本文和本刊同期第2-4页瑞士苏黎世国家实验室的文章有着同样的分析目标，但采用的方法不同。然而，与当前的分析食物中偶氮染料的方法相比，两种新的HPTLC方法都显示出明显的优势。分析工作者可根据其任务选择最恰当的方法。 法国在2003年从来自印度的辣椒中检测出苏丹I。这是欧盟食品和饲料快速预警系统（RASFF）成立后首次对成员国发出警报。接下来，越来越多的产品被发现含有违禁的脂溶性偶氮色素如苏丹I-IV和苏丹红7B（在国际癌症研究总署（IARC）被划为3类致癌物），以及苏丹红B、苏丹橙G和对位红。仅自2008年至2009年上半年，就有60多起案例被RASFF通报[1]。 高效薄层色谱法在样品的快速和低基质干扰的高通量筛选方面是不二选择。对于对可见光有强吸收的偶氮类染料而言，检测效果非常突出。除了和数据库的紫外/可见光谱对比外，质谱联用提供了进一步确认阳性结果的能力。采用Cerno Bioscience公司的MassWorks软件，分析者甚至能够从低分辨率质谱数据中计算得出精确分子量和元素组成。因此，一种快速可靠的对有关色素进行鉴别和定量分析的HPTLC方法被开发和用来检测单味调味品和混合调味品粉末（红辣椒、咖喱和灯笼椒等）。该方法正在进行评价并延伸到酱类食品的检测中。 8种近年来在调味品和植物油中最常见的非法添加色素[1]在咖啡因浸渍的硅胶板上的分离度最好。在方法开发阶段对不同的色谱系统进行了考察，然而在咖啡因改性的硅胶板上的获得的谱图结果比在正向和反向硅胶板上都要好。苏丹IV和苏丹红B作为位置异构体在板上很难分开，即便对于LC/MS-MS系统来讲将区分二者也相当困难[2]。 本文还首次采用了一种正交的在线HPTLC-HPLC- MS联用技术。除了用来分离随目标成分被一起萃取的薄层板改性用的咖啡因外，这个简单的连接方式实现了选择性的二维分离（C18色谱柱对硅胶薄层板）。因此，偶氮染料的结果可被方便地通过下列方式进行确认：1）紫外/可见光谱，2）质谱和3）不同选择性的第二维色谱装置。所有这些验证都可通过在一块HPTLC薄层板上平行分离大量样品后方便地得以进行。

苏黎世国家实验室是瑞士苏黎世州的官方食品控制机构。为了保证食品安全，该实验室积极采纳各种新的及改进的分析方法，但前提是方法必须可靠。几年来食品分析实验室主任Helmut Kandler博士和他的团队一直致力于将HPTLC方法作为其它技术的有益补充。在和位于瑞士Muttenz的CAMAG实验室的Eike Reich博士和Valeria Widmer的协作下，一种用来检测调味品中非法添加色素的快速和可靠的分析方法被发展并通过了方法学验证。 简介 近年来多个欧洲国家都在市场上的红辣椒粉中发现了偶氮类染料苏丹红I-IV。这些红色和橙色的染料都属于致癌物，因此被禁止应用于食品当中。为了冒充高质量的产品，这些掺伪物被人为加入以改善调味品的天然色泽。 该经过验证的反向HPTLC方法自2007年起被成功地用于苏黎世州实验室的日常检验之中。特别是对辣椒粉，咖喱粉和香料混合物进行苏丹 I、II、III、IV、苏丹红7B、苏丹红G、苏丹红G、苏丹红7B、对位红、FD&C 橙色2号、甲基黄、橘红 2号、甲苯胺红和分散橙 11号等非法色素在可见光下目测评价。然后通过光密度扫描和加样回收率实验对阳性样本进行进一步的确认和定量。典型的掺伪品所受到的污染通常高于100 mg/kg。

在德国斯图加特的霍恩海姆大学食品化学研究所，平面色谱法基于其优势一直被用于食品分析。Claudia Oellig的毕业论文采用这项技术对水溶性食品色谱进行了分析。 简介 为了提高食品安全，鉴于一些食品色素潜在的致癌性，近年来法定批准的可食用色素的种类显著降低。《欧洲国会和议会指导性法案94／36／EG》对所许可的约40种食品色素的用法和许可用量都进行了详细规定。 快速定量分析方法对于确保严格遵守上述法规至关重要。过去的TLC/HPTLC方法通常都局限于分离9至12种的食品色素。本文着眼于一项更艰巨的挑战，即开发出能够同时测定所有最常用的25种水溶性食品色素的HPTLC方法。 对比目前的食品色素分析方法，新的HPTLC方法是一种更可靠、快速和低成本的含量测定替代方法[1-3]。它允许在较低成本下进行1000 个样品/天的高通量筛选，平均每个样品的分析时间为1.5 min，溶剂消耗200 μL。由于分析目标比较明确，因此基本的结果阐述可以从薄层板的肉眼判别到吸收光谱的相似度计算直至HPTLC-ESI/MS质谱分析。目标物的分析步骤可根据需要循序渐进。 基于任务需要，分析步骤可按要求选择从薄层板上样品的目测鉴别到判别吸收光谱图直至MS谱图测定。离线系统在此提供了一种低成本和灵活的高通量样品处理方式。

