终点PCR高速分析-岛津微芯片电泳装置MultiNA

终点PCR（End Point PCR）是一种传统的PCR方法，其特点是在PCR反应完成后进行分析和检测。通常，终点PCR用于定性分析，即判断是否存在特定的目标序列。完成PCR反应后，需要通过凝胶电泳或其他分子生物学技术来验证扩增是否成功，经常在检测样品中的特定DNA或致病基因等情况下使用。传统琼脂糖凝胶电泳技术中终点PCR的反应时长通常为1-2 小时，从制备琼脂糖凝胶到获得结果大约需要3 小时甚至更长时间。

岛津微芯片电泳装置MultiNA是一款可以全自动执行与琼脂糖凝胶电泳相同分析的分析装置。无需制备凝胶，只需将专用试剂盒和分析样品装入设备即可进行分析。使用岛津微芯片电泳装置MultiNA仅需10-15 分钟即可以完成从试剂制备到样本收集等的分析前准备工作。

应用案例

岛津微芯片电泳装置MultiNA的终点PCR高速分析

本文介绍采用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix和Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cylcer扩增PCR产物，利用岛津微芯片电泳装置MultiNA进行的终点PCR分析。

1样品配置及分析条件

PCR材料使用了50 ng的Human genomic DNA，PCR扩增目标是Human Beta-2-microglobin。试剂使用了Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix (图1A) ，PCR反应中使用了Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cycler (图1B) ，PCR的Cycling setting(表1)所示。PCR反应在n=3下进行。

2通过MultiNA测定PCR产物

利用岛津微芯片电泳装置MultiNA对PCR产物进行了分析。分析荧光色素使用SYBR Gold, MultiNA专用试剂盒和DNA-1000试剂盒 (表2) 。

3分析结果

通过微芯片电泳结果，我们能够确认从Human genomic DNA靶向的HumanBeta-2-microglobin区域的扩增为200 bp, 600 bp, 1000 bp和更高的1400 bp (图2) 。其中200 bp、600 bp和1000 bp,可以清楚地确认扩增DNA，1400 bp的扩增产物相比较少，主要可能是由于PCR扩增效率较低。但与琼脂糖凝胶电泳+溴化乙锭染色相比，MultiNA的荧光检测灵敏度高出一个数量级。因此我们也认为本次检测成功地检测出了1400 bp的扩增产物。

4总结

本次，通过使用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix作为PCR的反应试剂，使用Eppendorf公司的Mastercycler X50s进行终点PCR, PCR的反应仅用了13 分钟30 秒就完成。此外，PCR产物通过岛津微芯片电泳装置MultiNA进行全自动分析，无需制备凝胶。无论样本数量多少，MultiNA在大约10 分钟到15 分钟内即可完成从试剂制备到样本收集的分析前准备工作，并开始电泳，并且分析开始后，用户只需等待结果无需人工操作。

通过结合使用GoTaq Rapid PCR Master Mix、Mastercycler X50s和岛津微芯片电泳装置MultiNA,可以大大缩短终点PCR所需的时间，并减少人工操作环节。

关联仪器:岛津微芯片电泳装置MultiNA

①. 高速分析：最多108 个样品的高速自动分析操作

②. 高灵敏度：灵敏度约高于使用溴化乙锭染色法电泳胶片的10 倍

③. 高分辨率：可以解决琼脂糖凝胶电泳难以分离的碎片

④. 高重现性：通过内标的自动混合与共迁移，实现高重现性

⑤. 成本低廉：每次分析完成后，所有管线及微芯片自动清洗，微芯片可重复利用

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