这些原理应用于UPLC后明显发现：除了化学、泵、进样器和检测器之外，还需要对系统进行考虑。系统的体积至关重要。如果要在色谱分析过程中保持UPLC分离的高性能，则UPLC的系统总体积必须大大低于目前的HPLC系统。还有一点也关键：那就是不仅要仔细考虑上文提到的系统部件的性能规范，而且需要仔细考虑连接管和接头配件。为了使UPLC的良好性能得以广泛应用，有必要制定全面的系统方法，其中既包括所需的性能规范，也包括对附件变量的控制。         在色谱实验室可充分发挥UPLC系统的优势，给实验室带来更多益处。用于特征分析的高通量库筛选能以较快的速度或较好的分辨率完成，而这两点都能转变为效率的提高。代谢物的识别和生物分析将得益于速度、分辨率和灵敏度的提高。肽图时间可显著缩短以加快表征过程。对于肽研究而言，UPLC系统得出图谱的峰容量更大，比目前使用的HPLC得出的图谱更精确。稳定性指示方法以及方法的总体开发将会使每次进样得出更多的信息，同时还会缩短分离时间。色谱分离技术的最普遍用途——定量分析可以得到更快的的速度，更好的基线分离，从而将会更容易、更可重现进行定量积分，增加了实验室的生产力和可信度。 UPLCTM：重新定义色谱实验室 许多科学家曾一度遇到分离障碍，而目前正致力于突破普通HPLC的极限；超高效液相色谱法为扩大和延展这种广泛应用的分离技术提供了可能（图6）。由于UPLC技术能实现提高液相色谱速度、分辨率和灵敏度的承诺，为每次分析提供更多的信息；因此，该技术将会得到实验室的广泛认可。  图6：UPLC呈现出全新的速度、分辨率和灵敏度，将会重新定义色谱实验室。 参考文献 [1] Anton D. Jerkovich, J. Scott Mellors, and James W. Jorgenson, "The Use of Micrometer-Sized Particles in Ultrahigh Pressure Liquid Chromatography," LCGC North America Volume 21, Number 7 (2003). [2] N. Wu, J.A. Lippert, and M.L. Lee, "Practical Aspects of Ultrahigh Pressure Capillary Liquid Chromatography," J. Chromatogr. 911, 1 (2001). N. Wu, D.C. Collins, J.A. Lippert, Y. Xiang, and M.L. Lee, "Ultrahigh Pressure LiquidChromatography/Time-of-Flight Mass Spectrometry for Fast Separations," J. Microcol. Sep. 12, 462 (2000). [3] J. M. Cintron, L. A. Colon, "Organo-silica Nanoparticles Used in Ultrahigh- Pressure Liquid Chromatography," The Analyst, 127 (2002) 701 - 704.

　　2009年9月11日，沃特世(Waters)公司总体解决方案全国研讨会第二站在杭州市隆重召开。研讨会从环境安全、食品检测、药物开发、生物制药等多个研究领域入手，旨在为用户提供系统的解决方案，有效地提高工作效率。此次研讨会共吸引了180余名人员参加。沃特世公司的华中区运营总监杨子誉先生、中国区市场推广经理张立猛先生、市场拓展部主管蔡麒先生、应用工程师耿霞女士等十余人出席了会议，浙江色谱学会理事长任一平教授作为特邀嘉宾出席会议并进行了精彩的演讲。 会议现场 　　除了介绍沃特世公司的企业文化，公司产品及服务外，此次研讨会还就“如何帮助用户获得成功”，“如何应对日益复杂的样品和更严格的法规对分析实验室的挑战” ，“分析实验室实战探讨”，“沃特世最新技术进展在食品、制药以及环境分析领域的应用”等几方面展开了深入的研讨。本次研讨会的特邀嘉宾——浙江省色谱学会主任任一平教授做了题为“UPLC®在食品安全中的应用”的讲座，就HPLC和UPLC不同柱子的比较、各种农作物中易污染的真菌毒素、婴幼儿食品和乳粉黄曲霉毒素M1的测定、婴幼儿配方乳粉中α—乳白蛋白和β—乳球蛋白的测定(高效液相色谱—质谱联用法)等问题进行了详细阐述。 　　作为全球知名的液相色谱、质谱和实验室信息管理系统的专业公司，沃特世为用户提供仪器、化学消耗品、软件和技术支持服务的整体解决方案。在全球领域内，沃特世公司的解决方案在制药、蛋白组学、临床医学、食品安全、环境保护、生物制药等各个领域已经拥有广泛的应用。沃特世公司在六大领域、将近二十个分支里提供的解决方案凝聚着公司51年的心血，在研究过程中，沃特世公司一直把用户提出的问题作为发展对象进行研究。并一直和所有的用户保持紧密的联系，根据用户提出的困难和要求去改进和设计仪器，研发新的解决方案，以帮助用户实现他们所在领域的成功。 沃特世公司华中区运营总监杨子誉先生介绍沃特世公司 沃特世公司解决方案在制药行业应用介绍 　　今年沃特世公司当选为今年美国《商业周刊》全球50大最有价值的公司之一，这50家公司都是行业技术的领先者，能带动整个行业的发展。世界第一台GPC由沃特世公司发明，世界第一台商用化HPLC由沃特世发明，世界上第一台UPLC由沃特世发明，事实证明，沃特世公司一直走在行业的前沿。 浙江省色谱学会主任任一平教授介绍UPLC在食品安全中的应用 　　沃特世公司总体解决方案专题研讨会计划在全国的福州(9月10日)、杭州(9月11日)、沈阳(9月15日)、成都(9月16日)、苏州(9月17日)、重庆(9月18日)、武汉(9月22日)、西安(9月23日)、昆明(9月24日)、哈尔滨(9月25日)共十个城市举办。研讨会杭州站得到了杭州和周边城市客户的广泛关注，相信沃特世的此番全国研讨必将对其客户日后的工作和科研产生重要帮助。 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世(Waters)公司为以实验室为基础的企业提供实用、可持续的创新技术，帮助它们在全球范围内的生命科学、环境保护、食品安全、水质监测等领域保持领先水平，获得业务优势。沃特世公司技术创新和实验室解决方案在一系列相关领域均处于领先地位，包括分离科技、实验室信息管理、质谱和热分析等，为客户提供长久的运作平台。 　　2008 年，沃特世公司的年收入达 15.8 亿美元，全球拥有 5000 名员工，为不断推动全球客户的科学发现和卓越运营贡献自己的力量。 　　沃特世, ACQUITY, ACQUITY UPLC, ACQUITY UltraPerformance LC, UPLC和Xevo是沃特世的公司的商标。

　　IBO 2009分析仪器设计金奖颁发给了沃特世(Waters)公司的XEVO® TQ质谱系统。该系统的精美设计突出了创新特质，提高了可用性，为终端用户带来了极具吸引力的界面。仪器前端平台的平衡设计以及细致风格使得XEVO TQ呈现专业外观，表达了技术的精确性和可用性。该系统的视觉外观和特征也应用于沃特世公司XEVO系列中的另一款产品——XEVO Q-TOF质谱系统。　 　　沃特世公司从最初的细节规划该系统到最后的产品发布历时14个月。XEVO TQ系统尺寸为 61X71X90 cm(24X28X35 in)，重达130 kg(286 lb)。 沃特世 ACQUITY UPLC和XEVO TQ MS 　　正如沃特世公司质谱系统高级产品经理 David Little向IBO所说，从一开始就考虑了美学诉求。“我们决定关注离子源技术，尤其是针对该仪器，为未来产品开发新型的离子源，不断前行。我想，到那时肯定会有机会不仅目睹硬件的功能性，同时还可欣赏到美学外观，”他这样说道。 　　为了这一改变，公司与257公司合作设计产品，机械设计员还进行厂外参观，观察客户的工作状况。“由于客户基础发生变化，我们必须观察客户的常规作为以便了解其所犯错误以及棘手之事，并基于此进行设计。”Little先生说道。 　　为使包括不熟悉质谱的科学家在内的更多终端用户使用XEVO TQ的高端技术，设计必须实现一体化。因此，XEVO的组装、运转和维护必须简单并更直观。为了说明设计如何实现这一点，Little先生举例说道，XEVO可以自动进行从ACQUITY UPLC®至样品流路的自动参考导入，而无需终端用户人工去重新连接系统。 　　快速、简便并正确使用离子源也非常重要。转动把手打开离子源装置，关闭气体。真空隔离阀无需工具轻松移除离子取样锥。Little先生解释道，“如不隔绝真空就无法将取样锥取出，转动真空隔离阀的设计可隔绝真空，因此就不会产生任何危险。” 　　简单易用的另一个例子是不再使用为质谱校准或方法开发而采用的参考样品注射器。“我们为仪器添加了某些功能，可以放入标准样瓶并直接导入质谱分析。”端口后部的灯光将显示正在使用的样品瓶。 　　设计也强调了沃特世公司产品线的一体化特征。“当我们设计该质谱仪时，显然参照了ACQUITY UPLC系统的现行设计。该系统需借鉴以往设计而非特立独行……他们需有相同的设计风格，”Little先生说道。这些系统在外形、风格和色彩上非常类似，具备连续统一的整体外观特征。 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世(Waters)公司为以实验室为基础的企业提供实用、可持续的创新技术，帮助它们在全球范围内的生命科学、环境保护、食品安全、水质监测等领域保持领先水平，获得业务优势。沃特世公司技术创新和实验室解决方案在一系列相关领域均处于领先地位，包括分离科技、实验室信息管理、质谱和热分析等，为客户提供长久的运作平台。 　　2008 年，沃特世公司的年收入达 15.8 亿美元，全球拥有 5000 名员工，为不断推动全球客户的科学发现和卓越运营贡献自己的力量。

Engen教授通过沃特世Synapt高精度质朴系统，利用氢氘(H/D)交换技术开展蛋白质构象研究 米尔福德, 马萨诸塞州 - 九月 01, 2009 　　沃特世公司(NYSE:WAT)今天宣布，东北大学的John R. Engen教授获得了优秀青年分析科学家Arthur Findeis奖，该奖项是由美国化学学会的分析化学小组颁发的。Engen教授通过与沃特世公司合作，开创了氢氘(H/D)交换、超高效液相色谱和离子淌度质谱结合使用的技术。这项技术使研究人员能更好地理解在某些疾病中起重要作用的蛋白质的构象、或折叠的三维结构。Engen教授在8月16日华盛顿举行的ACS大会典礼上，获受了该奖项。 　　新技术能够更好地形成某些蛋白质的三维图片，并且显示它们如何移动和与其它蛋白质反应。科学家通过新技术更好地了解蛋白质功能和蛋白质结构之间的关系，对获得疾病起因和进展的透视图也充满了希望。Engen教授是化学与化学生物学助教，并任职于东北大学的Barnett化学与生物分析研究所。 　　蛋白质是结构严谨的、三维立体的长链分子，当它正确地折叠时，能够调节正常的身体功能。当特定的蛋白质不再工作时，长链可能导致疾病症状的产生,，包括大家熟知的老年痴呆症，Creuzfeldt氏疾病(又称亚急性海绵样脑病)和帕金森等。因此，了解一个蛋白质分子是如何完成它的折叠是重要的。质谱具有独特的能力，可以用来监测单一蛋白质和蛋白质复合物。 　　Engen教授发表了关于H/D的详细技术的文章，文章刊登在最近的《美国国家科学院院刊》(PNAS)，并在《分析化学》(Analytical Chemistry)上写了专题文章。2007年，Waters公司和Engen教授的实验室在Barnet(巴内特)研究所签订了协议，在化学和生物分析方面进行科学合作。据《分析化学》最新报道，为了推进Engen教授的实验技术， Waters公司推出了一个特别计划——为Waters公司在纳米领域做出成就的超高效液相色谱系统设计冷却室。 　　2006年6月，在西雅图举行的美国质谱协会上，Waters公司介绍了SYNAPT™ High Definition MS ™ (HDMS™)高精度质谱系统。该系统是第一台商用质谱，除了离子质量外，还可根据离子的大小、形状和电荷进行实验分析。 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世公司(NYSE:WAT)为实验室型组织提供实用、可持续的创新技术，帮助他们在全球范围内的保健服务、环境管理、食品安全以及水质等领域保持领先水平。 　　沃特世技术创新和实验室解决方案在一系列分离科学、实验室信息管理、质谱和热分析等相关领域均处于领先地位，为客户的成功提供了长远持久的平台。 　　2008 年，沃特世公司年收入达 15.8亿美元，拥有 5000 名员工，为推动全球客户的科学发现和卓越运营不懈努力。