摘要： 人参、红参和西洋参采用高效硅胶预制薄层板点样，采用普通缸和自动展开仪（ADC 2）自动展开，获得较为一致的薄层色谱图。从薄层色谱指纹图谱分析，人参、红参、西洋参的皂苷类成分色谱指纹图谱在整体相似的基础上，又存在着成分种类和含量的显著差异，可以通过其指纹图谱明确对三者进行品种鉴别。 讨论： 1）采用ADC 2展开与普通缸展开，得到基本一致的色谱图，但用ADC 2展开的色谱图分离度较好，能将人参皂苷Rg1和伪人参皂苷Rf分开，而在此色谱条件下，用普通缸展开很难分开，且ADC 2展开基本不受外界环境的湿度的影响，重现性好； 2）《中国药典》2005年版（一部）将人参、红参、西洋参分开收载，三者在功能主治方面不尽相同，但从所含皂苷类成分的比例上，它们都含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1等成分，人参、红参含有伪人参皂苷Rf，而西洋参不含，同样，西洋参含有拟人参皂苷F11，而人参、红参不含。在总皂苷的量上，西洋参比人参、红参高很多，而红参的皂苷元在量上也明显比人参多，所以人参、红参、西洋参的指纹图谱在整体一致的基础上，又存在一定的差异，可以通过其指纹图谱明确对三者进行品种鉴定（Fig 1~ 2）。 3) 控制环境温度在20 ℃以下，分离度好。

摘要： 五味子和南五味子用普通硅胶预制薄层板点样，普通缸和自动展开仪（ADC 2）自动展开，获得较为一致的薄层色谱图。从薄层色谱指纹图谱分析，五味子和南五味子所含主要成分的比例存在显著性差异，可以明确对两者进行品种鉴定。 讨论： 1）采用ADC 2展开与普通缸展开，得到基本一致的色谱图，但用ADC 2基本不受外界环境的湿度的影响，重现性好； 2）《中国药典》2005年版（一部）收载的五味子属药材有五味子和南五味子，两者在功能主治和用法用量上基本一致，但从所含成分的比例上，它们却有很大的差异，主要体现在木脂素类成分比例上，以五味子醇甲和五味子乙素为代表的成分，北五味子含量高而南五味子含量极低或几乎不含；五味子酯甲和五味子甲素成分，北五味子含量极低或不含而南五味子则含量较高，两者所含主要成分的比例具有显著性差异，可以明确对两者进行品种鉴定（Fig 1~ 2）。 注意事项： 1）展开剂放置冰箱10 ℃下分层，取上层溶液作为展开剂，可以避免产生展开剂脱混造成的水印（第二前沿）； 2）在此色谱条件下，用普通薄层板比高效薄层板的分离度更好。

摘要： 蒙古黄芪和膜荚黄芪采用HPTLC高效硅胶预制薄层板点样，分别采用普通双槽层析缸和全自动展开仪（ADC 2）展开，ADC 2展开的色谱图分离度较好。从薄层色谱指纹图谱分析，蒙古黄芪和膜荚黄芪所含皂苷类主要成分的比例基本一致，而黄酮类成分在量上存在一定的差异。 讨论： 1）采用ADC 2展开与普通缸展开，得到基本一致的色谱图，但用ADC 2的色谱图分离度较好，且基本不受外界环境的湿度的影响，重现性好； 2）蒙古黄芪和膜荚黄芪共同收载于《中国药典》2005年版（一部），两者在功能主治和用法用量上完全一致，从指纹图谱上分析，两者所含皂苷类成分的比例上基本一致，不能明确对两者进行品种鉴定，所含黄酮类成分在量上存在一定的差异。（Fig 1~ 2）。 3) 黄芪甲苷为人工产物，来自样品中的各类黄芪皂苷如黄芪皂苷I、II等在碱性环境下提取时的脱糖分解产物。 注意事项： 1） 在《中国药典》2005年版（一部）黄芪鉴别项展开剂中含有三氯甲烷，现改为二氯甲烷，并对展开系统进行了优化； 2） 展开时环境温度20 ℃左右较好，不宜太高。

在《中国药典》收载的三七药材薄层色谱鉴别的基础上进行了条件优化，建立了三七药材HPTLC色谱指纹图谱的分析方法。能将三七皂苷R1与人参皂苷Re很好的分离。此色谱方法简便、可行，重现性好。 评论： 1）采用ADC 2展开与普通缸展开，得到基本一致的色谱图，但用ADC 2的色谱图中人参皂苷Rc分离度较好，且基本不受外界环境的湿度的影响，重现性好； 2）三七皂苷R1与人参皂苷Re一直以来很难在薄层色谱中很好的分离，中国药典1990年版《中药薄层色谱彩色图谱集》中首先报导了能够分离三七皂苷R1与人参皂苷Re的薄层色谱条件，多年来均被用作三七的薄层分析，但由于所要求的层析条件较严格，必须低温（5 ℃以下）、低湿度的环境下才能达到分离的目的，给实际操作中带来不便。此薄层色谱条件，可以有效地分离R1与Re，谱图清晰，温度控制在25 ℃以下就可以，在优化了色谱条件的基础上，建立了三七药材HPTLC色谱指纹图谱的分析方法，此色谱方法简便、可行，重现性好。（Fig 1~ 2）。 注意事项： 1） 相对湿度控制在35%以下分离度较好； 2） 展开时环境温度25 ℃以下较好，不能太高。

展示了采用HPTLC技术对中药柴胡属（Bupleurum spp.）药材及其有毒和混淆品种进行色谱指纹图谱定性鉴别的具体方法。 柴胡属部分药用植物入药部位外形图 （从上到下，从左到右）1～4.柴胡（B. chinense）；5.狭叶柴胡（B. scorzonerifolium）；6.三岛柴胡（B. falcatum）； 7.大叶柴胡（B. longiradiatum）；8.锥叶柴胡（B.bicaule）；9.西藏柴胡（B.marginatum var. stenophyllum） 将显色后获得的荧光薄层色谱图导入CHROMAP指纹图谱分析软件1.51版（珠海科曼中药研究有限公司，www.herbalqc.com），生成灰度扫描图并积分。将26批北柴胡样品的图谱进行计算筛选，共得到24个特征峰构成的北柴胡HPTLC指纹图谱共有模式，见图2。不同品种柴胡的代表性样本的指纹图谱见图3。 各类样本与北柴胡HPTLC指纹图谱共有模式相比，南柴胡各特征峰的比例较接近北柴胡，但绝对含量偏低。有毒的大叶柴胡缺少部分峰群，此区域构成了大叶柴胡指纹图谱的显著特征。锥叶柴胡与指纹图谱共有模式相比，第20号峰较突出，而且小极性成分明显较多。西藏柴胡中11号之前的色谱峰及19号峰明显比其他的品种高。三岛柴胡则与北柴胡指纹图谱共有模式很相似。小叶柴胡和竹叶柴胡样本为全草，只能检测到少数痕量色谱峰。综上分析，不同品种的柴胡在各特征色谱峰的含量及比例上均具有不同程度的差异，构成了各自不同的平面色谱指纹特征。

