色谱分离改变？跟着小编来排查!

色谱分离最常见问题是峰形、分离状况、洗脱时间或性能改变。可以分两个步骤来处理不可接受的色谱分离。首先，从色谱方面来评价存在的问题，其次，对产生问题的原因进行独立分析。

评价色谱分离时最好使用标准品而不是样品。每次进样时应该做好样品的特性和色谱性能记录，以便在出现问题时能够提供历史数据进行对比。

下面小编为大家带来导致色谱分离改变的最常见原因及应采取的解决方法：

1系统不平衡

在实验开始前，色谱柱和检测器要有足够的平衡时间，特别是梯度分析时需要特别注意。

第一次使用离子对试剂时，使用充足的流动相冲洗色谱柱，以达到充分平衡。

2梯度分析时未经充分平衡

在两次梯度分析间应有足够的平衡时间。

进样要保证是初始时间的流动相组分流经色谱柱。

未经充分平衡时会导致错误的保留时间。

3泵压力/运行故障

若泵的压力不稳定。此时，需参考流量曲线图，找出原因并纠正使泵的压力保持平稳。

4室温变化

保证仪器周围温度稳定并达到平衡。如果无法达到温度稳定，或者不能到到平衡，建议使用色谱柱温箱，柱温箱系统应完全将色谱柱封闭。确保预先混合的溶剂能互溶，且流动相已经混合均匀。

5进样体积太大、浓度太高

减小进样体积或稀释原始样品（注：使用弱溶剂，进样体积可增至约为柱体积的10%，使用强溶剂进样体积能达到柱体积的1%）。

6溶剂混合问题

检查溶剂之间的互溶性，如果溶剂的互溶性不好，会引发很多问题，可参阅相关的溶剂互溶性能表。

当溶剂是手动混合时，使用前必须要脱气并过滤。溶剂的管路和泵的流路部分要全部使用新流动相置换，以排除原来残余的溶剂和空气。色谱柱至少需要用10倍于柱体积的流动相来冲洗才能达到被彻底置换的目的。最后，反复几次用标准样品进样分析以验证色谱系统的重复性。若保留时间重复，则之前产生问题的可能原因是流动相和色谱系统自身没有充分的平衡。

当溶剂是从两个或者多个储液瓶中自动被混合时，分离度改变应采用手动混合方式进行排查。如果手动混合保留时间重复，则表明泵或者混合器存在问题，此时，请参考泵的维护手册进行修理或清洗。

7色谱柱被污染

用一根性能已知的色谱柱换下实验用的色谱柱，并进行一系列标准样品分析，比较保留时间，如果新色谱柱保留时间重复，表明原色谱柱已被污染。清洗色谱柱或更换新色谱柱。

注意事项：

1.引起保留时间变化的最常见原因是系统不平衡，开始分析前，系统必须平衡好。

2.分析过程中温度改变是保留时间变化的另一主要原因。

3.建议在等度分离中尽量预先混合好流动相。