  赵淑军 沃特世公司，上海，中国 摘要      一种α-牛乳清蛋白和两种β-牛乳清蛋白标准分别用超纯水稀释配制，采用ACQUITY UPLC BEH300 C18色谱柱分离，ACQUITY UPLC-TUV 超高效液相色谱检测。Bα-La 、Bβb-Lg 和Bβa-Lg 三种乳清蛋白可达基线分离，线性范围为1.000-100.000 mg/kg ，复相关系数R2≥0.999 ，方法的检出限为1.000 mg/kg 。 关键词：超高效液相色谱 奶粉 牛奶 牛乳清蛋白Bα-La Bβb-Lg Bβa-Lg 前言     乳清蛋白是牛奶中的主要蛋白质，乳清蛋白主要包括α-牛乳白蛋白(Bα-Lactalbumin，Bα-La )、β-牛乳球蛋白(Bβ-Lactoglbulin，Bβ-Lg )、蛋白酶-胨和牛血清白蛋白等，前两者是乳清蛋白的主要成分，分别占其总量的10-20% 和40-50%，β牛乳球蛋白包括Bβb-Lg 和Bβa-Lg 两个遗传变异体[1-2]。 乳清蛋白具有营养价值高、易消化吸收、含有多种活性成分等特点，已经被越来越多地应用于食品工业，市场上同时出现了不同种类和品牌的乳清蛋白保健品，如儿童营养蛋白粉、婴儿配方奶粉等[3]。但有报道乳清蛋白又是一种常见的过敏原，β-乳球蛋白是最主要的过敏原，α-乳白蛋白紧随其后[4]。UPLC 以其1.7µm 超细填料色谱柱和15000psi 的超高效液相色谱系统，可以完美实现Bα-La 、Bβb-Lg 和Bβa-Lg 三种乳清蛋白分离；尤其对于Bβb-Lg 和Bβa-Lg 两个遗传变异体可实现完全分离。以及配备高灵敏度Waters ACQUITY TUV 紫外检测器，整个系统检测三种乳清蛋白检出限达到1ppm 。该检测方法可应用于牛奶或奶粉中α-牛乳白蛋白和β-牛乳球蛋白的定量检测。 实验方法 材料、试剂和仪器     乙腈为色谱纯，三氟乙酸为优级纯，Triton X-100 ，氯化钠（优级纯），实验用水为超纯水(18MΩ,TOC 3ppb) ，牛乳清蛋白标准品Bα-La 、Bβb-Lg 和Bβa-Lg；ACQUITY UPLC®超高效液相色谱系统，配Acquity TUV 检测器、FILTER MIXER (425μl,P/N 205000403 ）。 色谱条件 液相系统： Waters ACQUITY UPLC® 配ACQUITY TUV 紫外检测器 色谱柱 ACQUITY UPLC BEH300 C18 2.1mm x 100mm，1.7 μm 柱温： 35˚C 流动相： A：0.1%TFA 乙腈溶液 B：0.2%TFA 水溶液;梯度洗脱 检测波长： 280nm 分析时间： 15 min 进样量： 10ul (样品进样2ul) 梯度方法见下表： 时间/(min) 流量/(ml/min) A% B% 曲线 0 0.20 39 61 初始 3 0.20 41 59 6 4 0.20 44 56 6 8 0.20 46 54 6 10 0.20 70 30 1 15 0.2 39 61 1 数据处理系统 Empower 2 中文版 前处理方法     称取0.20 g 奶粉样品或2ml 液态奶样品，添加8mL (对于液态奶添加6ml)0.3M 的氯化钠(含0.2% 的Triton X-100 )溶液溶解，震荡混匀；然后用0.3% 的TFA 水溶液调节pH至4.4-4.6 之间(以沉淀酪蛋白，其等电点为4.6 ，需要认真控制pH，因为乳清蛋白的等电点为4.8 ），定容至10 mL ，均质5分钟，室温静置1个小时左后，2500 转离心10分钟，取上清液过0.2um 滤膜。 结果与讨论 标准配制 三种乳清蛋白标准均用超纯水稀释，配制成不同浓度的标样进行检测，可得到较好色谱峰形，并且配制简单。 检测波长的选择 应用Waters PDA 检测器扫描得到三种乳清蛋白的紫外吸收光谱图，如图1至3所示。       乳清蛋白在220nm 和280nm 下都有紫外吸收，本文选择两种波长对三种乳清蛋白（浓度均为5ppm ）进行检测，结果发现虽然分析物在220nm 下具有最大的紫外吸收，同时在该波长下其也具有较高的基线噪音和干扰，因此本文选择280nm 作为检测波长，减少流动相中的基线干扰，如图4所示5ppm 的标准色谱图。  流速、流动相优化     如图4三种牛乳清蛋白混合标准的色谱图，按照保留时间依次是Bα-La 、Bβb-Lg 和Bβa-Lg，对于高分子量的蛋白分析，采用Waters 孔径为300À 的ACQUITY UPLC BEH300 C18色谱柱进行分离，此外,考虑到大分子蛋白的传质特性，需要使用较小的流速，方能实现较好的分离。本文试验了0.1ml/min 、0.2ml/min 和0.3ml/min 三种流速，0.1ml/min 死时间达到2.5min ，整体出峰时间较晚，峰宽加大，最终综合峰形、快速和分离度考虑选择0.2ml/min流速，如图4所示。     在当前的分析条件下Bα-La 具有较好的保留，然后改变流动相配比，得到标准品的四种配比色谱图(如图5)，由图可以看出，1号色谱峰图中Bβb-Lg 和Bβa-Lg 两种遗传变异体达到完美的分离(分离度=2.79 )；随着梯度的变化，在保持Bα-La 保留时间不变的情况下，逐渐加快Bβb-Lg 和Bβa-Lg 的出峰时间，两种化合物的分离度逐渐变化为1.97 (4号色谱图)，灵敏度也稍有增加。但是考虑在分析实际样品时，减少可能存在的杂质对分析物的干扰，本文采用1号色谱图梯度方法进行检测。      实际样品检测发现，样品的Bα-La 前面有较多的杂质峰存在，因此为防止实际样品中低保留杂质对Bα-La 的干扰，对图5的液相方法Bα-La 保留时间进行了调整(如图4所示)，Bβb-Lg 和Bβa-Lg 仍具有2.22 的分离度。 方法的线性相关性及检出限     浓度分别为1.000 、5.000 、50.000 、100.000 mg/L 的三种乳清蛋白标准依次进样，进样量均为10µL ，外标法定量。以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标进行线性回归，分别得到Bα-La 线性方程A=2.34e3×C-2.36e3，复相关系数R2=0.9997；Bβb-Lg 线性方程A=1.32e3×C-1.30e3，复相关系数R2=0.9995；Bβa-Lg 线性方程A=1.24e3×C-1.36e3，复相关系数R2=0.9987 。三种乳清蛋白在1.000-100.000 mg/L 范围有良好的线性关系(如图6-图8所示）。并且经实验测定，方法检测限为1.000 mg/kg ，图9为1.000 mg/ L三种乳清蛋白标准色谱图，此浓度下Bα-La 、Bβb-Lg 、Bβa-Lg 信噪比分别达到8、3和3，其中Bα-La 可实现定量要求。 前处理方法讨论       前处理中有几个注意点，首先就是使用含0.2% Triton X-100 的0.3M NaCl 提取液，尽量不要超过3天，因为实验发现3天以后该溶液对乳清蛋白的提取和稳定效果会下降。其次样品加入提取液,调整pH后需要放置50分钟以上，因为发现放置和未经放置的样品，在离心后过滤膜时过滤的难易程度有较大差别，未经放置的虽较易过滤膜，但乳清蛋白提取率较低。       其关键点还在于提取液pH值的掌握，本文对同一奶粉产品在不同pH下的提取情况进行了比较，如下图所示，pH在4.4-4.6之间没有太大差别，但是pH达到4.8 和5.0 时，Bβb-Lg 和Bβa-Lg的峰形变差，尤其是Bα-La的的出峰位置完全被杂质所淹没，因此实验中需要控制pH值不要超过4.6。 实际样品检测结果 图11-13分别为两种奶粉和一种液态奶实际样品分析色谱图及结果。       由图14，三种乳清蛋白的标准品、实际样品和样品提取液的空白溶液的重叠色谱图，可以看到，在奶粉和牛奶的提取溶剂中，不存在对样品中乳清蛋白分析物的干扰。另外参见下图15，是牛奶样品和牛奶样品最后添加标准品的色谱图，可以进一步定性牛奶提取样品中三种乳清蛋白的存在。       同时发现，乳清蛋白标准品用水或样品提取液(含Triton X-100的NaCl溶液)定容，进样检测对三种乳清蛋白的峰面积基本没有影响，图16是两种定溶液标准品的重叠色谱图。 重现性 5ppm标准品八次进样的重叠色谱图及重现性结果如下:  结论 本文建立了用Waters UPLC-TUV系统检测奶粉和牛奶实际样品中Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三种牛乳清蛋白的定量分析方法。方法的检出限为1μg/g。使用Waters ACQUITY UPLC BEH300 C18色谱柱和三氟乙酸添加剂流动相，使Bβb-Lg和Bβa-Lg两种遗传变异体可达到基线分离；采用280nm检测波长，有效降低了低波长 检测下的流动相干扰，可以用于奶粉和牛奶中三种牛乳清蛋白的含量测定。 参考文献： [1] Kinghorn N M, Norris C S, Paterson G R. Chromatogr A, 1995，700:111 [2] 蔡增轩,储小军等. 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论 文集,KB02:23-24 [3] 李慧,陈敏等.色谱.2007.1,25:116-117 [4] Ena J M, van Beresteijn E C H, Robben A J P M, Schmidt D G. J Food Sci, 1995，60(1):104

沃特世(Waters)公司在Dioxin2009年会上为环境和食品安全检测提供的解决方案引起强烈关注 　　北京 – 2009年8月24日–第29届持久性有机污染物学术研讨会(Dioxin 2009)在中国北京举办，沃特世(Waters)公司在此次研讨会上展示了其液相色谱(LC)、质谱分析(MS)、化学和信息学产品在环境和食品安全检测解决方案的全面产品组合。除了在世界享有盛誉的AutoSpec™二恶英分析系统以外，以ACQUITY™ UPLC和Xevo™ Q-Tof系统作为此次产品展示的亮点。沃特世公司的系统已经成为了环境和食品实验室的重要技术，为解决复杂样品分析所需的灵敏度、选择性和化合物确认提供方案。 　　“在世界上可能没有比中国北京更合适的地点来举办Dioxin 2009会议的了”，沃特世公司化学分析业务营运部门的执行董事 Alex Tisserand先生说，“中国业务的挑战和机遇，包括不断采用世界级分析技术的需求，正在飞速扩大。不论用途有多么复杂，沃特世公司久经考验的二恶英分析系统和LC/MS分析系统都能快速而轻松地提供稳健、精确和高质量的信息，从而使科学家能够专注于分析结果，并以科学为依据，做出有质量的业务决策。” 　　AutoSpec —— 确保二恶英分析数据长期稳定可靠 　　十几年前，沃特世公司的高分辨气相色谱质谱仪就已经为二恶英分析方法和法规建立了标准。AutSpec已经成为世界所熟知的知名品牌，如今在中国市场，绝大多数二恶英分析实验室均采用AutoSpec作为分析工具，并在多次国际比对中取得优异成绩，特别是两年前中国环保局的二恶英分析能力建设项目采用了沃特世公司AutoSpec，经过安装培训，已经进入全面分析数据阶段。目前已经有全球数百家用户的多年实践验证了AutoSpec二恶英分析数据的长期稳定性和可靠性，而中国目前也已经有数十家AutoSpec的用户。 　　ACQUITY UPLC — 推动分离科学前进 　　凭借5年的丰富经验和数以千台成功安装的系统，ACQUITY UPLC体现了实验室对于提高产率、效率和通量的多功能系统的要求。举例来说，UPLC将样品运行时间减少到了原来的十分之一，所使用的溶剂减少了多达95%，并显著改善了MS的性能，节约了实验室的费用和能源。有超过450篇的同行评议文章和300多份应用文章都借鉴了ACQUITY UPLC的性能。而非常重要的一点是要认识到UPLC的特点不仅仅在于高压力。ACQUITY UPLC采用了同时利用超高压和微粒分离的总体系统设计，这些特性带来了与众不同的出色性能。 　　“2004年沃特世公司 ACQUITY UPLC系统的引进不仅是引进了一种创新产品，它还激起了高效液相色谱的革命，”加利福尼亚洛杉矶国际战略方向公司的总裁，分析仪器行业的咨询专家Larry Schmid给出了这样的评论。“ACQUITY UPLC激励了大多数其他主要的HPLC供应商进行类似系统的开发，改变了实验室液体分离动力学，尤其是在质谱仪进样方面。ACQUITY UPLC和其他所谓的‘快速LC’相比，能够明显改进分离度，提高分析速度，而这些正是实验室科学家们迫切需要的。因此此后5年，凭借沃特世公司突破性的产品开发努力，HPLC市场现在正发生着翻天覆地的变化。” 　　沃特世公司的 ACQUITY UPLC系统利用分析柱中1.7微米的颗粒，实现色谱分离的提高，缩短分析时间，减少分析样品所使用的溶剂。与串联四极杆和飞行时间质谱配合使用，UPLC技术更加狭窄的色谱峰、峰高响应的提高以及更好的信噪比性能改进了质谱仪的离子化效率，有效去除离子抑制效应。这一性能能够全面提高MS灵敏度 ，提升精确识别各种超低浓度的分析物的能力。 　　Xevo MS – 实现高分辨质谱运行更加高效简便 　　沃特世公司的 Xevo系列质谱仪—Xevo Q-Tof(四极杆飞行时间串联质谱仪)和Xevo TQ MS(串联四极杆质谱仪)—的特色在于其推动创新和简便的分析方法。 　　Xevo的客户报告，说来自不同运营商和实验室的样品结果的一致性得到了持续性的改善。他们将这一现象归功于Xevo MS系列产品具备的沃特世公司“工程精简”(Engineered Simplicity™)的设计理念。“工程精简”描述了沃特世公司 MS系统以尽可能简单的方式提供相关信息的能力，使科学家能够将数据更快地转化为关键性的专业知识，并提高其准确度。仪器之间和实验室之间的再现性在现代制药业越来越多的生产商，比历史上任何其他时期都更多地依赖于合同研究机构(CRO)的环境下显得尤为重要。 　　“我的学生们使用Xevo Q-Tof所能获得优质数据的速度，始终让我惊讶不已。”洛杉矶的加利福尼亚大学化学和生化系的Joseph Loo教授说：“看到他们使用这一系统，通过最少的样品准备，在几乎没有预先使用过该仪器经验的情况下，生成精确、可重现的蛋白质清单，对我来说的确令人印象深刻，激动人心。这种仪器和我的学生所获得的数据对我们的多个研究项目早已产生了积极的影响。” 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世(Waters)公司为以实验室为基础的企业提供实用、可持续的创新技术，帮助它们在全球范围内的生命科学、环境保护、食品安全、水质监测等领域保持领先水平，获得业务优势。沃特世公司技术创新和实验室解决方案在一系列相关领域均处于领先地位，包括分离科技、实验室信息管理、质谱和热分析等，为客户提供长久的运作平台。 　　2008 年，沃特世公司的年收入达 15.8 亿美元，全球拥有 5000 名员工，为不断推动全球客户的科学发现和卓越运营贡献自己的力量。 　　沃特世, ACQUITY, ACQUITY UPLC, ACQUITY UltraPerformance LC, UPLC和Xevo是沃特世的公司的商标。