1 为什么要发展色谱指纹图谱技术？ 　　　中药注射剂中存在大量未知成分 　　　中药的物质基础大多是多成分联合起效的 　　　例子：Radix Angelicae Sinensis (当归) + Radix Astragali(黄芪) 　　　成分—药效相关性的谱效学研究 2 分离研究手段--色谱技术进展 　　　HPLC, HPLC-MSn, LC x LC, 　　　GC，GC x GC，GC-MS 　　　HPTLC,HPTLC-MSn 3 数据处理手段--化学计量学进展 　　　相似度、距离计算 　　　聚类分析、模糊聚类等模式识别 　　　主成份分析、因子分析 　　　人工神经网络（ANN） 　　　相关与回归（谱效学） 　　　分析软件CHROMAP 1.51 4 活性研究手段--药理学及生物化学进展 　　　Online HPLC post-column activity screening 　　　Offline HPTLC activity screening 5 小结

由丝状菌黄曲菌Aspergillus flavus及其寄生曲霉产生的代谢产物-黄曲霉毒素-对人体具有致癌和削弱免疫系统的作用。其中最重要的黄曲霉毒素成分为B1、B2、G1、G2。其中最常见也是毒性最强的为黄曲霉毒素B1。食品通常需要进行黄曲霉毒素的限度检测，譬如规定调味香料中黄曲霉毒素B1含量不得高于5 μg/kg（ppb），同时黄曲霉毒素B2、G1、G2的总量不得高于5 μg/kg。又如规定坚果中的含量限度为B1不得高于1 μg/kg，黄曲霉毒素B2、G1、G2总量不得高于5 μg/kg。 霉菌毒素通常采用液/液萃取法由食品基质中分离富集，如遇到难处理的基质也可采用固相萃取的方法。随后这些成分在硅胶薄层上进行层析分离，一同洗脱下来的基质成分可首先通过以乙醚进行色谱预展开而被去除。随后霉菌毒素以氯仿-丙酮-水的展开剂系统得到分离。最后以光密度法在366 nm处测定化合物激发的荧光强度。获得阳性结果后可进一步通过额外的色谱前衍生化予以确证[1-3]。 英国天然资源研究所（NRI）采用定量HPTLC技术对来自不同亚洲国家食品及调味品的黄曲霉毒素/真菌毒素污染情况进行监控[4]。该方法较HPLC方法更稳健，可适应于各种类型的样品基质干扰并提供与HPLC方法相当的结果准确性和灵敏度。此外分析速度也更快、方法更简便、分析成本更经济。

本节包括以下内容： 　　现代薄层色谱常用的固定相 　　　　按固定相分类 　　　　按硅胶结构分类 　　　　按添加剂分类 　　　　按用途分类 　　 　　高效薄层色谱预制板的性能 　　　　重现性好 　　　　机械强度高 　　　　品种多样性 　　　　分离效果性价比高 　　　　符合GLP要求 　　　　经济方便 　　　　HPTLC薄层板在使用时的注意事项： 　　　　性能差异 　　　　规范化操作 　　　　薄层板的预洗 　　德国ＭＮ® 薄层色谱预制板 　　　　普通硅胶 　　　　　　ADAMANT® 　　　　　　SIL G 　　　　　　DURASIL® 　　　　　　SIL N-HR 　　　　　　SILGUR 　　　　HPTLC硅胶 　　　　　　Nano-SILGUR 　　　　　　Nano-ADAMANT® 　　　　　　Nano-SIL 　　　　　　Nano-DURASIL® 　　　　　　AMD SIL 　　　　HPTLC改性硅胶 　　　　　　Nano-SIL C18 　　　　　　RP-18W F254 　　　　　　RP-2 F254 　　　　　　Nano-SIL CN 　　　　　　Nano-SIL NH2 　　　　　　Nano-SIL DIOL 　　　　氧化铝 　　　　　　ALOX-25 / ALOX N 　　　　特种分离用固定相 　　　　　　POLYAMIDE-6 　　　　　　CHIRALPLATE 　　　　　　SIL G-25 HR 　　　　　　SIL G-25 Tenside 　　　　　　GUR N 　　　　　　Nano-SIL PAH 　　　　　　IONEX-25 SA-Na 　　　　　　IONEX-25 SB-AC 　　　　　　ALOX/CEL-AC-Mix 　　　　　　SILCEL-Mix 　　　　　　GURSIL-Mix

