钢模板

p　　今年是“大气十条”的收官之年。8月16日，清洁空气联盟在北京发布了《城市空气质量达标规划编制手册》(简称手册)，结合国际和国内先进经验，为我国城市提供大气治污“模板”，助力各地空气质量达标管理长效机制的建立。br//pp　　手册包括达标规划编制的原则、具体方法、目标和步骤等，还有系列相关工具的介绍及使用，汇集国内外清洁空气治理百余项措施的数据库等。其编制得到美国环保署、中国环保部环境规划院、中国环科院、清华大学等支持。/pp　　中国环科院大气环境首席科学家柴发合说：“手册是推行达标规划管理的好工具，一大突破就是把政府在编制规划的作用、各个部门角色讲得很清晰。”/pp　　“空气质量持续改善意味着我国环境管理从粗放式到精细化、科学化的重大转变，空气质量达标规划是管理机制变革中最关键的一环。”清洁空气创新中心主任解洪兴说，规划以空气质量达标为管理目标，应用科学手段开展城市空气质量管理，设计并评估改善的措施，以实现持续达标的规划管理模式。通过达标规划，可使空气质量达标作为一个明确的长期限制指标，对城市能源和交通发展、产业布局做出前置约束，使空气质量得到持续改善。/ppbr//p

数字PCR是第三代PCR技术，和qPCR技术相比具有灵敏度高、精准度高、对抑制剂耐受性更强等优势，不依赖于标准品和标准曲线，并可直接对起始核酸进行绝对定量，尤其适用于对低丰度样品的检测。目前，数字PCR在医学、制药、环境、食品检测等多个领域展现出了良好的应用前景。集多重优势于一体的数字PCR实验该如何实施呢？今天呢，我们就一起来看一下数字PCR实验的第一步：模板的制备。图源：gene-π数字PCR学习网站模板制备是数字PCR实验成功的关键一步。模板提取、质量控制、避免污染和保存都是模板制备过程中的重要因素。1、清除环境污染大多数Taq聚合酶的敏感性都比较高，一旦存在污染可能会发生外源DNA扩增并影响整个实验。而外界环境中存在多种污染源，因此必须遵守严格的实验规程并做好清除污染措施。为了避免DNA污染，应遵循以下常规PCR建议：☑ 定期使用3%漂白剂溶液和水/乙醇清洁实验室工作台和设备，或根据应用情况使用DNase/RNase；☑ 尽可能将管盖好；☑ 涡旋后进行离心；☑ 设置无模板对照。2、模板提取数字PCR的DNA和RNA模板提取方法与实验室中各种提取方法是兼容的，包括苯酚氯仿法,各种试剂盒提取方法。☑ 在提取过程中，尽量简化步骤，缩短提取时间；☑ 减少化学因素对核酸的降解；☑ 减少物理因素对核酸的降解，如机械剪切力和高温；☑ 防止核酸的生物降解。3、质量控制模板提取之后，我们需要对模板的纯度和质量进行检测，以保证得到最佳的实验效果。例如分光光度法可以验证提取的DNA溶液的良好吸光度(A260/280)的比例。常用的方法还有PicoGreen荧光染料定量检测、琼脂糖凝胶电泳、毛细管凝胶电泳和3' ：5' 分析等，尽量避免污染物和潜在抑制剂的存在。4、保存提取的DNA模板的存储也是一个重要的监控因素。保存时需要避免核酸降解，如胞嘧啶脱氨和8-Oxo-2' -脱氧鸟苷的形成，因为氧化损伤可能导致在PCR扩增过程中的碱基转位。缓冲液和温度条件对样品的质量也有影响，一般提取的DNA模板用TE溶解并-20℃保存。除了上述这些，样本本身固有的其他参数也可能会对数字PCR实验产生影响：A 、富含GC的模板因为GC键非常稳定，如果模板包含富含GC的区域可能导致模板不能完全扩增。因此，为了使模板获得更好的变性，可以尝试在PCR混合物中添加DMSO或甜菜碱。B、高分子量DNA与qPCR一样，模板的复杂性可能会影响检测性能，例如质粒和长片段基因组DNA。对DNA片段进行限制性酶切可以平衡模板差异，并防止对目标分子的低估。但要保证扩增子序列中不能有酶切位点，对已经片段化的DNA(例如来自福尔马林固定、石蜡包埋组织或细胞游离的DNA)进行酶切可能导致信号丢失。通常高分子量的DNA或质粒作为模板可能会影响阴阳性微滴分区，建议在进行数字PCR之前使用化学或酶切方法进行DNA剪切，而且剪切步骤可以直接在PCR mix中进行。C、DNA拷贝数的转换在数字PCR实验中，需要对模板浓度进行检测，以避免浓度过高造成检测结果饱和（全部都是阳性微滴）。当浓度足够高时，常用的方法如荧光法和分光光度法，可用于定量核酸，从而初步预估使用数字PCR的适合测量浓度。值得注意的是，这种方法测量的是组成核酸碱基单位体积的质量。因此，使用测量质量的方法来确定基因组拷贝数，需要进行相应的换算。当以质量为基础的核酸定量与dPCR结果进行比较时，或从任何用于计算分子拷贝数的方法中得出的结果时，必须包括用于计算基因组分子量的清晰描述，以及用于计算该值的方法。在数字PCR中，DNA拷贝数的计算只需要知道被研究基因组的质量，然后应用以下公式即可：反应体积中拷贝数=反应体积DNA质量(ng)/研究基因组质量(ng) 。这里还有在线网站供大家参考：http://cels.uri.edu/gsc/cndna.html详情可参考深蓝云公众号的推文：技术小站 | 浓度到拷贝数的换算。D、逆转录酶在逆转录酶数字PCR (RT-dPCR)中，RNA转录本需通过一步法或者两步法转化为互补DNA (cDNA)进行使用。在一步法中，逆转录和PCR均在同一分区中按顺序排列。即使每个RNA分子产生多个cDNA拷贝，结果也不会被高估。在两步法中，先进行批量转录，然后对cDNA进行微滴分区，在单独的反应中进行dPCR。逆转录酶的步骤可能是一个主要的错误来源，应在实验设计中考虑。通过上述的介绍，大家是不是发现数字PCR的模板制备并没有那么复杂呀，感兴趣的小伙伴可以先把模板制备好，然后联系我们，赶紧来体验一下数字PCR的魅力吧。快速学习网址：足不出户，网页自动翻译让您轻松快速掌握Gene π数字PCR学堂。