　　沃特世(Waters)公司宣布美国环境保护署(EPA)购买了Waters® ACQUITY UPLC®/Xevo™ TQ质谱分析系统用于其位于马里兰州米德堡环境科学中心的分析化学实验室。该实验室为将在美国使用的新型杀虫剂的登记和评估向EPA提供科学性、实验性和技术性的支持服务，也负责对食品和饲料中含有的具体杀虫剂及其代谢物开发新的多残留分析方法。新方法将有助于收集更多的含量更低的杀虫剂残留数据，支持EPA完成保护人类和环境的使命。 　　EPA的科学家选择了沃特世公司的UPLC/MS/MS系统是由于其满足了简单易用、可以对杀虫剂及其降解产品在几个ppb的检测限内进行高效、精确的浓度测量等要求。 　　杀虫剂在美国销售或推广之前，必须由EPA杀虫剂项目办公室进行登记或豁免。EPA通过杀虫剂登记程序检查其配料、使用场所及农作物、数量、频率与使用时间、存放与处理。EPA对杀虫剂进行评估，确保其对人类、环境和非目标物种不会产生严重的副作用。 　　沃特世公司的Xevo TQ MS配有IntelliStart™软件，通过友好的操作界面可自动设置并调谐MS硬件，而以前这些都需要手动完成。其ScanWave碰撞室技术提高了工作循环效率，带来更佳的离子信号强度光谱，从而提高了分析敏感度。最后，Xevo TQ的多反应监控(MRM)模式改善了质谱仪的性能，能够更精确地测定各种不同食品基质中低于最低检测要求限量的大量目标化合物。 　　欲了解更多有关沃特世公司的ACQUITY UltraPerformance LC及其全新Xevo质谱仪系列产品的信息，请访问www.waters.com。 　　关于沃特世公司 　　沃特世(Waters)公司为以实验室为基础的企业提供实用、可持续的创新技术，帮助它们在全球范围内的生命科学、环境保护、食品安全、水质监测等领域保持领先水平，获得业务优势。沃特世公司技术创新和实验室解决方案在一系列相关领域均处于领先地位，包括分离科技、实验室信息管理、质谱和热量分析等，为客户提供长久的运作平台。2008 年，沃特世公司的年收入达 15.8 亿美元，全球拥有 5000 名员工，为不断推动全球客户的科学发现和卓越运营贡献自己的力量。

成都：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908482379919.pdf 福州：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908492968599.pdf 哈尔滨：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908495237112.pdf 杭州：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908501814063.pdf 昆明：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908504230608.pdf 沈阳：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908511317893.pdf 苏州：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908513689337.pdf 武汉：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908520073813.pdf 西安：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908522671089.pdf 重庆：img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/File/2009/8/2009081908525723782.pdf

创新的双重MRM扫描模式质谱 用于药物定量过程中的代谢物检测 Paul D. Rainville, Jose Castro-Perez, Joanne Mather, and Robert S. Plumb Waters Corporation, Milford, MA, U.S. 介绍 市场上的药品及其代谢物的含量水平的测定对新疗法的开发来说非常重要。体液中的药物水平被用来确定药物的生物利用率。此外，药物代谢物信息的解析也至关重要，因为在一定浓度水平下，这些代谢产物是有毒性的，且比原型药具有更强的药效活性，干扰辅药，进而影响肝脏功能。 这两块信息通常是从不同的分析实验中获取得到的，这加重了实验室的工作负担，降低了实验室的工作效率。因此，如果通过一次分析就能获得药物浓度、获取代谢物结构有关信息话，这种方式速度更快，也能节约更多成本。样品数量较少的情况下，比如说，在儿科研究中，这种能力对实验室获取必要的定量和定性数据至关重要。 沃特世® XevoTM TQ MS是一套串联四极杆质谱系统，装配有新型设计的碰撞池，可以通过一次分析过程中获取全扫描质谱和定量的多反应监测（MRM）的数据。 下面我们提供一种一次分析就可获取全扫描质谱和多反应监测质谱数据的数据采集方法， 并以此测定尿液中药物样品的含量，并利用相关全扫描数据来检测其相关的代谢产物。    实验 尿液是从服用400毫克布洛芬八个小时之后志愿者上采集的。样品进样分析之前冷冻保存。样品的制备是样品以13000RCF的速度离心5分钟，然后用水进行稀释，再把样品注入UPLC®/MS/MS系统中。 液相色谱条件 液相色谱系统： 沃特世 ACQUITY UPLC®系统 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱 2.1 x 50 mm, 1.7μm 柱温： 40℃ 流速： 600 μL/min 流动相A： 0.1% NH4OH 流动相 B： ACN 梯度： 5% to 95% B/2 min 质谱条件 质谱系统： 沃特世 Xevo TQ MS 电离模式： 电喷雾（负） 毛细管电压： 2000 V 锥孔电压： 15 V 脱溶剂温度： 550℃ 脱溶剂气体： 1000 L/Hr 来源温度： 150℃ 扫描范围： m/z 100 to 500 碰撞能： MRM 数据 7V，全扫数据 3 V MRM反应： m/z 205 > 161 结果 测定药物的浓度和药物的代谢产物是新药研发过程的两个重要方面。设计本实验的目的是：在依次进样中，用多反应监测质谱来测量尿液中的布洛芬的含量，用采集全扫描质谱数据来检测相关的代谢产物。 Xevo TQ MS的碰撞池不断的冲入碰撞气，其独特的碰撞池设计使得该仪器可以在MS和MS/MS数据采集过程中实现快速的切换。这个过程出现在与ACQUITY超高效液相色谱系统产生的快速色谱和其产生的窄色谱峰相一致的时间范围内：XevoTQ MS能够在10000Da/sec的采集速率下进行操作，并能准确的对UPLC产生的非常窄的色谱峰进行归属。 在本组数据中，采集到了大于12次的MRM扫描图，同时也获取了全扫描质谱数据。在峰底处测得的色谱峰宽度在2.4秒。（数据未显示）。 图2表示的是布洛芬的及其主要的体内代谢产物的化学结构式。图3显示了尿液样品中的布洛芬多反应监测数据以及同时获取得到的的全扫描数据。全扫描数据用来寻找布洛芬产生的可能的代谢产物。图4显示了的与酮葡萄糖苷酸 （m/z 411）、葡萄糖苷酸（m/z 381）以及氢氧根葡萄糖苷酸（m/z 397）相关代谢产的提取离子色谱图（XIC）。　 进一步的碎片离子质谱确认实验揭示了几个诊断碎片离子，例如：与葡萄糖苷酸部分相关的m/z 193和175，糖苷配基m/z 221，布洛芬本身的m/z 113（图5）。 这种获取方法更深一层的优势在于能够让科学家们用全扫描质谱更形象的观察到主体基体之间的差异。这些差异可能与多个因素有关：饮食、性别、年龄以及个人的健康状况。因此，完整扫描数据还用于生物标记物的检测。而且，如果将来需要关于化合物代谢机理的新的信息时，我们还可以检查全扫描数据，而不需要对样品重新进样分析。  结论 在本应用文献中，我们已经说明：Xevo TQ MS 能够同时进行全扫描和MRM的数据采集，从而可以单次进样测定尿液中的药物成分的含量并研究其代谢物的相关信息。事实证明，Xevo TQ MS 的采集速度与高效分离的ACQUITY 超高效液相色谱系统是高度兼容的。 该项技术的优势体现在多个方面。首先，同时采集全扫描数据和MRM数据，因此科学家们便可以一次性采集有关样品的多维数据，充分利用实验室资源。否则，需要进行数次实验才能获取同样的信息。其次，将该项 MS 技术与超高效液相色谱结合，有效提高了分析速度。最后，由于全扫描 MS 获取的数据较为全面，能够以更多方式加以利用，同时让研究人员在指导药物发现和开发研究时对自己的决策更有信心。 参考文献 [1] Plumb R, Rainville P., et al. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 2007; 21: 4079-85