平面色谱中的大部分分离任务通常在硅胶、氧化铝或纤维素等极性吸附剂的预制板上完成。最常用的固定相是6 nm孔径的硅胶60。虽然（反相）疏水性薄层具有一些独特的优势，但目前还没有在薄层色谱上得到广泛的应用。 反相改性（RP-TLC）的预制板对于所有的化合物类别都具有很广的选择性。它不再需要复杂的多元展开剂配比，通常2元流动相如甲醇/水或乙腈/水已经够用。通过调节流动相中水相的比例，保留行为即可得到系统的改变。由于反相吸附剂的表面活性相对较低，也降低了不稳定化合物在分析过程中产生降解的潜在风险。相对湿度对于保留行为的影响也变得非常小，这是由于吸附剂的疏水特性和所使用的含水流动相。反相薄层的另外一个优点是色谱方法可方便地转移到HPLC法的RP-C18色谱柱上。 本文对改性薄层亲脂的疏水性表面特性对薄层色谱行为的影响通过分离甾醇的实例加以探讨，并对HPTLC RP-18 F254s 预制板和HPTLC RP-18W F254s 水可湿性的预制板进行了比较。 一般意义上的反相改性的预制板具有与纯硅胶相比许多与众不同的优点并可用于解决多种分离问题。然而其表面的改性程度和它的水可湿性之间的关系使得其只能采用部分含水的流动相。如果分离需要高含水流动相，要推荐使用低表面改性比的水可浸润的薄层固定相。这类薄层板略高的产品价格对于其所具有的应用优势而言完全物有所值。

自从1975年HPTLC预制薄层板面世以来，由于其所具有的与常规硅胶吸附剂相比较细的平均粒径和更集中的粒径分布范围，使得薄层色谱的分离效能有了巨大的飞跃。目前球形吸附剂的采用使得这一优势进一步拓展。 这种球形硅胶HPTLC预制薄层板具备了更窄的粒径分布范围和经过优化的平均粒径尺寸。扫描电子显微镜图像展示了普通HPTLC薄层和LiChrospher®薄层间的差异。二者的硅胶60吸附剂平均孔径均为6 nm。 与类似的预涂布的无定形硅胶（一种破碎的没有固定形状的硅胶颗粒）固定相相比，在高效薄层色谱法分析中使用球形硅胶在保持选择性和保留行为基本一致的前提下，可带来以下几方面的性能的提升： - 分析时间（大约25%的展开时间） - 分离度 - 检测灵敏度（大约提高50%） 这些优点可以归结为采用球形吸附剂所带来的薄层的均一性的提高。 那么现在唯一的问题就是为了这些优点而采用球形硅胶将提高多少的分析成本？答案是在90%的分析应用里面根本不需要任何额外投入。与之相反，和HPTLC无定形硅胶相比，球形硅胶板SG 60 F254s甚至造价更低。而球形硅胶板SG 60 W F254s和RP-18 W F254s的制造成本则要高25-30%。

神经酰胺类化合物是由神经鞘氨醇长链碱基与脂肪酸组成神经鞘氨脂质的一类。神经酰胺分子结构具有二条长链烷基，一个酰胺基团和二个羟基基团，使其兼具亲水性和疏水性。神经酰胺在包括细胞凋亡等多种诱导生物效应中起重要的信使作用，其也参与细胞分化等多种生理及病理过程。 此外在皮肤角质层中大量存在的神经酰胺对皮肤起到了重要的屏障、粘合、保湿及抗衰老作用，这些作用使其成为化妆品行业最重要的生物添加剂之一。同时也可作为特别是各类皮肤疾病临床诊断的重要参考指标。 此类成分通常UV吸收较弱。通过AMD 2全自动梯度展开系统并结合色谱后衍生化，可在546 nm吸收波长对该类成分进行专属性的薄层色谱扫描含量测定。 本文所采用方法的优点：  简便的样品前处理方法  采用HPTLC-AMD技术获得极佳的分离度  分离时间短（150 min），溶剂消耗较低  基线分离7种不同神经酰胺及脂类及甾醇  衍生化后的神经酰胺的ng级检测限  可用于大量样品筛选及临床日常化验目的

磷脂类化合物的分析在生命科学及食品科学中非常普遍。磷脂是细胞膜结构的主要组成部分，也是靶向制剂的重要辅料。在食品工业作为乳化剂用以稳定天然或合成的混合物制品，如软饮料和肉类制品等等。通过鉴别乳化剂的组成成分，就可以根据该指纹图谱来确定产品的厂家品牌。 磷脂和脂类的区别在于前者的分子中同时包含了疏水基团和亲水基团。与脂类一样，该类化合物的UV吸收很弱。采用薄层色谱法检测磷脂的优势在于可通过色谱后衍生化来对磷脂类成分进行显色观察。 不同磷脂化合物的极性差异较大，且通常与复杂的基质杂质共存。而通过AMD全自动梯度展开系统并结合色谱后衍生化，可在500 nm吸收波长处或以荧光方式对该类成分进行专属性的基于薄层色谱扫描的含量测定。 本文所采用方法的优点：  简便的样品前处理方法  AMD色谱可获得高分离度  待测成分的极性分布范围宽  可同板比较许多样品的图谱  灵敏的ng级定性/定量检测限  可用于任何来源的磷脂样品分析

简介 　　神经节苷脂是一类糖鞘脂，它在细胞识别、细胞粘附、调节细胞增殖和分化过程中扮演着重要的角色，其在人类细胞膜表面有着较高的表达，特别是神经组织中。法国Edouard Herriot医院化验室利用来自从人体黑色素瘤及其他癌细胞分离纯化的神经节苷脂给小鼠免疫接种后产生的单克隆抗体（Mab），采用HPTLC薄层板以免疫分析法检测神经节苷脂。在本项研究中， 3D2, 2C6和4F6被作为特异性抗体来识别神经节苷脂GD3 。 　　位于法国里昂的Edouard Herriot医院是法国第二大拥有病床数医院，该院Dr. Iuliana Popa与Dr. Marie-Jeanne David的研究团队通过协作建立起了在罹患神经系统疾病的患者血清中检测特异性抗神经节苷脂抗体的日常临床诊断应用。该方法被主要用来检测下列神经节苷脂的特异性抗体： • Miller-Fisher综合症患者血清中的GM1, GT1b和GQ1b • 外周神经疾病患者血清中的GM1, GD1a, GD1b, GT1b, GD3, GD2, SPG和SGPG • 黑色素瘤和视网膜母细胞瘤[1]患者血清中的GD3 　　这些抗原存在于人的坐骨神经和脊髓的总神经节苷脂提取物部位，将其进行HPTLC色谱展开后再进行免疫染色测定。 　　虽然大多数医院化验室都使用ELISA检测试剂盒和微量滴定板进行酶联免疫吸附试验，但Dr. Popa和她的团队选择使用HPTLC技术。该技术优于ELISA的最大特点在于可肉眼观察每一个免疫染色成分的斑点，这使得可同时测定外周神经疾病患者血清中的多种抗原。另一个优点在于 　　HPTLC免疫检测方法相比传统化学方法减少了样品制备的工作量。并且即便在没有特异性抗体的情况下，痕量的抗原物质也同样能够得到检测。在拥有高度亲和的抗体时，更可获得ng级检测限。类似地，与类脂体有着高度亲和能力的蛋白质－如霍乱毒素－可与低至0.1 ng级的神经节苷脂GM1发生反应。

