2020/09/18 10:47
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布鲁克 timsTOF fleX with MALDI-2
型号: timsTOF fleX with MALDI-2
产地: 德国
品牌: 布鲁克
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方案详情:
基质辅助激光解吸电离(MALDI)成像是DMPK研究的有力工具,它提供了药物和代谢物的特异性测量,用于早期药物筛选。timsTOF fleX是布鲁克新型的MALDI成像质谱系统,凭借ESI/MALDI双重离子源和把高灵敏的LC-MS/MS PASEF测量与高分辨率MALDI成像相结合,完成从目标分子成像到非目标SpatialOMx研究。最新一代的timsTOF fleX使用创新的激光后电离MALDI-2技术获得了较传统MALDI 高1-3个数量级的灵敏度【1-2】。MALDI-2提高了离子产率并降低了离子抑制效应。同时,MALDI-2还可对传统MALDI不能电离的药物和代谢物分子检测和成像,如甾醇、他汀类、激素、维生素、聚糖等生物分子。这种实质性的改进对于DMPK研究尤其重要。
本应用报告测试了MALDI-2对添加BI-YYY药物标样组织切片灵敏度的增强,并在大鼠用氯喹或BI-YYY给药后,用MALDI-2成像分析,以确定灵敏度提高是否转变为重要的药物定位信息。此外,还研究了氯喹代谢物分布,测试MALDI-2在检出限上的提高。
样品制备与实验条件
实验使用大鼠新鲜肝脏和肾脏组织冷冻切片,切片安放在布鲁克IntelliSlide™自定位玻片上。在切片表面点加咖啡因、氯喹、瑞舒伐他汀、BI-YYY和利血平混合物,施加2,5-二羟苯乙酮(DHAP)基质,在1-100µM浓度范围内测试MALDI-2的灵敏度增加。随后,大鼠在分别给予氯喹或 BI-YYY药物2小时或24小时后取组织样本,在配置了MALDI-2的timsTOF fleX质谱系统上采集切片的质谱数据,像素尺寸为50µm。用SCiLS Lab软件处理得到组织切片分子图像,然后用MetaboScape® 2021软件中的BioTransformer模块预测了35个代谢产物[3],对其中19个特别代谢物做了鉴定和强度测量,并计算了相对含量。
结果与讨论 标准小分子药物被用来考察BI-YYY药物电离效率的增加。比较系列浓度咖啡因、氯喹、瑞舒伐他汀、利血平和BI-YYY混合物的对照肝组织的MALDI和MALDI-2分子图像(见图1),MALDI-2显著提高了所有五种受试化合物的灵敏度,其中新的药物BI-YYY的峰值强度使用MALDI-2提高了300倍。
图1: 对照和氯喹或BI-YYY给药大鼠,用MALDI和MALDI-2的SCiLS Lab成像结果比较。不同颜色表示强度梯度变化,黄色比蓝色有更高的强度。
图2:氯喹的代谢物,用MALDI和MALDI-2用SCiLS Lab成像结果比较。不同颜色表示强度梯度变化,黄色比蓝色有更高的强度。
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