工作流程 开发色谱分析方法通常需要耗费很多时间，而且难度很大。传统方法通常是选择一个优选或经常使用的溶剂、pH值、缓冲液和色谱柱组合作为开始点，然后对流动相组成进行调节，直到摸索出满意的方法。但此过程非常费力，而且经常得不到满意的方法。更系统性的方法是利用良好的实验设计和根据本大纲中描述的工作流程，高效快速开发高质量的反相色谱分析法。本方法开发工作流程包括测试方法摸索，其对如pH值、有机改性剂和色谱柱化学性质等选择性因素进行评估，测定那些能够通过控制选择性从而实现所需分辨率的最有效的试验参数，然后对摸索试验得到的最优分离方案进行优化或微调以得到最终分析方法，然后对分析方法进行验证以确保满足预期方法目标。  开始点 为了设计一个有效的测试方法摸索试验，尽可能多地搜集关于样品和被分析物化学特性的信息是很重要的。 方法开发所需信息 样品溶解性能： 被分析物数量： --需要分离多少分析对象色谱峰？ 化学结构： 功能基团：被分析物有何区别？ --有无可电离基团？电离常数？ --pH值如何影响色谱分析？ 检测： --需要或可能采用何种检测？ --被分析物是否有紫外吸收？ --λmax? 浓度范围和定量要求？ --需要多高检测水平？ --需要多大定量限？ 样品基质影响： --是否有阻碍分离或检测的基质影响？ 方法使用目的 在开发一种测试方法之前，还需要考虑，是否理解和明确了测试方法的目标和使用目的，清楚理解使用目的将有助于确定必须要满足的性能参数以及验证方法所需关键参数，例如可能需要从样品的所有组分中分离一种对象被测物的方法，或者可能需要既能从其它组分中分离对象被测物、也能使所有组分之间能够相互分离的方法，其它考虑因素可能还包括：需要多大通量？需要多大分辨率？可以接受的拖尾因子等。我们采用开发从相关化合物中分离帕罗西汀的方法来展示系统方法。 测试方法摸索 当选择合适的色谱柱时，不同基体颗粒(杂化、硅胶、聚合物)的特性差别，会造成保留性能、选择性的差别，了解这一点是很重要的。根据基质表面残余的硅醇基团数量的不同以及封端原因，可能会导致次级效应，另外不同的键合相可导致显著的选择性差别以及其它特性。 不同配体、不同选择性 疏水性 -更长的烷烃链提供更长的保留时间。 硅醇活性 -影响谱峰对称性和次级效应。 水解稳定性 -颗粒键合位点上配体数量越多，色谱柱寿命越长。 配体密度 -影响样品负载能力。 用传统的HPLC 设备对具有不同pH值和有机改性剂的大量色谱柱进行摸索试验需要大量时间，而使用安装了ACQUITY UPLC 色谱柱管理器和填充了亚-2微米颗粒的高分辨率短色谱柱的ACQUITY UPLC®设备，可使试验从几天缩短到几小时。  色谱柱摸索试验：使用安装了ACQUITY UPLC 色谱柱管理器和ACQUITY UPLC 色谱柱的ACQUITY UPLC 设备测试摸索条件如图所示，图示这些条件的最终目标是得到一系列不同的色谱图，其能提供选择合适色谱柱所需信息。BEH C18色谱柱是非常好的通用C18，适于宽pH值范围使用，BEH Shield RP18 为烷烃链C18提供选择性补充，BEH Phenyl 色谱柱为这两种C18色谱柱提供选择性补充，为了满足极性保留的试验设计需求，也可选用HSS T3 色谱柱。 pH 值的影响 影响带如下可电离基团等的被测物。 -胺 -羧酸 -酚 有的化合物带一个或更多可电离基团 -pH值变化可产生最强的选择性效果  反相保留性能：分析pH值如何影响反相色谱分析中的保留时间和稳定性是很重要的，为了得到可电离化合物的最佳保留性能，被测物不应带电或被离子化，因此酸性被测物应该使用低pH值，碱性被测物应该使用高pH值，中性材料不带可电离基团，因此不受pH值影响。这些曲线也可被看作滴定曲线，其拐点是分子的表观pKa 值，因为pH值的微小变化就能导致保留时间和选择性的急剧变化，所以测试方法采用的pH值不能位于分子pKa 附近，稳定区域是曲线的水平位置部分  pH值选择和色谱柱选择：此色谱图中，由于帕罗西汀及其相关化合物的带电状态发生变化，pH 10 比pH 3 在BEH C18色谱柱上的保留时间更长，在这一点上，由于具有更高分辨率和更好的选择性，pH 10 是适合被测物的pH值。下一步是评估在相同pH 10 值下三种不同色谱柱的色谱图，以选择具有最佳分辨率的色谱柱。与其它纯硅胶色谱柱相同，HSS T3 色谱柱只能用于pH值2-8环境下，因此不在评估之列，三种色谱柱都显示了可检测所有组分的能力，由于C18的通用性，因此选择BEH C18色谱柱来对比不同有机改性剂的选择性。 选择有机改性剂 用于反相分离的典型溶剂是甲醇和乙腈，除了通用性外，还具有良好的化学特性，两者的洗脱能力和粘度不同，甲醇中存在氢键，具有不同的独特选择性  选择溶剂：如上色谱图显示，甲醇是比乙腈更弱的洗脱剂，因此表现更长的保留时间，而乙腈对此类被测物中的所有组分具有更好的分离性能，因此采用BEH C18色谱柱和乙腈溶剂在pH值为10的条件下继续优化分离。 测试方法优化 可通过对参数进行调节以微调和优化分离过程，物理参数-梯度坡度可用于调节保留性和选择性，但需要记住的是梯度坡度经常是分辨率和选择性的综合平衡结果。另一个可优化参数是温度，任何化学过程都受温度影响，温度不同可导致选择性的巨大差别。  色谱分析方法开发：当相关化合物浓度降低时，帕罗西汀相关化合物B和D的分辨率会急剧降低，这是由于其和帕罗西汀峰的浓度水平不相称造成的，需要继续优化。 更小的梯度坡度可提高分辨率 -降低梯度坡度将降低灵敏度。 更陡的梯度坡度将压缩谱峰，经常会降低分辨率。 -增加梯度坡度将增加灵敏度。 改变梯度坡度需要平衡谱峰高度和灵敏度。 保留性能和选择性的变化。 方法优化和温度 降低移动相粘度。 降低背压。 -如果流动速度维持恒定。 改善被测物分散性。 -优化线性速度更高。 保留性能和选择性的变化 温度会影响中间的每一个化学过程，例如增加温度会降低移动相的粘度，如果流动速度恒定将导致系统背压降低，高温将改变固定相和流动相之间的分配速率，然而由于提高了被测物分散性，会加快优化线性速度。对温度变化敏感的化合物，温度的微小变化都会导致选择性发生独特变化。 色谱分析方法优化：此例子中，温度以15˚C的步幅从30˚C开始上升到40˚C和60˚C，随着色谱柱温度增加，组分的分离性能改善，另外被测物的分散性提高，谱峰更尖锐，色谱柱温度为60˚C时分离效果最佳。 方法验证和注意点 方法验证用于确认分析方法的特性能否满足应用要求，验证过程中需要评估的典型色谱法特性是专属性、线性、范围、检测限、定量限、准确度、精度、耐用性。 分析方法验证 分析方法验证经常是由多个步骤组成的反复人工过程，需要进行大量的色谱测试，以充分评估所有八种特性，审视、计算和管理这些过程获得的所有数据可能具有一定的难度。EmpowerTM 2 Method Validation Manager 采用自动化的验证过程，使数据审视更加顺畅，极大提高了验证过程的效率和可靠性。 结论 通过使用包括摸索试验和优化的方法开发系统策略可明显提高色谱测试方法的开发效率。 设计试验研究包括影响选择性的多个参数，例如固定相、pH 值、有机改性剂，自动化运行极大加速了测试方法开发流程。 合理审视数据后，完成最终测试方法经常是微调和优化如梯度坡度和温度等变量的过程。 为了保证所开发的方法能够满足应用要求，需要使用事先确定的性能参数对方法进行验证。   

原料药中杂质的分离和特征描述的战略性方法 迈克尔 道. 琼斯, 玛丽安 特渥辛, 罗布 Plumb,宋相晋, 约翰 Shockcor, 乔斯 卡斯特罗 佩雷斯 和 安德鲁 奥宾 沃特世公司, 米尔福德市, 马萨诸塞州, 美国, 01757 简介 监测化合物中的杂质对于生产制剂和原料药的公司来说是有既得利益的，除了法规要求外，还有其它很多原因。杂质的鉴定可以帮助发现潜在未知的降解途径，虚假的过程/专利保护侵害，和/或遗传毒性影响。杂质的分析是劳动密集型的工作，包括方法开发，杂质分离技术和各种各样的分析方法，以得出所感兴趣杂质的真实结构。 这篇文章介绍了一种战略性的方法，该方法应用了高分离液相色谱理论和强制降解研究，以最大化生产原料药喹硫平中的杂质。高分离液质联用和核磁被用来解释结构。 方法学 分析 仪器: ACQUITY 超高效液相 色谱柱: ACQUITY UPLC™ BEH C18 规格: 100 x 2.1mm, 1.7µm 流动相: A: 20mM Ammonium 碳酸氢铵, pH10 B: 乙腈 梯度: 见图 1 和 2 柱温: 650C 进样量: 3 µL 检测器: ACQUITY PDA @ 250 nm ACQUITY SQD 扫描范围 100-1000amu 质谱条件 仪器: Waters® SYNAPT™ 软件: Masslynx™ 4.1 离子源: ES+ 毛细管电压 (kV): 3.2 提取电压 (V): 4.0 脱溶剂气温度 (0C): 350.0 源温度 (0C): 120.0 脱溶剂气流速 (L/Hr): 650.0 锁定质量: 300pg/µL白氨酸/脑啡肽@ 50µL/min 质谱/质谱参数设置 飞行时间 椎孔电压 (V): 15 碰撞能 (V): 变化从15到30 采集范围: 质谱 100 - 1000Da 质谱/质谱 50—600 Da 制备 沃特世质谱引导的纯化系统 泵 2454二元溶剂管理器 进样/收集器 2767 检测器 2998 光电二极管阵列 质谱 3100 色谱柱 100X19mm XBridge, 5 um 溶剂 A = 10 mm 碳酸氢铵 pH 10 溶剂 B = 乙腈 流速 25/mL/min 梯度 B 经过10分钟 从5% 到60% 95% 有机相保持5分钟 核磁 仪器参数见图9 观察，制备和分离 喹硫平的酸解 该杂质鉴定方法（以前建立的）被用来鉴定喹硫平原料药在0.1mol/L盐酸中降解的主要杂质。 图1: pH 9 的碳酸氢铵, ACQUITY BEH C18 2.1x100 mm; 1.7um, 乙腈, 0.8mL/min. 650C, 20 分钟, 15-39%B到10.5分钟, 39-43%B到14.4分钟, 43-95%B到18分钟, 保持95%B到20分钟. 制备分离的准备 此方法为了更快的速度、更低的温度和更短的色谱柱，而进行了再优化，同时又能保持主要杂质和喹硫平间足够的分辨率 . 为什么呢? 在从超高效液相方法转换到制备型高效液相时，有些因素必须要考虑： 保持分离效率: L/dP (柱长度/颗粒度) 例如: 50 mm、1.7 um色谱柱的L/Dp为29,411，和具有30,000 L/Dp 值的150mm、5um制备柱等效 能使用更短的制备柱吗？在杂质402的分离中，100 mm的制备柱仍能提供足够的柱效以完全分离杂质。 在放大制备梯度中，对于制备流速，柱体积数必须保持合适的数值。如果这些因素都被考虑到，从超高效液相方法转换到制备型高效液相是能保证相似的选择性的。 从超高效液相放大到制备色谱 传统上, 从分析型高效液相放大到制备型高效液相使用同样的色谱柱长度和颗粒度，并运用下面的公式: Fp= Fa [(Dp)2]/[Da2] 注： Fp=制备柱的流速 Fa=分析柱的流速 Dp=制备柱的内径 Da=分析柱的内径 其它工具: Waters 制备放大计算器可以计算每个梯度段的时间，柱长度的变化和进样量。 聚焦梯度 *克利里等. 纯化过程中聚焦梯度的影响, Waters 应用文献 720002284EN 质谱引导的自动纯化 主要杂质m/z =402的分离在分析和化学上都很容易。 最大化产出: 8g/mL 喹硫平的储备液在 600C、0.1mol/L的盐酸中加热回流8小时， 以增加m/z=402 杂质的 产量 制备上样研究允许色谱柱进样20uL。 图3: 强制降解样品的制备色谱 仪器优势: 分离是通过Masslynx™ Fractionlynx™软件中的自动质量触发进行的。 ACQUITY BEH C18的方法可以无缝转换到XBridge C18 制备柱 通过超高效液相对感兴趣杂质的再优化可提供快速方法，以通过UPLC-SQD, UPLC-oaTof, 和/或UPLC MS/MS进一步确认分析 鉴定，确认和特征描述 分离的确认 通过质谱引导的纯化系统收集的m/z = 402的馏分被收集并挥干。该分离步骤得到了28.6mg m/z = 402的杂质。用甲醇稀释得到浓度为286µg/mL和2.86µg/mL的溶液，并用3分钟的UPLC-SQD方法进样以确认分离的质量 . 图4: 被分离杂质m/z=402的UPLC UV/SQD 确认 质量精度的重要性 杂质的质荷比为402，等于喹硫平(m/z = 384)加合了18 amu。样品进样到Waters SYNAPT™ MS可得到精确质量数以确认元素组成 . 图5: m/z = 402杂质的元素组成. 双键等价值(DBE) 、低的同位素匹配度（low i-Fit）、毫道（mDa）和结果都支持第一个分子式 加合可以在喹硫平结构中氧化一个点，同时减少一个双键 . 图6: 建议的结构. A.) 硫代氧化物 或 B.氮代氧化物 )? 氮代氧化物为基础的结构的确认 通常, 在低PH流动相的反相液相中，含有氮代氧化物杂质的化合物在原料药后被洗脱出来。超高效液相是在pH=9.0下进行的，所以使用pH=3.0的甲酸铵和乙腈的梯度检测速度变快 。 图7: 酸性流动相条件下进样时，酸降解喹硫平的洗脱顺序。因为感兴趣的峰在喹硫平原料药前被洗脱出来，所以氮代氧化物的可能性不大 . 质谱/质谱分析 精确质量数质谱/质谱分析是为了确认任何碎片数据的存在已进一步支持喹硫平的硫代氧化物降解形式。指示性的碎片最有可能是分子量很低的碎片，在那里所发生的裂解可以区分硫代氧化物和氮代氧化物。 图 8: 裂解分析显示了硫代氧化物/裂解为基础的结构。 通过分析m/z = 137.0063的碎片可得出： -元素组成是 C7 H5 O S -质量精度为 0.2毫道尔顿 -双键等价值（DBE） = 5.5, 对于环结构转换为4.5，而对于硫代氧化物为1.0。 如果N=C是完整的，由于四价碳缺少质子，所以不可能得到228.0480和175.1428的碎片 NMR 支持的数据 核磁数据和建议的结构是一致的  图 9: 被分离的喹硫平中m/z = 402杂质的C13-NMR and H-NMR 结论 从超高效液相转换到制备色谱 -保持L/Dp不变被证明是放大可能性的关键因素 -相容的化学性质可最小化分离度差异 -利用强制降解研究可增加最大化产出的潜能 -质谱引导的馏分收集可保证正确的杂质收集 杂质确认和说明 -ACQUITY UV/SQD 为很多的馏分组成提供快速确认 -高分辨率 SYNAPT MS为母离子和产物离子的元素组成确认提供很好的质量精度 -对于有显著不同色谱行为的结构，高/低PH值流动相测试可以帮助确定建议的结构 -尽管采集了核磁数据（不是决定性的），但它的精确质量质谱/质谱数据证明了杂质是硫代氧 化物而不是遗传毒性结构。