茶是山茶科山茶属植物Camellia sinensis茶树叶片制成的饮品，在世界各地数百年来均有广泛的消费。绿茶是茶叶基本未经发酵（氧化）的加工品，因其所具有的保健功效而在当今愈来愈受到欢迎。如今茶叶也成为植物提取物工业的加工原料，作为食品补充剂加入规模不断扩大的各类制品中，如饮料（柠檬冰茶）、营养棒、冰淇凌乃至热门的护肤产品。面对日益严格的用于确保产品质量安全的相关法规，行业迫切需要将每个产品中涉及的所有植物原料都建立鉴别记录。 为了对每个绿茶成分进行含量测定，过去5年来各类分析方法不断被发表。然而，这其中的每个单独方法不足以对产品质量进行全面地描述。因此开发了系统的针对鉴别和产品一致性的检验方法。其中包括多元酚（儿茶酚）、黄酮类成分、氨基酸（茶氨酸）和嘌呤生物碱（咖啡因、可可碱）鉴别的HPTLC指纹图谱方法。 多年以来瑞士卡玛实验室开发了许多天然产物的HPTLC定性鉴别方法。主要包括药用植物和具有重要商业价值的植物原料及其可能的掺伪品或仿冒品。正确地鉴别植物原料对于确保产品的安全性和有效性而言至关重要。有鉴于此，HPTLC技术成为了植物提取物工业最不可或缺的工具。本文的方法是在Frutarom天然植物提取物厂（Frutarom Switzerland，Ltd., Zürich, Switzerland）的Jorns女士协助下完成的。14年来Jorns女士为许多种草药和标准提取物开发了大量的质量控制分析方法，尤其是HPTLC方法。在Frutarom药厂，薄层色谱技术是用来进行日常分析和新品研发的重要色谱方法。在每一个项目伊始，对每一类组分的筛选就是基于HPTLC的。基于所获得的信息，继而对质量控制所需的分析方法进行开发。包括针对确定植物品种的掺伪品的一致性和纯度测试，以及成分测定。对于上述分析任务来说HPTLC作为一种简便快速的方法而言得到了广泛的应用。

一些研究论文业已揭示了薄层板展开后干燥环节对于整个TLC系统的结果不确定度的贡献非常大。如果采用上述的开/闭路循环系统，那么它在薄层板色谱展开后的快速常温干燥过程中可展示出极佳的性能，能够非常迅速地阻止任何色谱扩散行为的发生。这是非常有价值的一点，因为只要展开完毕的固定相仍处于润湿状态，那么扩散效应将不可避免地使得色谱峰变宽。在开发ADC 2新的干燥系统的过程中，我们对各种不同干燥方法所带来的结果误差进行了系统的评估。结论显示与传统的利用电吹风筒的手工干燥方式相比，ADC 2所具有的均匀、快速和非加热模式的干燥模式将这一过程带来的数据差异（标准方差）降低了3倍。非均匀的干燥方式（电吹风）或较长的干燥时间（自然挥干）所引起的扩散都使得整个结果的不确定度大为提高。 ADC 2另一个重要的特点是确保可重现的色谱展开过程。在ADC 2中，基于本身硅胶活度（硅羟基与水分子形成氢键的比例）的不同，TLC固定相会持续吸收或解吸水分子，直至其与循环气流达到平衡。在此过程中，用于湿度控制的气流在薄层板和湿度控制单元间循环流动。这一闭路系统使得气流保持清洁与正确的湿度，并且确保整个系统紧凑高效。 最后需要特别考量的一点是ADC 2系统可兼容所有采用传统双槽层析缸进行色谱展开的分析方法。过去繁琐且重现性差的手工操作现在可以在免除所有外界因素影响的前提下自动地由ADC 2进行。

