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基本原理 高真空状态下,利用升华原理使预先冻结的物料中的水份直接从冰态升华为水蒸汽而被除去,从而使物料干燥。 真空冷冻干燥广泛应用于多种产品,可确保物品中蛋白质、维生素等各种营养成份,特别是那些易挥发热敏性成份不损失,因而能最大限度地保持原有的营养成份。还能有效防止干燥过程中的氧化,可以避免营养成份的转化和状态变化。冻干制品呈海绵状、无干缩、复水性好、含水份极少,相应包装后可在常温下长时间保存和运输。 操作步骤 1、系统准备 检查系统是否清洁和干燥,真空泵与冷冻机是否连接,接通电源,检查排气口、冷冻管的密封性。 2、加样 样品需要预冷到至少-40℃,可以在深低温冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中进行。打开密封管开关,搬开冷冻舱,将样品置于冷冻舱里的隔板上。关闭密封管开关。 3、冷冻 打开冷冻开关,等待20~30分钟,直到冷冻舱的温度低于-40℃。 4、抽真空 打开真空泵开关,等待10~15分钟,直到系统压力低于100 millitorr。 5、监控过程 确保系统参数(冷冻温度、真空压力)在正常范围内; 定期检查冷冻舱中的结冰情况,决定是否要除霜; 观察样品是否干燥完全,一般干燥过程需要24~72小时,视具体样品通过目测而定。 6、关闭系统 关闭总开关,接上排气管或打开密封管开关以解除真空状态。 关闭真空开关,关闭冷冻开关,取出样品。 7、系统维护 除霜:冷冻舱下面的压缩舱内如果有霜,则接上排水管,然后用少量热水(不能超过压缩舱容积的一半)促进冰霜的融化。不能通过敲击冰块来除霜。 除湿:压缩舱、冷冻舱、真空泵压缩机以及垫圈等表面的水雾均需擦干。 清洁:压缩舱、冷冻舱可以用温和的去污剂或苏打水来清洗,然后干燥并撤去排水管,并重新密封排水孔。 泵油:定期检查油位,排除油雾。
最近一直在摸索着用高压冷冻和冷冻替代样品制备技术,刚开始做的时候冰晶特别严重,如下图Hela细胞。冰晶已经把细胞超微结构破坏的不行了。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231539_611900_2423894_3.jpg经过很长时间的摸索,得到以下制样方法:1 取样1.1 培养细胞:取适量的细胞悬浮液,低速离心成细胞团,去上清,细胞团呈米糊状,用移液枪取适量细胞,填满Carrier,加入适量冷冻保护液1-Hexadecene,滤纸吸取多余水分,使冷冻保护液液面略高于Carrier(Carrier用丙酮清洗,然后在空气中晾干,用1-Hexadecene浸泡备用)。1.2 小鼠肝脏:从活体上取出的组织,先用锋利的刀片在低温下切成尽可能薄片状,从中挑选合适的部分切下来,然后装入Carrier,加入适量冷冻保护液1-Hexadecene,滤纸吸取多余水分,使冷冻保护液液面略高于Carrier。2高压冷冻高压冷冻仪在使用前,要先做一些准备工作:要先加入足够的液氮,并加入压力液甲基环己烷,然后用空载的carrier高压冷冻三次,保证高压冷冻仪在最佳工作状态。2.1 将上述装有样品的carrier快速安置到高压冷冻仪,准备高压冷冻。2.2 高压冷冻样品,迅速把样品冷冻下来,并做好记录。通过高压冷冻仪冷冻样品后产生的冷冻速度和压力变化曲线,可以选择冷冻效果较好的样品继续下面实验。2.3 转移样品,首先把现配的替代液1%锇酸(0.5g锇酸溶于50mL丙酮)分装到2mL冻存管中,迅速放入液氮冷冻备用,冷冻过程中保持冷冻管直立。与此同时,冷冻替代仪加满液氮,将自制的冻存管架放入样品腔,预冷至-100℃。用预冷的镊子,在液氮下将Carrier分别装入冻存管,冻存管盖不宜拧的过紧,然后迅速转移到冷冻替代仪样品腔室的冻存管架里。3 冷冻替代 步骤 温度 时间 1 -100℃ -90℃ 4h 2 -90℃ 72h 3 -90℃ -60℃ 8h 4 -60℃ 8h 5 -60℃ -30℃ 4h 6 -30℃ 8h 7 -30℃ -20℃ 2h 8 -20℃ 8h 9 -20℃ 4℃ 2h 10 4℃ 1h 温度达到4℃后,用4℃的丙酮浸洗样品3次,每次15分钟。此过程中,会有部分样品与Carrier分离,若还有没分离的可以用解剖针将样品从Carrier中剥离。4 渗透包埋分别用以下渗透液渗透。 