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沃特世推出全新Synapt G2系统， 性能、通用性以及速度表现领跑高端质谱系统 高分辨率质谱(HDMS)系统改变游戏规则的技术 重新定义精确质量MS以及MS/MS的性能水平，开发科学发现的新前沿 　　2009年7月30日，江苏泰州，沃特世公司(NYSE:WAT)今天在第六届中国蛋白组学大学上向中国用户介绍新一代高性能质谱系统-沃特世SYNAPT™ G2系统。SYNAPT G2系统配备QuanTof™以及强化高分辨 MS™技术，将定性和定量四级飞行时间质谱带入更高的性能水准，推动科学家们的研究发现。SYNAPT G2系统为研究学者在生物制药、代谢物鉴定、代谢组学、蛋白质组学、生物标本研究以及食品和环境应用中提供直观的操作性、应用灵活度，打造了全新的性能水准。沃特世在美国费城召开的第57届美国质谱协会年会上推出了SYNAPT G2系统。 　　SYNAPT G2系统具备极佳的定性和定量性能表现，可同时适于质谱分析以及高速数据采集SYNAPT G2 HDMS分析。这对科学家来说，代表着超过40，000 半峰全宽(FWHM)的分辨率、一流的灵敏度、每秒20光谱的数据采集率、精确质谱(1 ppm RMS)信息以及量值多达5个指令的动态范围。联用沃特世ACQUITY® 超高效液相色谱技术(UPLC®)，沃特世SYNAPT G2质谱系统可实现最大化的性能表现，UPLC的速度大大超过其他所有的LC/MS 以及 LC/MS/MS系统。 　　沃特世预期在2009年的第四季度推出首个SYNAPT G2系统设备。 　　借助SYNAPT G2系统，仅通过单次分析运行，科学家们便可从高度复杂样本内以前所未有的速度获取综合全面、准确和精确的数据，并据此进行新的研究发现，作出合理的结论。 　　英国华威大学生物学质谱及蛋白质组学系教授Jim Scrivens说，“改善系统的性能是推进质谱型研究的重要推动力，而结合了高分辨率oa-TOF 技术、宽定量动态范围以及强化(高效)离子淌度分离的SYNAPT G2系统确实在改变着游戏规则”。 　　“SYNAPT G2系统的推出是意义深远的，因为它代表着质谱技术的跳跃性发展……同时对于试图解决分子基本问题的全球研究组织来说，这也意味着是一个重大且新的机会，”沃特世公司质谱业务运作部副总裁Brian Smith说。“我们坚信，沃特世SYNAPT G2将取代普通的QTof和静电离子阱系统，成为高端质谱系统的事实选择，”他继续说道。 　　性能设计改变游戏规则 　　SYNAPT G2系统配备全新的QuanTof技术，结合创新的高场推进器和双级反射技术以及最佳折叠式TOF几何特性的创新离子检测系统。所有的技术整合展现了全新的高分辨率水准、精确质量以及定量性能，而这些性能只有在兼容UPLC分离的数据采集速度下才可获得。当科学家们要求进行色谱分离，同时需要快速、可选择性以及特异性时，将无需降低质谱分辨率。 　　QuanTof高场推进器和双级反射技术减少了与预推送动能量扩展度相关的离子周转时间，同时它的双级反射技术加强了高能量离子的集中度。因此，QuanTof技术提供了最佳水平的TOF综合性能。 　　SYNAPT G2系统创新的离子检测系统，结合超速电子扩程器以及混合ADC检测器电子组件，提供卓越的定量和定性性能表现，适于质谱分析以及高速数据采集SYNAPT G2 HDMS分析。 　　结合第二代Triwave™技术，，Synapt G2系统相比最初的SYNAPT系统，离子淌度解析功能高了4倍。这意味着科学家们能基于样本的大小、电荷、质量以及形状，更好地分离相似的样本组分，同时能鉴定以往不能被呈现的样本组分。此外，QuanTof技术提供了便捷的精确质量测量方法以及适于IMS/MS实验的强化动态范围，最终产生最高检测度以及对新型研究分析的信心。 　　配备新的DriftScope™淌度环境软件(v2.1)，Synapt G2系统可全面地检测组分，通过数据显示新的或微妙的特征表现，同时提供更多有效数据进行流程处理的，诸如混合物碰撞横截面检测(形状)。借助这一功能，科学家们能研究更多的科学发现，同时显著减少关键商业和研究信息的传递时间。 　　“工程精简”分析结果的产生过程 　　SYNAPT G2系统引入了“工程精简”的设计理念，“工程精简”是沃特世Xevo质谱系列的的特点，也是沃特世首次将产品设计带入多功能高端研究等级质谱平台。这些系统特点，包括能在持续监测仪器性能表现的同时校调和准备仪器运行的 IntelliStart™ 技术，自动地进行系统配置，最小化人为错误发生概率，以及让质谱仪器对于仪器操作新手来说更加“容易上手”，而这些研究学者需要始终如一地得到高质量的实验结果。 　　多功能性和灵活性 　　终于，沃特世在SYNAPT G2系统上配备UPLC技术选择方案以及综合全面的离子源，最大化提供了实验方案的次数以及研究应用。这些组成了nanoACQUITY UPLC® 和 TRIZAIC™ UPLC和离子源，包括：电喷洒游离(ESI)、nanoflow ESI、大气压力化学游离(APCI)、联合ESI/APCi (ESCi)、大气压力固态分析探针游离法(ASAP)。相同的离子源方案同样也兼容于沃特世Xevo™ TQ 系统以及Xevo QTof 质谱仪。 　　SYNAPT G2系统APGC离子源的互换式设计能允许科学家们在同一仪器上进行GC/MS 以及 LC/MS实验操作。实验室不再单独配备质谱仪器进行LC/MS/MS或GC/MS/MS操作。 　　沃特世SYNAPT G2系统还配备了高性能的可替交式MALDI离子源，用于范围更广的实验应用。比如：结合MALDI以及离子淌度分离技术，借助沃特世高精度成像MALDI(HDI MALDI)实验解决方案，科学家们能更加容易地定位组织样本内的代谢物以及活性药物混合物。 　　沃特世为MassLynx™ MS 软件提供了一系列多用途和专用的应用管理器，允许Synapt G2系统进行多种作业操作，包括筛选、反滤波、鉴定、目标定量、定性和定量压型和特性描述-以及将所采集的数据转换为有用的结果。 　　今日的平台，明日的跳板 　　Synapt G2产品系列为实验室为现在和将来的研究需求提供系统配置。除了Synapt G2系统的完全HDMS性能之外，科学家们可在HDMS产品包括Synapt G2 MS和MALDI Synapt G2 MS中进行选择，可进行现场升级，以最大化地发掘第二代HDMS的潜在功能。 　　飞行时间质谱仪器的创新惯例 　　1996年沃特世推出第一代商用Q-Tof系统，使得四级飞行时间技术一举成名。随着2006年SYNAPT HDMS系统的推出，沃特世在四级飞行时间质谱仪器内首次引入了新的离子淌度技术。07年匹兹堡会议上，该系统被评为最佳新产品，授予编辑金奖。现在，该系统已在世界上一些最负盛名的大学和研究机构投入使用，包括剑桥大学、伦敦皇家学院、牛津大学、华威大学、利兹大学、加州大学戴维斯分校、加州大学旧金山分校、杜克大学、美国东北大学、洛克菲勒大学、密歇根州Van Andel研究所以及范德毕特大学。 　　Synapt G2系统论证了沃特世对于扩展质谱研究功能的一贯承诺。 　　了解更多的信息 　　如需了解更多关于沃特世SYNAPT G2质谱系统的相关信息，请登录www.waters.com/synaptG2。　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世公司(NYSE：WAT)为基于实验室机构创造商业优势条件已有50年的历史，通过实际可持续的创新使其在很多领域都能取得重大的研究进步，比如医疗卫生服务、环境管理、食品安全和全球水质等。 　　实验室信息管理、质谱分析和热分析等领先分离科学的联合，沃特世在技术上的突破和实验室解决方案为全球的客户提供了经久不衰的平台。 　　沃特世2008年年收入为15.8亿美元，拥有5000名员工。它不断进行科学探索，为全球客户提供卓越的操作方法。