防晒油是为了保护人体皮肤免受UVA（波长320～400 nm）和UVB（波长275～320 nm）的辐射损害。然而早在1997年的研究结果[1]即显示，一些产品配方中所添加的UV防晒剂当暴露于阳光中会发生成分降解，存在潜在危害。但有关这些降解产物的毒理学相关研究迄今未见报导。本文所介绍的方法结合了色谱分离与生物活性检测技术，能够确定防晒霜产品中光降解产物的具有专属性的生物活性。 HPTLC-生物自发光联用技术系将物理及化学的分离技术与采用发光细菌费氏弧菌（Vibrio fischeri）的生物检测方法将融合的专属性分析技术。生物发光抑制剂可对细菌的新陈代谢造成干扰，其抑制活性的等级与其化合物毒性呈正相关。Vibrio fischeri细菌自1979年起就用于生态毒理学分析，特别是水样测试（德国国标DIN 38412 L34 比色法）以及化学品测试。为了将细菌作为一种HPTLC高效薄层色谱的衍生化显色手段，需要借助Bioluminex特种试剂盒（www.chromadex.com）。 瑞士巴赛尔一史达特州立实验室是该州对于食品、玩具和化妆品等各类生活用品质量进行法规监管的权力机构。作为非食品部门主任的Dr. Christopher Hohl，着力于分析日用消费品中的各种添加物，如保鲜剂、染料色素和紫外防晒剂（UV filters）等。其工作还包括针对各类有害的目标化合物开发适合的GC，HPLC以及HPTLC分析方法。最近引进的基于HPTLC-生物自发光技术的毒理学检测技术帮助该部门在筛查未知化合物时发现了数个感兴趣的具有特殊毒性的色谱成分。 与传统的检测手段相比，生物检测显示了与众不同的结果：一些在色谱中具有高UV响应值的成分斑点并未观察到生物发光的改变，而另一些斑点在生物自显影图谱中则得到了很强的表达，另外也有一些成分在2种图谱中拥有基本一致的信号强度。非常有趣的一点是，UV防晒剂的生物活性强度与其分子量具有负相关性。在1998年后推出的所有新的UV防晒剂类型（分子量均大于400），对Vibrio fischeri基本显示抑制效应。 为了比较HPTLC和HPLC方法以及鉴别降解产物，防晒霜提取物在HPTLC薄层板上展开后，将感兴趣的活性成分斑点从板上刮下并采用HPLC-DAD和LC-MS进行分析。该鉴别流程结果满意，由于HPTLC的塔板个数低于HPLC，因此薄层板上的某些个活性斑点在HPLC系统中被分开为几个色谱峰。生物发光检测下成分的峰高与传统检测方式（HPTLC-UV，HPLC-DAD和LC-MS）下的响应不呈线性关系。甚至有一个高活性成分采用各种物理-化学方法都无法得到检测。 Vibrio fischeri生物活性检测可用于2个目的：一是它独特的选择性检测机制使其可以探测到过去无法发现的化合物。第二，细菌抑制作用作为一种活性指标可以帮助甄别出哪些光降解产物需要进行更进一步的毒理学评估。

　　薄层色谱（TLC）是最早发明的色谱技术之一，并且至今仍是现代实验室不可或缺的分析手段。其中的一个重要原因是唯有TLC能够提供图像用以直接观测并传达色谱结果。另外，超强的灵活性、分析时间短、分析每一样品花费低也是其优点。 1．介绍 2．基本概念 　　a．方法学 　　b．固定相，TLC对HPTLC 　　c．点样 　　d．展开 　　　　I．气相 　　　　II. 展开室类型和饱和 　　　　III．展开距离 　　　　IV．多级展开（梯度展开） 　　e．衍生、照相和计算 3．应用 　　a．草药的质量控制 　　　　I．确认 　　　　II．稳定性测试 　　　　III．标示物定量 　　b．食品和饮料分析 　　　　I．分析葡萄酒中的有机酸分析 　　　　II．糖浆中的低聚糖测定 　　　　III．食品中黄曲霉毒素分析 　　c．生物活性物质测定 　　　　I．ChromBiodip 　　　　II．生物发光（BioLumineX） 4．结论

BioEurope在2003年起开始使用HPTLC技术，目前执行着超过15个的经验证的定量方法，譬如可可提取物中可可碱和咖啡因，积雪草（Centella asiatica）提取物中的积雪草酸和羟基积雪草酸以及胡桃叶提取物中的金丝桃苷等。HPTLC技术在优化提取工艺和对植物原料或提取物以指标性活性成分进行定量鉴别方面也非常有帮助。 巴西人参（Pfaffia glomerata）所具有的营养和防病的功效类似传统的人参（Panax ginseng）。但巴西人参其实和人参有很大不同，前者生长于巴西热带雨林中潮湿山地的背阴南坡。其来源于苋科牛膝属植物珐菲亚的硕大的块状根，并通过冷轧法获取植物的汁液。巴西人参的功效来自其所含有的下列成分： • 抗氧化剂，如硒和多元酚 • 皂苷（巴西人参皂苷以及非三萜皂苷） • 氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸和甘氨酸等 • 甾醇：如β-蜕皮激素等 β-蜕皮激素是一种荷尔蒙激素，存在于具有蜕皮现象的昆虫和鱼，以及某些植物种类中。它所展示出的与表皮细胞新陈代谢有关的生物活性使其受到了化妆品行业的关注。本文报道对巴西人参根冷轧法的获得的提取物进行 HPTLC含量测定的方法。

一种新开发的借助于HPTLC多重检测原理的高通量检测方法被用来同时对功能饮料（红牛TM）中的核黄素（VB2）、VB6、VB3、咖啡因及牛磺酸进行检测。10批功能饮料及6批普通饮料的样品溶液经超声法制备，薄层展开后的图谱进行多波长扫描：（1）261 nm和275 nm处分别对VB3和咖啡因作紫外吸收检测；（2）分别于366‐400nm范围和313‐340nm范围内对VB2和VB6作激发荧光检测；（3）薄层板以水合印三酮衍生化显色后在525nm对牛磺酸进行可见光检测。工作曲线相关系数r2>0.999。5种化合物3个浓度水平上的回收率试验结果在80‐106%范围内，重复性试验RSD在0.8‐1.5%之间。不同浓度水平中间精密度范围VB2为3.6‐7.4%、VB3为2.8‐6.3%、咖啡因为2.5‐4.4%、牛磺酸为2.1‐2.9、VB6为0.5‐4.0%。在正离子模式下以单级四级杆电喷雾质谱法对薄层板上成分进行结构验证，其中牛磺酸需要在负离子模式下进行。该方法简便可靠，为该类样品的常规分析提供了一种新的可替代方法。 为了确保产品质量，业界需要快速、可靠且经济的检测方法，新的HPTLC方法为此提供了一种可信赖的高通量替代方法。借助于高效薄层色谱分析的强大灵活性，使得低成本的同步检测如功能饮料中的核黄素（VB2）、VB6、VB3、咖啡因及牛磺酸等5类成分成为可能。这也是首次实现平行分离分析五种化合物并进行HPTLC/MS质谱验证，并通过HPTLC荧光检测对VB6进行定量测定。  

