Sterisart®的隔膜可确保从封闭系统无菌检测装置中进行可靠取样

Overview

药品通常是根据严格的GMP指南生产的，作为批量放行前的保险措施，所有药品都要经过严格的无菌检测，以确定是否存活微生物。Sterisart®是一种基于膜过滤法的无菌检测封闭系统。该封闭系统不需要对膜过滤器进行物理操作，从而可降低二次污染和假阳性的风险。

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本篇《Sterisart®的隔膜可确保从封闭系统无菌检测装置中进行可靠取样》应用说明评估了配有隔膜的Sterisart® 封闭系统无菌检测装置用于样品反复无菌提取的性能。结果表明，即使在超过100 次重复的隔膜取样操作（远远超过任何可预见的取样要求）之后，隔膜仍然完好无损，并且这些容器中包含的生长培养基仍然无菌。

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材料和方法

耗材

胰蛋白大豆肉汤（TSB）（Gila/BD）、硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）（Gila/BD）、TSB（Merck）、FTM（Merck）、胰蛋白大豆琼脂（TSA）（Merck）、玻璃反应管 - 30 mL（Borosil）、针头–0.90×70 mm、2OG×2¾（Sterican–B.Braun）、注射器–F Luer（Omnifix–B.Braun）。

设备

Sterisart®，培养箱，Combisart® 三联过滤支架，直排泵。

Sterisart® NF无菌试验系统

16467--------GSD, 16475--------GSD, 16466--------GSD

膜过滤

在隔膜取样试验中，对来自三种隔膜类型的分别10个Sterisart® 料筒（总共 30 个）进行了分析。

10个料筒中有一个（来自每种Sterisart® 容器类型）作为阴性对照。

在无菌条件下，在生物安全柜中往Sterisart®培养料筒中灌装生长培养基。将两个Sterisart®料筒放置在泵支架上，并使Sterisart®管路系统穿过泵头。使用封闭的翼形螺母塞密封每个Sterisart®料筒的出口。两个无菌通风过滤器不加盖。打开Y型分配器出口处的黄色管夹，并关闭相邻的白色管夹。将双针金属钉插入装有FTM的瓶子中，并开启Sterisart®泵。将预定体积（75 ml）的培养基转移到第一个料筒中后，关闭泵。打开Y型分配器出口处的白色管夹，并关闭相邻的黄色管夹。将双针金属钉插入装有TSB的瓶子中，并开启Sterisart®泵。将相似体积（75 ml）的培养基转移到第二个料筒中。使用培养料筒入口上方的两个夹具密封管道，从而切断管路。

将含有TSB的Sterisart®料筒在 22.5 °C下培养 24 天。其中TSB是用于检测低发病率真菌和好氧细菌的推荐生培养基。将含有FTM的Sterisart®料筒在 32.5 °C下培养 24 天。其中FTM是用于培养需氧、微需氧和厌氧微生物的推荐生长培养基。

隔膜取样

无菌条件下，在生物安全柜中从Sterisart®料筒中提取样品。从Sterisart®培养料筒的顶部、中部和底部提取三个样品，每个样品 100 μl，每天提取两次，共持续 17 天（3×2×17=102 个样品）。将提取的样品转移到含有无菌液体培养基、FTM和TSB的玻璃反应管中。含有TSB的小瓶在 22.5 °C下培养 14 天，含有FTM的小瓶在 32.5 °C下培养 14 天。通过对每个Sterisart®装置和相应的提取样品进行拍照，以便记录结果。

微生物计数

使用放置在无菌Combisart®过滤装置中的黑色网格膜过滤器，并连接至直排泵，以进行最后的检查。在Sterisart®料筒中培养 24 天后，将 60 - 70 ml TSB填充到漏斗中，并通过黑色薄膜过滤器过滤。使用无菌镊子将过滤器转移到TSA板上，并将该板在 36 °C下培养 3 - 5 天。然后检查这些板是否有微生物污染。

结果与讨论

在 102 次隔膜穿孔并反复提取样本后，确定所有Sterisart® 料筒（3 × 9 个含有FTM，3 × 9 个含有TSB；第 10 个料筒含有FTM和TSB作为各自的对照）均为无菌，且在 24 天后未检测到微生物污染。（图1）

同样，所提取的样品也是无菌的，没有微生物生长，这表明Sterisart®隔膜可以实现高效和高度可靠的无菌取样。（图2）

图1：重复提取样品后无微生物污染。Sterisart® 16466 GSD 版本填充了TSB（A和B）或FTM（C和D），并分别在 22.5 °C和 32.5 °C下培养 24 天期间的代表性图像。阴性对照显示在A和C中。

为了进行样品提取，B和D中的料筒被穿孔 102 次。

图2：从Sterisart®16466 GSD 提取的样品在玻璃瓶中培养后没有微生物污染。将样品接种到含有TSB（上层板）和FTM（下层板）的玻璃瓶中，分别在22.5° C和32.5° C下生长 14 天。

当隔膜被多次刺穿或使用了不合适的针型时，可能会发生“结晶”的情况。在某些Sterisart®料筒中，仅在 36 次穿孔后就观察到微小颗粒。24 天后在黑色薄膜过滤器上收集这些颗粒，并监测其在TSA板上形成菌落的能力。这些颗粒即使在培养五天后也没有表现出任何生长迹象，这表明这些颗粒在本质上不具生物活性。根据其形态，我们得出结论，这些惰性颗粒是在注射器针头反复穿刺过程中从隔膜上剪下的橡胶碎片。这些碎片不会影响无菌试验的效果，并且几乎不会落入在生长培养基中。

结果表明，Sterisart® 料筒即使在连续提取 102 个样品后，仍然是一个封闭且无菌的装置。

结论

总而言之，该研究证明了Sterisart®隔膜的强大性能，即使在提取了 100 多个样品后仍能保持完整的无菌环境。

在无菌检测产品中，由于防腐剂和抗菌剂的存在，在很大程度上阻碍了依赖直接接种的快速检测方法的采用。此类产品的膜过滤及随后的膜冲洗可减少无菌检测期间出现假阴性的风险。通过膜过滤实现大体积分析，并实现样品提取，从而为用户提供了将封闭系统无菌检测与快速无菌检测方法相结合的能力。