　　多元数学统计方法分析传统草药，使用U P LC 超高效液相色谱/T O F -MS 飞行时间质谱比较不同样品种类 　　Kate Yu, Jose Castro-Perez, 和 John Shockcor 　　沃特世公司，米尔福德，马萨诸塞州，美国 　　前言 　　实验方法 　　传统草药 (THM)或传统中药 (TCM)样品的分析研究是非常具有挑战性的，直接原因是样品的重现性差。植物提取物的成分会因产地，采收季节以及提取方法的不同而发生显著变化。即使提取物是来自同一株植物的提取物或来自相同名称的两株植物，其成分也不尽相同。 　　此外，为了有效的对中药进行质量控制，非常有必要对中草药进行分析比较。中草药样品分析对于传统草药的生理作用机理的研究也是非常关键的。 　　我们开发了一套简便快速且易于通用的传统中草药分析流程的(图 1)。该分析流程利用了沃特世 (Waters®) UPLC® 超高效液相色谱的技术优势，即高分辨，高灵敏度和快速分离，并结合了 SYNAPT™ HDMS™ 质谱系统的飞行时间质谱仪(TOF MS) 精确质量数测定的功能。该工作流程能够应用于化合物鉴定或样品解析。 　　传统中草药中的化合物鉴定在我们已在另一篇应用纪要中讨论过。1 本文将演示如何利用该分析流程借助多元数学统计方法进行样品数据的解析。结果表明，样品的比较可以在几个小时内完成并获得完整的样品信息。这显著地缩短了传统草药样品的分析时间和节省了人力。 图 1. 传统草药分析的工作流程 。 　　本实验的样品来自于两种人参提取物口服液。 　　样品 1 是人参精口服液 (产自中国，JV Trading Ltd. 公司销售，纽约，纽约州)。 　　样品 2 是青春宝口服液 (产自中国，Overseas Factor Corporation 公司销售，旧金山，加利福尼亚州)。 　　每个样品在进样前先过滤。 　　液相条件 　　液相系统: 沃特世 ACQUITY UPLC® 超高效液相色谱系统 　　色谱柱: ACQUITY UPLC 超高效液相色谱 HSS T3 色谱柱 　　2.1 x 100 mm, 1.7 µm, 65 °C 　　流速: 600 µL/min 　　流动相 A: 水+ 0.1% 甲酸 　　流动相 B: 甲醇 　　梯度: 时间 组成 曲线 　　0 min 95% A 　　10 min 30% A Curve 6 　　17 min 0% A Curve 6 　　20 min 95% A Curve 1 　　质谱条件 　　质谱系统: 沃特世 SYNAPT HDMS 质谱系统 　　离子化模式: 电喷雾 　　毛细管电压: 3000 V 　　锥孔电压: 35 V 　　除溶剂温度: 450 °C 　　除溶剂气体: 800 L/Hr 　　离子源温度: 120 °C 　　采集范围: 50 to 1500 m/z 　　碰撞气体: 氩气 　　数据处理 　　化合物筛选和分析: 　　MarkerLynxTM 　　应用管理软件 　　多元数学统计分析: 　　SIMPCA-P 　　结果 　　为保证数学统计结果的可靠性和重要性，每个样品至少重复进样三次。为获得每个样品的所有信息，有必要对它们在正负离子模式下进行LC/MS分析。本实验中，每种样品重复进样六次:三次电喷雾正离子模式分析和三次电喷雾负离子模式分析。出于演示目的，本文只讨论了负离子模式下的结果。 　　图 2 显示两种人参提取物口服液基峰离子色谱图的比较。由图可以看出人参精口服液含成份远多于青春宝并且浓度更高。由于两个样品成份都很复杂，有必要利用多元数学统计工具对两个样品做进一步的分析。 　　图 2. 两种人参提取物样品的 LC/MS 液相色谱/质谱基峰离子色谱图。 　　使用多元数学统计方法对 LC/MS 数据进行分析的第一步是将三维 LC/MS 数据转换成二维矩阵。这一关键步骤由 MassLynx™ 操作软件中的 MarkerLynx 完成。MarkerLynx 将每一个数据点转换成精确质量保留时间 (EMRT) 数据对，并以二维矩阵型式将结果列出 (图 3)。 　　本实验共得到了 1184 个精确质量保留时间 (EMRT) 数据对 。可检测到 EMRT 数据对的数量取决于色谱峰检测限的设定，该参数可由分析人员设定。 　　图 3. MarkerLynx 结果显示窗口。窗口上部为样品进样列表。窗口下部为精确质量于保留时间数据对列表。 　　从 MarkerLynx 报告界面上，仅需点击 P+ 按钮，EMRT 数据对列表就可以被自动导入到 SIMCA-P 中。首先利用主成分分析 (PCA) 法对对数据进行处理。之后利用无监督统计学模型，结合正交偏最小二乘法进行两维数据分析 (OPLS-DA)。图 4 列出正交偏最小二乘法数据分析的分值结果。该图清晰地展示了两个样品组在 X 轴和 Y 轴方向的差别。 图 4. 数值图表示人参精口服液和青春宝口服液明显的分组情况。 　　为进一步鉴定两组样品的化学组成上的差异性，正交偏最小二乘法得到的数据分析结果散点图如图 5 所示。 图 5. 基于正交偏最小二乘法获得的人参精口服液和青春宝口服液数据分析结果散点图。 　　在散点图中，每个点代表一个精确质量保留时间数据对。X轴表示可变量。一个数据点距离 0 越远，该点对样品差异的贡献越大。Y 轴表示在同一样品组中的样品间的相关性。精确质量与保留时间数据对距离 0 值越远，进样间的相关性越好。因此，在 S 型曲线两端的 EMRT 数据对代表了来自每个样品组的可信度最高的特征离子。 　　例如，图 5 中，接近 S 图右上角的 EMRT 数据对为来自青春宝口服液可信度最强的特征标记物，接近 S 图左下角的 EMRT 据对为来自人参精口服液可信度最强的特征标记物。 　　这些特征的 EMRT 数据对可以被选择性地捕获，并获得每组样品中特征标记物列表，并以 TXT 文件保存下来。这个 TXT 件可被输回 MarkerLynx ，产生一个结果列表，从而用于元素组成搜索以及数据库搜索。图 6 显示了从两组样品 S 图中获得的十个特征的精确质量与保留时间数据对列表。 图 6. 利用正交偏最小二乘法从两个样品数据分析散点图中获得的最高贡献的十个精确质量保留时间数据对列表。 　　图 6 表明保留时间为 6.45 分钟质荷比为 945.5419 离子是人参精样品中最显著的标记物，可信度达 0.999。保留时间为6.33 分钟质荷比为 801.5021 的离子是青春宝样品中最显著的标记物，可信度达 0.994。 　　此外，相比人参精样品(从质荷比 783 到质荷比1187)，青春宝样品中最特征的十个 EMRT 数据对在较低的分子量范围内 从质荷比 623 到质荷比 955)。这说明人参精样品的十个特征的标记物中的大多数含有三至四个糖环，而青春宝样品中最特征的十个标记物含有二至三个糖环。 　　差异性最大的十个 EMRT 数据对也可以用棒状图格式进行查看。图 7 列出人参精 (7a) 和青春宝 (7b) 十个差异性最大的标记物的棒状图。 图 7. 人参精 (7a)和青春宝(7b)十个差异性最大的标记物的棒状图。 　　棒状图提供了列表中已经鉴定的标记物的额外信息，显示被研究的两个样品组十个差异性最大的 EMRT 数据对的直接比较结果。在图 7 中，人参精样品的十个特征标记物在青春宝样品中几乎没有被检测到。而来自青春宝样品的十个特征标记物在人参精样品中被检测到具有很低的强度，有些也未能检测到。 　　此外，棒状图也提供了一些半定量的信息。来自青春宝样品的十个最大标记物比在人参精样品中检测到的强度高。表明青春宝口服液是比人参精口服液更纯的提取物。 　　如上所述，从 SIMCA-P 得到的文本文档可以直接导入 MarkerLynx 结果列表中。图 8 显示填入两组结果的 MarkerLynx 结果窗口界面，每个表格代表一组。 图 8. 导入精确质量与保留时间数据对的 MarkerLynx 结果显示窗口界面， 文本文档从 SIMCA-P 散点图获得。 　　从 MarkerLynx 结果表格中，可以对每一个 EMRT 数据对报告中的精确质量进行元素组成分析检索。此信息可进一步用于作现有数据库搜查，寻找推断的该成分的化学结构(如果 　　数据库中存在该种标记物)。举例来说，我们从青春宝样品中选择一个质荷比为 971.4880 的 标 记物，其元 素 组 成 为 C48H76O20，对公共 平台数据库，Chemspider 进行检索。其中一个可能性如图 9 所示。 图 9. Chemspider 数据库中检索的到的质荷比 971.4880 的可能结构。 　　从该信息很容易返回到液相色谱/质谱 LC/MS 原始数据，利用飞行时间 TOF MSE 数据1的碎片离子来确认推导的结构的准确性。 　　结论 　　本应用文集演示一种通用智能化的传统中草药样品分析的工作流程。相对于传统的分析方法，当前这种方法对于相当复杂样品的分析非常有效。 　　通过 UPLC® 超高效液相色谱/SYNAPT™ HDMS™ 质谱系统的进行飞行时间质谱分析，首先采集含有精确质量测定的原始数据。当将这些数据作为精确质量保留时间数据对转成二维矩阵形式，多元数学统计分析方法即可对这套数据进行分析。每个样品的最特征的离子可以从 SIMCA-P 的正交偏最小二乘法数据分析散点图中获得。结果可以导回 Markerlynx 的结果列表中。如果标记物是已经解析出的化合物，可利用数据库检索其元素组成及化学结构。 整套分析方法简便，快速适用性强。它可以很方便地应用到不同类型的传统中草药样品分析之中。因此，在显著节省资源的同时获得最大信息量。 　　参考文献 　　1. An Intelligent Workflow for Traditional Herbal Medicine: Compound 　　Identification by UPLC/TOF MS. Yu K, Castro-Perez J, Shockcor J. Waters 　　Application Note. 2008; 720002486EN.

明智之选 – ACQUITY UPLC（超高效液相色谱） 2004年沃特世公司推出了ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统，这项技术突破了传统色谱分析的局限性，将分离度、分析速度和检测灵敏度同时提高到了前所未有的水平。当时沃特世就曾预言：UPLC这项全新的液相色谱技术将从此重新定义分离科学。 如今，世界各地已越来越多的实验室正在使用ACQUITY UPLC系统，他们不仅能够获得更高质量的分析数据，同时提升了所在组织及实验室的声誉和行业竞争力。全球的科学家都称赞UPLC是色谱分离科学领域革命性的创新技术和产品，沃特世持续不断地为他们的实验室提供创新动力。 ACQUITY UPLC系统的问世给了其他许多HPLC供应商开发类似产品的灵感，这也给实验室液相分离技术注入了活力，进一步证实了UPLC技术的前瞻性和沃特世长期以来坚持的“悉心听取客户需求，为用户需求而创新”发展理念的正确性。 在过去五年，沃特世时刻关注和倾听客户向我们提出的建议和批评指正，不断拓展我们的产品和服务，来满足不同领域的应用需求。 ACQUITY UPLC分析平台 沃特世不断拓展UPLC分析平台，从紫外检测器，二极管阵列检测器，荧光检测器，蒸发光散射检测器到涵盖包括单四极杆，串联四极杆，飞行时间质谱等LC-MS联用技术来满足用户不同的应用需求，包括ADME筛选、食品安全、生物分析、临床试验分析、代谢物鉴定、代谢组学、方法开发和开放性实验室应用等。 ACQUITY UPLC色谱柱 众所周知，色谱分离的核心是色谱柱，从2004年推出ACQUITY UPLC系统至今，我们推出了两种UPLC颗粒，八种不同键合相的常规UPLC色谱柱以满足用户常规分析以及方法开发的需求；同时我们还提供专用于氨基酸、多肽、蛋白质以及核酸片段分析的全面解决方案。2006年下半年，沃特世公司经过两年多的研究开发，推出了ACQUITY UPLC的专用保护柱VanGuard，帮助您有效延长柱寿命。 今年沃特世将采用更加苛刻严格的质量标准来控制色谱柱的重现性，确保客户获得更高品质的实验结果。 软件 沃特世提供多种软件解决方案，包括Empower软件以及质谱应用软件MassLynx，后者包括多种为特定应用而开发的Application Managers软件包。 UPLC用户交流平台 沃特世公司在2008年建立了ACQUITY UPLC网络社区，已经有超过2200会员。所有UPLC用户凭仪器序列号均可免费加入，会员可以在这里得到沃特世最新的应用资料，最新的网络培训课程等，同时还可以就自己遇到的实际问题和沃特世公司的应用专家以及其它的会员进行沟通。 从今年开始，沃特世中国将组织举办针对不同主题的UPLC高级用户研讨会，每季度一次，为用户搭建一个针对自己行业的交流平台，分享实验技术和最新的应用体验。

沃特世和华威大学签署研究合作协议，旨在推进新型质谱技术的应用 协议核心是建立沃特世生物医学质谱中心 　　2009年4月15日，米尔福德，马萨诸塞州， 沃特世公司(WAT:NYSE) 宣布和英国沃里克郡考文垂华威大学共同签署了合作研究协议，支持新型质谱技术包括沃特世SYNAPT 高分辨(HDMSTM)质谱仪的发展、开发和应用。该项合作协议为科学家们借助生物医学质谱仪为研究项目获得更有意义的影响铺平了道路，该项影响已由经同行评论的刊物、国际会议中的报告以及顶尖学术项目证实。 　　该项合作协议的核心内容是在华威大学内建立“沃特世生物医学质谱中心”，是质谱技术研究进展的中心。该中心将为全球的科学家们提供资源以在生命科学领取内使用基于LC/MS的尖端技术。 　　“我相信这种在被公认的技术领导者和领先的研究型大学之间的合作，为众多令人振奋的新项目的发展提供了平台，”华威大学生物医学系教授James Scrivens说道，“我期待着能作为团队一分子，将我们的研究成果传递到更多的人群中去”。 　　“华威大学已连续位列顶尖研究型大学名单，并拥有在生物医学质谱方面历史性的记录，”沃特世公司质谱营运部副总裁Brian Smith说道，“然而，该项协议不是仅基于盛誉，它是建立在与华威大学，尤其是James Scrivens教授之间的长期合作关系上。沃特世期待着通过互利研究，将这种关系带到下一个水平上，同时借助尖端的基于质谱研究的战略，为生命科学家们提供世界级的学术资源。” 　　关于质谱技术的更多信息，沃特世近期已出版了MS质谱入门书，内含现代质谱的实践描述，哪些人使用质谱仪，各种质谱类型，质谱数据准确和分辨率的重要性，以及质谱词汇表。 　　(http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10073244) 　　关于华威大学 　　在众多英国大学中，华威大学是其中独一无二的，也是一所成功的学院。尽管华威大学是相对年轻的大学，但如今它已是英国名列前茅的大学之一，在研究和教学上以及创新方面享有广泛被认可的盛誉，其与商业界及制造业企业也保持有密切的联系。在2008年英国政府推出的研究评估测试中，华威大学位列全英第七名，得分为4星(世界领先)或3星(国际优秀)的大学性研究占到了65%。 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　沃特世公司(NYSE：WAT)为基于实验室机构创造商业优势条件已有50年的历史，通过实际可持续的创新使其在很多领域都能取得重大的研究进步，比如医疗卫生服务、环境管理、食品安全和全球水质等。 　　实验室信息管理、质谱分析和热分析等领先分离科学的联合，沃特世在技术上的突破和实验室解决方案为全球的客户提供了经久不衰的平台。 　　沃特世2008年年收入为15.8亿美元，拥有5000名员工。它不断进行科学探索，为全球客户提供卓越的操作方法