目的：该方法展示了采用生物发光细菌-费氏弧菌（Vibrio fischeri）-进行活性相关检测的步骤。植物成分首先通过HPTLC进行色谱分离，随后具有特殊生物活性或毒性的成分被检测得到。 样品：含小檗碱类生物碱的中药：如十大功劳属（Mahonia spp.）、黄连属（Coptis spp.）、黄柏属（Phellodendron spp.）和青牛胆属（Tinospora spp.）药材等。 Bioluminex™分析：将薄层板浸渍于发光细菌溶液中2 s。然后置于BioLuminizer™生物发光成像仪中拍照检视（培育时间3 min，曝光时间55 s）。 结论：通过小檗碱类生物碱在UV 366 nm下的黄绿色荧光斑点，该类成分可被清晰鉴别。它们被认为是许多药用植物的活性成分，其生物活性被Bioluminex™分析所揭示。除了白色箭头所示的已知成分外，蓝色箭头所示处为一个在UV 366 nm下无法观察到的未知强活性成分。进一步若采用CAMAG HPTLC-MS接口装置即可对薄层板上感兴趣的成分进行在线快速初步结构解析，该提取和分析操作通常所需时间小于1 min。

ChromaDex开发出了一种快速筛选试剂盒，可用来鉴别复杂组分体系中每个成分的生物活性。并且该技术还可以作为以生物测定为导向的分离工具。对于复杂的混合物，譬如食品、食品添加剂和食品补充剂而言，常规的活性测定实验仅能够获得整体的活性信息。通常要在这类样品中鉴别单个的活性成分需要繁冗的分离纯化步骤和活性测试实验。 现在有了新的替代方法，Bioluminex™分析将生物自发光技术和高效薄层色谱技术（HPTLC）直接联合起来，提供了一种独一无二的，快速高效地监控混合物中毒性或活性物质成分的技术。具体实现原理为，色谱展开后的HPTLC薄层板采用简便的浸渍设备以生物发光细菌溶液进行表面涂布。有抑菌活性的单个成分就选择性的在冷光的亮背景下显示为一个暗斑。结果可在数秒钟内呈现，并可进行数字成像。这一快速筛选分析技术非常适合于检测食物、饮料、 食品添加剂以及天然提取物等复杂物质系统中所可能含有的特殊化合物及掺杂的有害化学物质等。对于潜在的生物活性成分鉴别而言同样是一种非常有用的工具。该技术与试剂盒兼容，同样是一种快速分析大量样品的经济方式。 在复杂混合物体系中的能产生这种独特效果的所有组分均能够以皮摩尔的级别得到指认。例如采用该技术可大规模筛选食品中的三聚氰胺的含量，检测限达ppm（μg/g）级别。 该试剂盒采用生物自发光的海洋细菌费氏弧菌Vibrio fischeri。呼吸中的V. fischeri细胞会将多余的自由能释放出来，当达到临界细胞密度时即可检测到蓝绿色的荧光。所观察到的生物自发光现象反映了细菌的代谢状态，当细胞处于有害环境时，新陈代谢以及发光就会降低。因此发光的减少就可以用来测定毒性的强度，并可为HPTLC图谱选择性的检测和定量。

本方法在德国国家标准DIN38407-7基础上进行了改进。原方法采用二氯甲烷为流动相，-20℃下以咖啡因改性的薄层板定量测定6种多环芳烃。 流动相选择的首要原则就是要获得最佳分离度，同时也要兼顾环保因素。根据斯奈德的研究结果[2]，苯和甲苯具有相似的选择性，因而可采用甲苯替代具有致癌和致畸性的苯。此外，由于氯化物溶剂具有致癌风险、污染环境，会逐步地被替代使用。除水而外，氯仿是唯一属于选择性第VIII组的溶剂，而对于选择性第V组的二氯甲烷来说，还没有任何的非氯溶剂与之具有相似的选择性。 改进后的方法采用乙酸异丙酯替代二氯甲烷，具有良好的分离效能，基线平滑，干扰小，适合定量分析测定。 室温下在水平展开仪中以乙酸异丙酯-正己烷（3：1）进行展开，可对大量样品同时进行多环芳烃类物质的定性鉴别。

海洋无脊椎动物是一类筛选具有药用价值的活性化合物最有效的来源，每年有大约有800个新成分被发现，其中有45%来自海绵。因为无法移动的滤食动物缺乏形体上的自我保护机制，所以海绵用这些化合物来对抗觅食压力、同类竞争及生物污垢，这些活性成分表现出抗菌、抗炎、细胞毒及抗病毒的特性。尽管这些次级代谢产物非常多样化，但目前只有少数进入了临床市场，如从Cruptotethya crypta中得到的ARA A®（9-β-D-arabino-furanosy¬ladenine），它对单纯疱疹病毒表现出抗病毒作用。 在这些产品进入药品市场或临床测试之前，需要经过大量的各种实验分析。首先，采用标准生物测定对粗提物进行普通生物活性检测，如以艾希氏大肠杆菌及枯草芽胞杆菌进行片琼脂扩散法检测或以费氏弧菌进行冷光细菌检测。然而，为弄清楚单一成分和生物活性之间的关系，进行生物导向的分离是必须的。而为了达到分离和纯化的目的，各种色谱分离系统（如固相萃取、凝胶渗透色谱、半制备高效液相色谱）是必不可少的。接下来需要对单一的化合物或组分作进一步的生物活性筛选，并采用HPLC-MS或NMR进行结构解析。 在大量的寻找和鉴定新的具有生物活性化合物的工作中，和HPLC相比，HPTLC提供了一种简捷、更健全（较小的基质效应）且经济的分析方法，对30份海绵提取物平行进行色谱分离是可行的。HPTLC和基于以费氏弧菌进行冷光细菌检测的生物测定方法相结合，以及采用高分辨率质谱进行结构解析，从而为海绵中代谢物及生物活性筛选的研究提供了一套非常有效的系统。对于感兴趣的成分，可以直接从薄层板上提取并转移到MS系统而无需时间及花费高昂的分离纯化过程，片刻后即可通过高分辨率MS得到各个质谱信号及分子式。由于对HPTLC薄层板上的成分条带的提取很完全，这种方法具有和HPLC-MS相当的检测灵敏度。

