戴安公司推出最新Acclaim系列液相色谱柱

Acclaim系列色谱柱概况
    由Dionex公司开发的Acclaim硅胶键合相技术起始于超纯球形硅胶颗粒以尽可能降低其他副反应。戴安公司设计的键合过程可以在硅胶表面产生非常高的键合相覆盖率，因此对所有的被分析物－从疏水的中性分子到亲水的碱性及酸性分子－都有非常好的对称性，而且柱效极高。


    戴安公司根据色谱柱的极性、疏水性、选择性及应用的不同分为不同型号。所有Acclaim色谱柱所使用的硅胶基质都是一样的－120Å或300Å孔径的超高纯硅胶。先进的生产过程及严格的质量管理可以保证所有Acclaim色谱柱性能的一致性及批量之间的重现性。为了保证重现性，所有Acclaim产品都需要检测表面覆盖率、金属污染、立体选择性、极性、疏水性以及对碱性化合物的硅羟基活性。目前戴安公司的Acclaim产品线包括七种不同种类的固定相。


Acclaim常规色谱柱
    C18柱是HPLC实验中经常要用到的一种反相色谱柱，戴安公司的Acclaim 120 C18柱的特点是使用了全新的双端基封口（Double Endcapping）及高密度键合技术，使这种色谱柱的硅羟基活性很低并具有极佳的柱效及充分的表面覆盖。Acclaim 120 C8的结构与C18是一样的，因此具有同样的性能，只是用八烷基硅烷代替十八烷基硅烷，使其具有不同的选择性和较短的保留时间。Acclaim 300 C18使用宽孔硅胶基质，主要应用于多肽及适当大小蛋白的分析。


内嵌极性基团色谱柱
    在普通C18键合相内嵌入一个极性基团（被称为Shield或RP）是近几年来非常流行的对色谱柱的改良方式，有完全兼容纯水溶液流动相、不会产生疏水塌陷、分析碱性化合物时峰形好等特点。Acclaim Polar Advantage (PA)色谱柱的键合相内具有独特的内嵌极性基团，也具备以上这些特点。与常见内嵌极性基团色谱柱的不同点是，它还有与普通C18色谱柱相近的选择性、对强极性化合物有较强的保留、对酸性化合物也具有很好的峰形等有点。所以Acclaim PA可以同时分析碱性、酸性、疏水性及亲水性样品，并对所有组分表现出非常好的分离特性，不必担心其对常见化合物的选择性与传统C18柱差别太大。


    戴安公司的另一种内嵌极性基团色谱柱－  Acclaim Polar Advantage II (PA2)柱的选择性与传统C18柱差别较大，而与常见内嵌极性基团色谱柱接近，这样就为需要不同选择性的用户提供了方便。而且由于其特殊的键合方式，这种色谱柱的pH耐受范围较宽，因此应用领域更广。


特殊应用的色谱柱
    Acclaim OA及Acclaim Surfactant是两种特殊应用的色谱柱，分别针对亲水性有机酸分析及表面活性剂的分析。作为IonPac®系列阴离子交换及离子排斥柱的补充技术，Acclaim OA专用柱使用内嵌极性基团的固定相，兼容纯水溶液的流动相，而Acclaim Surfactant专用柱是目前唯一的专门用于表面活性剂分析的色谱柱，可以在一次分析中同时分析阴、阳离子及中性表面活性剂。


色谱柱分析碱性化合物的特性
    良好的表面覆盖及双重端基封口使Acclaim系列色谱柱对碱性化合物进行分析时有对称的色谱峰形。阿米替林（Amitriptyline）是公认的难分析的碱性化合物，对裸露硅羟基有很强的作用。从图1中可以看出Acclaim系列色谱柱的性能十分突出。


色谱柱分析酸性化合物的特性
    许多内嵌极性基团的固定相虽然有极好的分析碱性化合物的性能、兼容100％水溶性流动相，但对于强酸性化合物表现不佳，而Acclaim PA柱的适应范围要宽得多，对疏水性及亲水性的酸性、碱性化合物及中性化合物都有良好的峰形（图2）


选择最佳的色谱柱化学
    当色谱工作者开发一个分离方法时，固定相的选择性是其众多需要考虑的因素中的首要因素。选择性是每个被分析物质与固定相之间相互作用差异的表达。尽管可以在实验过程中人为地控制许多影响选择性的因素，如：流动相组成、梯度或温度，但有一根选择性非常合适色谱柱应是个良好的开端。所谓“合适”的色谱柱要取决于被分析样品的本性，不同的化合物组合可能需要不同的选择性，因此Dionex公司提供不同键合相的色谱柱供用户选择。


    Acclaim 120 C18的硅羟基活性低，柱效高，有分离大多数常见有机分子的能力，因此在通常情况下是第一选择。在需要低保留的情况下，Acclaim 120 C8则是更好的选择。
    体积排除效应会使谱带展宽。因此所选择的孔径应大于待分析样品中分子量最大的分子。分子量大于15 kDa时，可以选择Acclaim 300 C18柱，其孔径为300Å，适合于分离分子量小于150kDa的蛋白及多肽，但与标准的硅胶相比，宽孔硅胶的表面积比较小，因此该柱对小分子的保留时间要短。


    要解决在高水溶液比例流动相条件下的分离、高极性分子不保留等问题，或需要有不同的选择性时，Acclaim PA及PA2是最佳的选择。


不同的色谱柱规格
    Acclaim色谱柱有多种规格，根据应用仔细选择合适的规格是非常重要的。在权衡色谱柱填料颗粒度与长度的取舍后，优化分析时间与柱效。5µm，4.6250mm色谱柱是传统的第一选择，而小颗粒度、短柱可以缩短分析时间、节约流动相并可以提高灵敏度。


    除了内径4.6mm的常规色谱柱之外，还有内径75µm的Nano（纳升级）柱、内径300µm的毛细管柱、内径1.0mm的微柱及内径2.1mm的窄柱。应该根据所需的样品量、溶剂消耗及灵敏度来选择色谱柱的内径。作为一般的规律，最大上样量、溶剂消耗及检测限与色谱柱内径的平方成正比；同样的上样量，峰面积与色谱柱内径的平方成反比。例如，1.0ng样品在2.1mm色谱柱上产生的峰面积是4.6mm色谱柱的4.8倍。然而，要把这些优势按比例充分表现出来，HPLC仪器必须设计合理，特别是在使用更细内径的色谱柱时。