美国药品管制局购买沃特世超高效液相色谱仪(ACQUITY UPLC) 用于培训法医化学分析师进行毒物筛查和概评 　　2009年4月29日，米尔福德，马萨诸塞州，沃特世公司(WAT:NYSE) 宣布，美国药品管制局(U.S. DEA)购买沃特世ACQUITY® 超高效液相色谱仪，用于在美国弗吉尼亚州杜勒斯的特殊药品检测和研究实验室(Special Testing and Research Laboratory)的新法医化学分析师们进行培训。 　　法医学实验室是一项重要的资源，协助地方性、州立以及联邦执法机构监测和打击非法药品的滥用以及贩运，包括将合法生产的药物流通到非法的市场上。 　　法医学实验室在协助地方、州政府以及联邦执法机构监督和打击非法药物滥用和贩卖，包括将合法生产的药物流通到非法市场上，起到了很大的作用。 　　比如，美国药品执法局从法医学实验室内取得的关于处方药物区域使用数据，诸如羟二氢可待因酮和二氢可待因酮非药性目的使用，告知采取药物政策和药物执法行动，帮助解决犯罪行为。每年，被截获的数百万药物由全国政府网络和私立法医学实验室进行分析。 　　例如，美国药品管制局根据从法医学实验室获得的数据，处方止痛药，诸如羟考酮和氢可酮的非医疗目的的区域使用状况，形成可靠的毒品管理策略和主动的强制措施，来帮助解决犯罪问题。每年全国的政府网络法医学实验室和私立法医学实验室都要分析数百万种被截获药物。 　　自2004年起，美国药品管制局(U.S. DEA)已开始应用沃特世ACQUITY®超高效液相色谱(UPLC®)技术进行毒品概评，并且对该技术用于毒品筛查分析进行了详细的考察。 　　对于药物定性应用，也就是专家们痕量杂质诸如合成药物内的前体化学品，或者是自然产品如鸦片中提取的成分进行分析，结果显示相对于使用传统的HPLC技术，联用UPLC和质谱仪(UPLC/MS/MS)将获得高于2倍的分辨能力，而且所获得的特异性和灵敏度高于使用光电二极管阵列的HPLC。这些痕量杂质在药物和特定个体匹配过程中是十分重要的，而且可以潜在地链接到有类似杂质的其他示例中。 　　关于在毒品概评上的应用，主要指专家们通过对痕量杂质，例如合成毒品的前体化合物或者天然产物的成分例如鸦片提取物的分析来确定毒品来源，结果表明用UPLC联用质谱仪比使用传统的HPLC可获得2倍强的分辨能力，比HPLC联用光电二极管阵列检测器具有超强的特异性和灵敏度。比对这些痕量杂质是否相似能够提供关于截获毒品与某个毒贩相关，或是可能与其他的案件相关的信息。 　　美国药品管制局(U.S. DEA)最新购买的沃特世ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪使沃特世ACQUITY UPLC 以及 UPLC/MS/MS 分析系统的数量在其全国实验室不断上升。 　　关于沃特世UPLC液相色谱产品的更多信息，请浏览www.waters.com/uplc. 　　关于沃特世公司 (www.waters.com) 　　50年来，沃特世公司(NYSE：WAT)通过不断提供实用的、持续的技术创新为全世界借助实验室技术的机构，例如医疗服务、环境管理、食品安全、水质控制等，创造商业优势，并能不断进步。 　　实验室信息管理、质谱分析和热分析等领先分离科学的联合，沃特世在技术上的突破和实验室解决方案为全球的客户提供了经久不衰的平台。 　　作为分离科学、实验室信息管理、质谱技术和热分析技术的组合平台的前驱，沃特世在技术上的突破和实验室解决方案为全球用户的成功提供了经久不衰的支持。 　　沃特世2008年年收入为15.8亿美元，拥有5000名员工。。沃特世引领全球用户实现科学新发现并享受具有卓越性能的操作系统。

沃特世获选2009年度美国50家最佳企业   当之无愧的行业领导者和值得信任的合作伙伴     2009年4月16日，中国上海，沃特世公司(NYSE:WAT)宣布：沃特世公司近期入选本年度美国《商业周刊》50家最佳表现公司名单。再一次充分证明了沃特世在技术创新和实验室解决方案领域的全球领导者地位，是客户值得信任的合作伙伴。   “商业周刊50强”的评选对象是标准普尔500指数的相关企业。根据企业最近12个月内和最近3年内的产品销量、纯利增幅、长期利润预期、股票预期及债务比率等10项指标，《商业周刊》给出入选企业的综合表现评价。排名的依据为两个方面，第一是对过去三年中该公司资本的平均回报率和销售额增长速度；第二是将该公司与同行业其它公司进行比较，筛选出绩佳公司。《商业周刊》编辑组成员对初选名单进行严格的评审，综合各项指标及因素的考核后，最终给予客观公正的评价，而这种结果往往是单一的财务评价方式所不能提供的。   在公布的本次年度50家最佳公司名单后，哈佛大学商学院教授、创新专家Clayton H. Christensen对此发表评论：“这些入选的公司就是我们所谓的（传统）经济的改革者”。而《商业周刊》总编Dean Foust同样也对此表示肯定 ：“今年《商业周刊》年度50家最佳表现公司的共同点就是创新，他们都是在各自行业内改变了过去在团队协同作战时共同遵循的游戏规则。”   关于沃特世（www.waters.com） 沃特世公司为以实验室为依托的机构提供实用、可持续性的创新产品，帮助它们在全球医疗服务、环境管理、食品安全以及水质等领域取得重大进展，从而占据所在行业的业务优势。   沃特世开创分离技术、实验室信息管理、质谱和热量分析等一系列相关技术，取得的技术性突破和实验室方法为确保客户成功提供持久性平台。   沃特世2008年实现年收入15.8亿，现有员工5000名，推动全球客户做出科学发现，实现卓越操作。 Waters为沃特世公司商标。 关于商业周刊《BusinessWeek》 《商业周刊》是一个全球性的商业媒体组织，为世界各地的商业精英提供商业报道和解析。由美国麦格劳·希尔出版社于1929年创刊发行，它以每周470万的发行量傲居商业杂志榜首，发行范围超过140个国家。1994年启动的BusinessWeek.com网站，已经成为日常商业新闻、信息和服务的主要供应商。

　　沃特世公司Pittcon 2009新品展示 　　继续致力于应对当今改善实验室运营的挑战 　　沃特世为科学家、商务和实验室管理者提供更多他们所希望得到的绩效： 　　效率、数据质量、生产力和收益率 　　在全球经济衰退的背景下, 沃特世公司(NYSE:WAT) 在2009年3月8日– 13日举行的第60界匹兹堡分析化学和应用色谱会议(Pittcon)上依旧展示了它行业领先的分析仪器和信息学产品如何应对当今科学和商业挑战。 　　沃特世公司全球市场副总监Rohit Khanna 博士说:” Pittcon 2009 会议已不像过去那么简单, 因为当今的市场风险变得越来越大。”他认为,”在不可预测的情况下, 我们的客户需要尽全力实现更大效率和更快的速度, ACQUITY UPLC和Xevo质谱系统结合沃特世信息学和化学消耗品是应对当今所有的实验室挑战的最佳方案, 沃特世公司的产品具有无可匹敌的表现和被证实的可靠性, 它重新定义了分析流程。” 　　沃特世在Pittcon 2009会议上详细介绍了其Xevo系列质谱仪, Xevo TQ和Xevo QTof 飞行时间质谱仪, 致力于将实验室效率带上新台阶的超高效液相色谱仪(UPLC®) 及其衍生成套产品。 另外, 沃特世公司还展示了新增的技术——从TharSFC公司获得的超临界流体色谱(SFC)技术。 　　Xevo系列质谱仪– 将先进的质谱技术与更多科学家分享 　　沃特世公司的Xevo台式质谱仪使性能杰出的质谱仪比以前更加容易操作。 Xevo质谱仪是基于工程精简的理念设计的, IntelliStart™技术实现了简便的仪器操作和杰出性能的完美结合, 这让科学家们能更快、更自信地将数据转变成关键的商业知识。 　　沃特世在今年Pittcon会议上新推出的Xevo QTof 四极杆飞行时间质谱仪是一台精密的台式串联质谱仪, 是目前最灵敏的台式QTof系统。 它能与沃特世ACQUITY® UPLC系统联用, Xevo QTof质谱仪是目前唯一能为科学家们实现的UPLC/MSE的性能的商用质谱系统。UPLC/MSE的性能是一种新颖的数据采集方法，能让科学家在最短的时间内使用最少量的样品获得所有的数据。 　　沃特世Xevo TQ 质谱系统是另一个在Pittcon会议上推出的新产品, 它是一台先进的串联四极杆质谱仪,能够将低浓度最复杂的化合物进行高质量的定量分析。 沃特世Xevo TQ质谱仪是目前唯一能够让实验室遵循美国食品药品监管法则进行生物分析方法开发的系统。制定这一法规的目的是为了防止由于目标化合物或它的代谢物在毒物检测时产生基质效应而发生错误; 这样的错误在临床实验中可能导致致命的结果。 　　有了Xevo系列质谱仪, 沃特世公司正将先进的性能和简便的操作相结合, 从而满足实验室更多地回收其在分析技术方面投资的需求。 　　沃特世公司质谱运营副总裁Brian Smith 说:”我们的客户反映, 实验室受到世界经济、资源和全球性竞争的影响比任何时候公司所要求的苛刻任务还要难应付。” 他还说道, ”这些挑战更加加重了实验室的负担, 实验室需要比以前更少地使用资源, 更快更自信地处理复杂问题。 因此, 如今实验室技术的评判标准应该是看它能够多大地提高实验室生产力, 能够多大程度地帮助我们的客户制定成功所需的决策。” 　　UPLC技术– 自从2004年起改变了分析实验室的运作 　　在五年前的2004年Pittcon会议上，沃特世公司推出了超高效液相色谱仪, 它的问世是实验室分析领域创新的亮点, 它是基于创新的液相色谱系统, 获得专利的亚2微米色谱填料技术在之后的几年里改进了分析实验室的运作。 　　Strategic Directions International的总裁Larry Schmid 评论道:”2004年沃特世ACQUITY UPLC系统的问世不仅仅是诞生了一个新产品, 它触发了高效液相色谱的革命.”他还说,” ACQUITY UPLC 的问世给了许多其它HPLC供应商开发相似产品的灵感, 这给实验室液相分离技术注入了活力, 特别是在质谱样品的引入方面。 ACQUITY UPLC 不仅和其它所谓的‘快速液相色谱’显著地加快了分析速度, 而且极大地提高了分辨率, 这正是实验室科学家们所热切需要的。 五年过去了, HPLC市场已经发生了根本性的改变, 这要感谢沃特世公司创新的产品和研发的努力。Strategic Directions International是专为分析仪器行业提供咨询并出版业界展望和时事通讯的机构。 　　自从沃特世UPLC问世以来, 沃特世公司已经安装了上千台UPLC系统, 数以千计的实验室已经将HPLC更换成了UPLC, 它能够显著提高质谱仪的性能。 　　位于加州圣福曼多的PharmaVite LLC公司是一家提供Nature Made®品牌维生素和营养补充品的生产商, 该公司的质量控制负责人Steve Lunetta说:”我们的生意正以难以置信的速度发展, 速度就是金钱。由于我们是生产型实验室, 所以我们没有时间等待或者整夜地分析样品并在第二天早晨才得到检测结果。现在我可以使用ACQUITY来得到我们所需要的结果并放行产品--所有这一切在一天内完成. 这大大提高了我们的生产力。” 　　更新更强的UPLC产品组合 　　作为UPLC投放市场五周年的标志, 沃特世公司丰富了它的获奖产品—UPLC的产品组合,在2009年3月8日-13日举行的芝加哥Pittcon会议上, 全面展示了所有UPLC的补充产品。 其中包括用于纳升级生命科学应用的nanoACQUITY® UPLC; 在线版用于过程监测的PATROL™ UPLC 过程分析器; 大量兼容液相和四极杆质谱的检测器;兼容且高效的串联三重四极杆和四极杆飞行时间/离子淌度研究级质谱仪; 超过50款色谱柱和化学品, 包括更新的ACQUITY UPLC色谱柱，它们被沃特世设计用来符合6 Sigma(DFSS)质量过程; 融合了nanoTile技术的TRIZAIC® UPLC系统, 它对于有限样品, 直通流量, 纳升级蛋白分离具有超高灵敏度;全新的掌中系统运行控制器; 专门用于食品安全、蛋白质、肽、氨基酸、寡核苷酸、代谢物分析、生物分析、杂质鉴定、ADME和 蛋白质组学的UPLC/MS 和 UPLC/MS/MS系统解决方案。 　　UPLC在线分析工具 　　PATROL UPLC过程分析仪是和沃特世ACQUITY UPLC 系统在同一个技术平台上设计的, 它将现有的液相色谱分析从离线的质量控制(QC)实验室直接转到了生产线上, 通过实时分析显著提高了生产效率，减少了处理时间周期，保证了产品质量。 　　在Pittcon 2009会议上, 沃特世公司发布了PATROL UPLC 在线过程分析仪, 它是在Pittcon 2008发布的在线版的补充。 　　想了解更多信息: www.waters.com/patrol 　　应用于纳升级蛋白分离设计的UPLC 　　同样是首次在Pittcon会议上亮相的TRIZAIC UPLC 系统融合了nanoTile 技术。 其设计目的是为了给有限的样品, 直通流量, 纳升级蛋白分离提供杰出的灵敏度, TRIZAIC UPLC 系统可以与沃特世SYNAPT™ High Definition MS™以及SYNAPT MS系统联用。 它将创新的微量流体分离技术和沃特世亚2微米色谱柱相结合, 独特的溶剂传递和综合的数据管理可以适用于大分子和小分子的应用。 TRIZAIC是分离科技领域高智能整合系统的代表, 沃特世公司无与伦比的UPLC技术助推了它的成功。 　　沃特世公司高级产品市场经理Patricia Young 说:”TRIZAIC给我们提供了使用纳升级色谱分离技术将蛋白定性变得简单的方法。 这一专利技术满足了那些想改进解决方案的科学家的需求, 纳流量UPLC给他们带来了蛋白定性, 灵敏度和重现性。 我们希望这个平台能够显著优化鉴定蛋白质的流程。” 　　想了解更多信息: www.waters.com/trizaic 　　UPLC – 给“绿色实验室”带来优异的技术 　　全世界的实验室面临乙腈短缺的严酷现实, 为了节约成本, 他们对UPLC的需求变得更强烈。沃特世全球市场部副总裁Rohit Khanna 说:"由于乙腈短缺,全世界的实验室依赖型企业和政府机构难以依靠传统的液相色谱技术高效运营。 这些机构评估了它们的液相色谱选择, 用UPLC技术可以节省95%的溶剂, 这是应对如今危机和规避未来风险的明智选择。” 　　想了解更多信息: www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10095088 　　Pittcon会议上更多的新产品 … 　　沃特世Empower 2 商业智能管理工具 (BIM) 是一个基于网络的软件解决方案, 它能迅速地分析重要的色谱数据, 从而更快且高质量地作出实验室和商业运营决策。 　　BIM是基于商业智能理念而设计的, 该理念已经在许多领域被成功应用。 BIM的直观界面能让实验室管理者和系统管理员更好地使用Empower™ 2企业色谱软件, 从而更深入地了解实验室, 更好地发掘实验室的优势并确定哪些领域还需增加支持。 　　沃特世大气压气相色谱(APGC)源 能够实现实验室用相同的QTof或串联四极杆质谱仪从LC/MS/MS到GC/MS/MS的转换。 利用它的灵活性, 科学家们可以分析中低极性的挥发或半挥发的化合物, 对于这样的化合物通常使用GC/MS 仪器进行分析。 　　从LC/MS/MS模式的电喷雾离子源转换到GC/MS/MS的大气压气相色谱源只需要短短5分钟而且不需要工具。 一旦转换成功, 大气压气相色谱源将和标准的毛细气相色谱仪对接从而传递准确的,高灵敏度的GC/MS/MS数据。 　　关于沃特世(www.waters.com) 　　沃特世公司(纽约证券交易所代号：WAT)为以实验室为基础的企业提供实用、可持续的创新技术，帮助它们在全球范围内的保健服务、环境管理、食品安全、水质等领域保持领先水平，获得业务优势。沃特世技术创新和实验室解决方案在一系列相关领域均处于领先地位，包括分离科技、实验室信息管理、质谱和热量分析等，为客户提供长久的运作平台。 　　2007 年，沃特世公司的年收入达 14.7 亿美元，拥有 5000 名员工，为不断推动全球客户的科学发现和卓越运营贡献自己的力量。