自从FDA食品补充剂的现行生产质量管理规范（cGMP）在美国颁布实施以来，对于合适的测试方法的需求大增。由于基于植物来源的原料都是复杂的混合物，其所体现出天然的波动性对植物药成分的分析构成挑战。故对定性鉴别的专属性要求其必须能够区分出样品中是否含有错误的植物种属成分。 HPTLC为执行可靠的鉴别提供了有力保证。因为其能够提供彩色的色谱指纹图谱信息，可被可视化并以数字图像存储。为了充分利用这一源自HPTLC技术本身的独一无二的优势，必须确保获得可重现的结果和图像。 如果选用合适的仪器设备、执行标准化的HPTLC操作规程，以及按照下述准则来进行方法开发和验证[1] ，就可以获得重现性的有效提高。 验证步骤及其组成 基于清晰定义的分析目的，确效过程开始于方法的开发、选择以及优化[2]阶段。接下来是在验证方案中详细说明的一系列的稳定性评价试验。在验证试验中获得的数据需要进行评估，并与验证方案的验收标准进行比较。如果所有要求都被满足，则该方法即可视为有效。 考察刺五加（Eleuthero，左）和当归（Angelica spp.）在色谱展开时的稳定性 对获得自不同相对湿度的蝴蝶亚（Hoodia gordonii）HPTLC指纹图谱的比较 (1: 3% RH, 2: 33% RH, 3: 47% RH, 4: 54% RH, 5: 75% RH)

　　Clare McKinlay是一位在坐落于伦敦近郊的葛兰素史克药厂化学开发部（GSK，Stevenage）工作的分析化学家。在从事新的化学单体的研发过程中，她一直采用平面色谱法来对不同项目开发阶段所遇到的大量新情况进行研究，包括从候选化合物的筛选直至新药的申报和上市阶段。鉴于McKinlay女士所取得的一些成绩，该部门现在开始逐步意识到采用该项技术所带来的好处。 　　在葛兰素史克的研发部门，HPLC和GC通常是在分析起始原料，过程中间体和原料药（API’s）时常用的色谱方法。虽然该部门也拥有HPTLC设备，但并未纳入常规分析之列。然而该技术被证明是对于各种问题的理想解决方案，并且能够与其他色谱方法互为有益的补充。 　　在几个新药开发项目中浮现的一些问题使得原本惯用的HPLC和GC方法无法使得研发团队对该问题获得透彻的理解。HPTLC被用来对这些问题进行调查并证明为非常出色的工具。本文着重展示薄层色谱的问题解决能力方面的2个例子，并对其为何得以适用的原因加以阐述。 　　实例1：某化学原料药样品由于光降解造成的质量损失的调查 　　实例2：某化学原料药样品颜色差异的研究 　　上述所展示的实例说明HPTLC能够用做问题解决的工具，并可在分析特定化合物时成为HPLC和GC方法的有力补充。采用HPTLC技术所获得的信息对于新药研发的某些环节是相当关键的。HPTLC技术再次被证明在现代药物分析实验室中拥有当之无愧的一席之地。

鱼和鱼类制品在不适当的保存过程中会增加生物胺类的形成，尤其是组胺。为了保护消费者远离生物胺的毒害，关于鱼类卫生的16种法令设定了有关物质的限量（目前仅为组胺）。 由于其他的生物胺也具有生理学活性，也应当同样被分析。为此，必须建立一个筛选方法能够在短时间内处理大批量的样品。薄层色谱的方法正好适合于检测胺的允许限量。并且因为减少了分析的干扰，结果可以媲美HPLC、ELISA 和荧光分析方法。 首先，样品用10%的三氯乙酸（TCA）萃取。萃取液用丹磺酰氯处理。混合物衍生化后，胺被萃取出来并在硅胶薄层上分离。可在紫外365 nm下通过目视进行半定量检测或用光密度计在UV 365/>400 nm下定量分析。

智力水产养殖业在2005年的出口总额达到11.5亿美元，成为国际市场中举足轻重的一员。然而，过度拥挤的养殖条件使得鱼类传播疾病的风险大为提高。因此，投喂抗生素和抗菌药已成为智利国内的行业惯例。土霉素作为一种广谱抗生素，经常用于多种鱼类疾病的预防和治疗。 抗生素可采用浸泡、注射或饲料进食的形式对鱼进行施药，其中最后一种方式由于成分最低因而在水产业中最为常用。这种给药方式的最大问题在于如何确保药物成分在鱼饲料颗粒中的均匀分布，以保证用药剂量的准确。 借助于薄层色谱的一个基本特点，该TLC方法提供非常简便的供试品制备步骤，不需要任何固相萃取（SPE）和脱脂过程。该方法主要为鲑鱼（大马哈鱼）养殖业所开发，目的在于为其开展加药鱼饲料中的例行土霉素分析提供一种亟需的、可靠和经济的高通量分析方法，而且这类饲料通常包含复杂的基质成分，如含有28‐34%的脂肪和41‐48%的蛋白质等。