步骤 渗透液 浓度 时间 1 Epon812/丙酮 1:1 1.5-2h 2 Epon812/丙酮 3:1 6-12h 3 Epon812 100% 1h 4 Epon812 100% 8h 5 Epon812 100% 1h然后将样品转移至包埋槽,60℃烘箱聚合48h。5 超薄切片把两种生物样品对应的每一个包埋块分别超薄切片,各捞两个铜网,并染色。6 电镜观察观察细胞内超微结构保存情况,对感兴趣区域拍照。终于有所改善,如下图的小鼠肝脏细胞,轮廓十分清楚,结构保存完好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611895_2423894_3.jpg局部放大后观察,能看见核孔,双层核膜,甚至是膜的磷脂双分子层结构(这是在常规化学固定制样中很难看到的),看到这些让人激动不已。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611894_2423894_3.jpg碰巧看见一个正在分裂的线粒体。线粒体脊很清楚,双层膜紧挨着,不像常规制样间隙那么大。另外,线粒体基质保存完好,所以线粒体整体较细胞基质反差大。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611893_2423894_3.jpg以下是常规化学固定制样的结果,可与上面高压冷冻及冷冻替代制样技术结果对比:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231644_611928_2423894_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609
温度控制是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐的关键技术之一,在高效冷冻和自动化方面扮演着重要角色。一种高效冷冻、自动化[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐的温度控制技术。[b] 一、温度传感器[/b] 温度传感器是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐温度控制的核心元件。目前常用的温度传感器有热电偶和温度传感器。热电偶是由两种不同材料组成的电偶,当温度变化时,两种材料产生的电势差也会随之变化。温度传感器则通过电阻值的变化来测量温度。无论是热电偶还是温度传感器,其关键在于精度和稳定性,以确保温度测量的准确性。[b] 二、温度控制算法[/b] 温度控制算法是实现高效冷冻和自动化的关键。其中一个常用的算法是PID算法(比例-积分-微分算法)。PID算法通过不断调整控制器的输出信号,使得系统的温度能够快速且稳定地达到设定值。比例项用于根据当前温度与设定值之间的偏差来调整控制器的输出,积分项用于消除系统的静态误差,微分项用于消除系统的动态误差。[b] 三、冷却系统[/b] 冷却系统是高效冷冻的关键组成部分。常用的冷却系统包括压缩机、冷凝器、蒸发器和控制阀等。在温度控制中,压缩机负责提供冷冻剂的压缩和流动,冷凝器负责将冷冻剂释放热量,蒸发器负责吸收热量,而控制阀则根据温度传感器的信号来控制冷冻剂的流量,从而实现对温度的精确控制。 四、自动化控制系统 自动化控制系统是实现[url=http://www.cnpetjy.com/qixiangyedanguan/][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐[/url]温度控制的关键。它包括温度控制器、传感器、执行器和人机界面等组成部分。温度控制器负责接收传感器的信号,并根据设定值和控制算法来控制执行器的操作。执行器则根据控制器的指令来调整冷却系统的工作状态。人机界面则提供操作者与系统交互的接口,使操作者能够监测和调整温度控制参数。[url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐厂家[/url] 综上所述,高效冷冻、自动化[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐的温度控制技术需要依靠精确的温度传感器、高效的温度控制算法、可靠的冷却系统和先进的自动化控制系统。通过这些技术的应用,可以实现对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]液氮罐温度的快速、稳定和精确控制,提高冷冻效率,实现自动化生产,提高工作效率。