    2009年2月9日，沃特世公司择元宵佳节之日，在北京威斯汀大饭店为其质谱家族新品XevoTM QTof（四极杆飞行时间）质谱仪举办了新品发布会，沃特世公司中国区总经理张亮裕先生、中国区市场总监舒放先生、MALDI SYNAPT高精度质谱系统产品经理Ronan O’Malley先生、亚太区市场拓展部经理Mark Ritchie先生、中国区市场拓展部高级经理叶瑞莉女士、市场服务部经理伍小薇女士悉数到场。仪器信息网、《中国食品报》、《药物分析杂志》、生物谷、《食品科技》等十几家媒体参加了此次新品发布会。此后沃特世公司相继在天津、青岛、大连、上海、杭州、南京、成都和广州举办了隆重的新品发布会。     沃特世Xevo™ 四极杆飞行时间（QTof）质谱仪（MS）是一种精确质量的质谱/质谱台式仪器，它是有史以来最灵敏的台式 QTof 系统。Xevo 质谱仪遵从 Engineered Simplicity™ 的设计理念，集卓越的仪器性能和简便的操作于一身，旨在变革实验室分析工作流程的每一步，帮助科学家们更快捷、更精确地把数据转换成关键的商业信息。     沃特世公司质谱仪运营副总裁布莱恩·史密斯表示：“企业和独立的实验室要求质谱仪能够对复杂的问题做出清晰的解答，并能方便各行各业的科学家们进行操作。同时Xevo QTOF 将仪器的各种优势性能进行了空前地整合。过去，传统观念认为精确质量的质谱/质谱要想获得有意义的结果就一定会很复杂，而 Xevo QTof 简洁的设计推翻了这一观点。”     Xevo QTof 质谱仪与沃特世 ACQUITY® 超高效液相色谱系统（UPLC®）的联用，为科学家提供了具有独特 UPLC/MSE 功能的唯一商品化的质谱系统——一种新颖并注册专利的新型数据采集方法，使您能以前所未有的速度“在最短时间内获取所有数据”，以期从最少的样品中获取最多的信息。      沃特世凭借 Xevo QTof 质谱仪所带来的QTof 技术，成功应对了实验室日益增长的管理需求。     “在我们的客户看来，实验室中所感受到的来自世界经济、资源和全球化的挑战，不亚于一个组织内的其他任何关键部门所经受到的挑战，”史密斯称，“这些挑战加重了实验室的负担，要求其用比以往任何时候都少的资源以更快的速度回答复杂的问题。因此，我们的客户要想成功，当今的实验室技术就应该以提高实验室生产力和决策能力为标准。”      目前，沃特世 Xevo QTof 质谱仪正在销往世界各地。       更多信息请访问：沃特世科技（上海）有限公司

为了满足日益增长的用户对于仪器、软件、方法培训的要求，Waters 公司将其著名的Connections University 计划引入中国市场。 Waters 公司推出的 Connection University 计划就是要通过不断地更新 HPLC 的知识及技巧，使我们的用户保持最高的技术水平，成为更好的色谱工作者。 现在我们已经开始接受网上报名，您可以进入我们的Connections 学校页面，选择您感兴趣的课程进行登记，我们会在开课前通知您前来参加。 详情请访问Waters公司中文网站www.waters.com\cn。

为了回报广大用户对于 Waters 化学产品的支持，Waters 中国公司化学品部特推出液相色谱消耗品优惠活动，详情如下： 单次购买Waters化学产品金额达到以下要求，即赠送相应礼品      满 3000元 赠送 时尚运动水壶1个；      满 6000元 赠送 品牌运动手表1个；      满 9000元 赠送 腕式血压计1个；      满 18000元 赠送 名牌MP3播放机1个。 活动自公布即日起开始，礼品数量有限，送完即止！ 活动产品范围：除 Spherisorb 和 Nova-Pak 色谱柱以外的所有化学产品（色谱柱、样品瓶、SPE产品、过滤产品）

我们非常荣幸地宣告Sunfire — 创立硅胶基质HPLC色谱柱分离性能的新标准色谱柱的问世。作为一个崭新的、代表先进技术的反相C18/C8键合硅胶色谱柱品牌，SunFire提供优异的峰形，出色的低pH值稳定性，杰出的柱效和最佳的批次重现性。此外，更大的载样量和专利申请中的独特最佳填充柱床密度(OBD)设计，使SunFire制备柱具有无可匹敌的性能、制备放大能力和色谱柱寿命。 面对制药行业苛刻的要求，SunFire色谱柱的性能绝对优于市场上具有竞争力的所有主流HPLC硅胶柱。 如需了解详细信息，请登陆www.waterschina.com 正值新产品推出之际，您购买SunFire色谱柱，皆可享受 30% 优惠。请标明优惠活动代码ZP15。  本次优惠活动截止日期：2005年2月8日（春节前）。

由于业务日益发展，Waters 公司上海代表处已于2005年2月4日迁往新的办公室，具体地址如下： 上海漕河泾开发区钦州北路1198号82号大厦16楼 Tel:(8621) 6495 6999 Fax:(8621) 6495 1999 PC: 200233

4月8日上午，由美国Waters公司与中国科学院大连化学物理研究所合作成立的“DICP-Waters现代分析技术联合实验室”在生物技术大楼举行了隆重的揭牌仪式。Waters亚太区总裁兼总经理Donald Soo、大中国区总经理Richard Chang、大连化学物理研究所包信和所长、参加了揭牌仪式并分别致辞，祝贺联合实验室的成立。Donald Soo先生和卢佩章院士等为联合实验室揭牌。            美国Waters公司历史悠久，分析仪器在国际上享有盛名，基于液相色谱和质谱(LC/MS)的代谢组学、天然产物和环境检测技术平台尤其突出。大连化学物理研究所在分离分析领域具有很深厚的学术积累，在国际上有较好的学术地位，拥有一支高水平的研究队伍。双方秉着资源共享、优势互补、共同发展的愿望，决定在大连化学物理研究所建立一个“DICP-Waters现代分析技术联合实验室”。双方相信此实验室的运行，将大大促进科研项目的进展、科研成果的产生，同时也将有力地推动中国分析分离科学研究工作和国际水准的接轨与互动。相信“DICP-Waters联合实验室”必将成为在业界具有引领作用的科研基地。Waters公司称联合实验室的建立将是其在中国与各重要研究机构合作的开始，希望能够以这种方式来为中国的代谢组学、天然产物和环境检测等方面的研究发展作出贡献。          揭牌仪式后，包所长向应邀参加揭牌仪式的代谢组学国际知名专家、英国帝国理工大学的J. Nicholson教授颁发了荣誉教授聘书。聘任仪式结束后，J. Nicholson 教授为大家作了“Understanding Global Systems Biology Using Spectroscopic Tools and Metabonomics”的学术报告。            又讯：4月9日晚上，在杨胜利院士和许国旺研究员的陪同下，中国科学院副院长陈竺院士在北京亲切会见了Nicholson 教授， 双方对下一步的合作进行了探讨。     

4月8日上午，由美国Waters公司与中国科学院大连化学物理研究所合作成立的“DICP-Waters现代分析技术联合实验室”在生物技术大楼举行了隆重的揭牌仪式。Waters亚太区总裁兼总经理Donald Soo、大中国区总经理Richard Chang、大连化学物理研究所包信和所长、参加了揭牌仪式并分别致辞，祝贺联合实验室的成立。Donald Soo先生和卢佩章院士等为联合实验室揭牌。     美国Waters公司历史悠久，分析仪器在国际上享有盛名，基于液相色谱和质谱(LC/MS)的代谢组学、天然产物和环境检测技术平台尤其突出。大连化学物理研究所在分离分析领域具有很深厚的学术积累，在国际上有较好的学术地位，拥有一支高水平的研究队伍。双方秉着资源共享、优势互补、共同发展的愿望，决定在大连化学物理研究所建立一个“DICP-Waters现代分析技术联合实验室”。双方相信此实验室的运行，将大大促进科研项目的进展、科研成果的产生，同时也将有力地推动中国分析分离科学研究工作和国际水准的接轨与互动。相信“DICP-Waters联合实验室”必将成为在业界具有引领作用的科研基地。Waters公司称联合实验室的建立将是其在中国与各重要研究机构合作的开始，希望能够以这种方式来为中国的代谢组学、天然产物和环境检测等方面的研究发展作出贡献。     揭牌仪式后，包所长向应Waters公司之邀前来参加揭牌仪式的代谢组学国际知名专家、英国帝国理工大学的J. Nicholson教授颁发了荣誉教授聘书。聘任仪式结束后，J. Nicholson 教授为大家作了“Understanding Global Systems Biology Using Spectroscopic Tools and Metabonomics”的学术报告。     又讯：4月9日晚上，在杨胜利院士和许国旺研究员的陪同下，中国科学院副院长陈竺院士在北京亲切会见了Nicholson 教授， 双方对下一步的合作进行了探讨。