赛默飞Q Exactive™ UHMR Orbitrap™ 质谱仪

本文建立了基于Q Exactive系列超高分辨质谱分析氯沙坦样品中基 因毒性杂质NDMA, NMBA, NDEA, NEIPA, NDIPA, 和NDBA的检测 方法，该方法的灵敏度及重现性完全可以满足FDA要求。同时，根 据不同客户需求，我们可提供不同的仪器控制及数据处理软件，有 适合常规检测需求的Xcalibur和TraceFinder软件，也有完全合规的 Chromeleon软件，针对不同用户提供从仪器到软件的全面解决方案

亚硝胺的化学式是NR2NO（R代表H或烃基）。大量的动物实验已确认，亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。同时，亚硝胺还有致畸和致突变作用。人群中流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等可能与亚硝胺有关。 自2018年7月在缬沙坦原料药中检出N-亚硝基二甲胺（NDMA）起，陆续在其它沙坦类原料药中也检出了各类亚硝胺杂质，如N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）等。进一步的调查发现，在个别供应商的非沙坦类的药物中（如雷尼替丁、二甲双胍），亦有亚硝胺类杂质的检出。因此为了保证药品的安全和质量可控，有必要对化学药品中亚硝胺类杂质进行全面的检测和控制。

重组单克隆抗体（mAbs）已是日益广泛使用的治疗性蛋白质药物，其中以IgG1和IgG2类型最为常见。其恒定区的N糖基化在不同的细系、克隆和生产条件之间的差异很大，且具有高度的异质性，聚糖结构不同聚糖类型含量的改变通常影响抗体生物学活性、稳定性、免疫原性和半衰期，是许多治疗性抗体的关键质量属性，对控制产品一致性至关重要。 分析不同寡糖结构和含量的传统策略为通过PNGase F糖苷内切酶将寡糖从抗体中释放，对糖链进行标记、荧光对其进行定性和定量，然而其局限于需要寡糖标准品，且当抗体中含有多个N糖基化位点时，不能区分位点的异质性，而基于高分辨质谱对寡糖及糖肽的定性和定量则能够解决上述问题，但定量时需考虑不同离子的离子化效率不同。本文采用LC-MS/MS法对原研IgG1抗体药物的N糖肽及游离寡糖进行鉴定和相对定量，同时与经典方法LC-FLD进行定量结果的比较。

采用基于静电场轨道阱高分辨质谱 Q Exactive 平台的非靶标和靶标代谢组学方式研究了麻痹病毒（Cricket paralysis virus, CrPV）感染昆虫 Bm5 细胞后宿主代谢的动态变化情况。研究发现，CrPV 感染导致 Bm5 细胞的代谢具有显着和特定阶段的变化。比如，CrPV 持续感染过程中葡萄糖和谷氨酰胺水平均显着升高，随后在致病期急剧下降。不同代谢产物的丰度和途径分析进一步确定了病毒生命周期不同阶段的特定代谢特征，为病毒感染宿主后的致病过程、疾病分期、以及药物治疗效果提供理论依据。

针对目前多兽药残留的各种挑战，开发了一种专门针对动物源食品中常见兽药残留快速筛查和确证的LC/MS/MS 方法，并取得满意的效果。结果表明：添加浓度为 1.0 µg/Kg，基质中所有化合物的检出率 > 84%；添加浓度为 5.0 µg/Kg，基质中所有化合物的检出率 >92%。该方法使用 HyperSep Retain-PEP SPE 小柱对样品进行快速有效的净化处理，然后由高分辨质谱 Q Exactive 分析，结合 Accucore RP-MS 低流失质谱柱和 TraceFinder 件从多个维度对目标物进行确证，从而实现对动物组织样品中多兽药残留的准确、快速筛查。Accucore RP-MS 选择性与 C18 类似，且同时具备高效率和低拖尾因子，是MS 检测的首选。Q Exactive 具有高达 140000 的分辨率、出色的质量精度、高灵敏度和宽动态范围等特点，具有非常优异定性和定量表现，是食品安全领域未知残留物的大范围筛查和定性定量分析的最佳平台。

本次评估的结果显示，Thermo Scientific Q Exactive GC 组合四极杆-Orbitrap 质谱仪佐以 TraceFinder 软件，对于食品和饲料的常规农残筛查来说是一套极其有效的工具。Orbitrap 质谱仪的分辨能力、质量准确度和灵敏度都非常出色。 • 使用高分辨全扫质谱分析进行筛查是扩大分析范围的有效方法，凭借该技术，无需提前进行采集参数优化即可在单次实验中分析更多的化合物。 • 快速GC分析和采集速率提高了实验室的分析效率和样品通量。超群的质量精确度再加上极高的灵敏度，使得可靠的常规农残筛查成为可能。 • 以 60,000 FWHM （m/z 200）的质量分辨率进行数据采集能够消除同质量化合物的干扰，提高在复杂基质中筛查农药的结果可信度。对所有化合物都持续提供亚 ppm 水平的质量精度，确保化合物鉴定结果可信。

本研究结果表明，Thermo Scienti?c Q Exactive GC Orbitrap GC-MS/MS 系统结合TraceFinder 软件是一个强大的分析工具，可用于滥用药物的日常筛查以及复杂尿液样品分析。 • Orbitrap 质谱仪为所有组分提供出色质量数精度，无论化合物浓度高低，提供快速准确的识别结果。 • 使用独特的自动峰检测、质谱图解卷积以及化合物识别工作流程对六个尿液样品中的药物进行筛查。在样品中检测出多个药物。使用准确质量数信息，根据质谱图库匹配和碎片归属，识别出多个目标化合物。这个方法显著缩短了评估时间，并提供更加快速可靠的报告结果。 • 稳定的亚 1 ppm 质量数精度结合高灵敏度，使得样品中的已知和未知化合物识别结果非常可靠。使用准确的 EI/CI 数据，可以推测样品 F 中存在 butyrfentanyl。 • 无论复杂基质中样品浓度高低，60,000 FWHM 的日常分辨率以及很宽的质谱图动态范围，实现复杂基质中的高选择性，消除同位素干扰，提高结果置信度。

利用Orbitrap超高分辨质谱得到高精度的一级质谱信息来分析完整胰岛素，从而绕开胰岛素不容易产生碎片离子的问题。此外，对于胰岛素这一类大肽段类分析物，合适的色谱分析条件也尤为重要，我们使用ProSwift RP-4H整体柱获得了极佳的分析效果。