参考文献：1 Cai, Y., Li, X., Lv, R., Yang, J., Li, J., He, Y., & Pan, L. Quantitative Analysis of Pork and Chicken Products by Droplet Digital PCR. BioMed Research International, 2014, 810209. http://doi.org/10.1155/2014/810209. PMID: 252431842 Pérez-Barrios, C., Nieto-Alcolado, I., Torrente, M., Jiménez-Sánchez, C., Calvo, V., Gutierrez-Sanz, L., Palka, M., Donoso-Navarro, E., Provencio, M., Romero, A. Comparison of methods for circulating cell-free DNA isolation using blood from cancer patients: impact on biomarker testing. Transl Lung Cancer Res. 2016 Dec 5(6):665-672. doi: 10.21037/tlcr.2016.12.03. PMID: 281497603 Demeke, T., Malabanan, J., Holigroski, M., Eng, M. Effect of Source of DNA on the Quantitative Analysis of Genetically Engineered Traits Using Digital PCR and Real-Time PCR. J AOAC Int. 2017 Mar 1 100(2):492-498. doi: 10.5740/jaoacint.16-0284. Epub 2016 Dec 22. PMID: 281181374 Holmberg, R.C., Gindlesperger, A., Stokes, T., Lopez, D., Hyman, L., Freed, M., Belgrader, P., Harvey, J., Li, Z. Akonni TruTip and Qiagen Methods for Extraction of Fetal Circulating DNA-Evaluation by Real-Time and Digital PCR. PLoS One. 2013 Aug 6 8(8):e73068. doi: 10.1371/journal.pone.0073068. Print 2013. PMID: 23936545.5 Rajasekaran, N., Oh, M. R., Kim, S.-S., Kim, S. E., Kim, Y. D., Choi, H.-J., Byum, B., Shin, Y. K. Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines. Journal of Visualized Experiments : JoVE, 2015, (104), 53190. Advance online publication. http://doi.org/10.3791/53190. PMID: 26484710.6 Devonshire, A. S., Whale, A. S., Gutteridge, A., Jones, G., Cowen, S., Foy, C. A., & Huggett, J. F. Towards standardisation of cell-free DNA measurement in plasma: controls for extraction efficiency, fragment size bias and quantification. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2014, 406(26), 6499–6512. http://doi.org/10.1007/s00216-014-7835-3. PMID: 24853859.7 Group T D , Huggett J F . The Digital MIQE Guidelines Update: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments for 2020[J]. Clinical Chemistry(8):8.

p style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "2020年校招旺季即将到来/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "还在为做简历发愁？/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "作为获取工作机会的敲门砖，/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "简历重要性不容多说。/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "如何在在简历大潮中脱颖而出？/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "你需要/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "一份让人眼前一亮的简历/span/strongstrongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "/span/strong/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "！！！/span/strongstrongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "/span/strong/span/pp style="text-align: left line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei " /span/pp style="margin: 5px 0px text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "/span/pp style="text-align: left line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "img src="https://img1.17img.cn/otherfile//images/201809/webinar/545fac94-e934-4db4-baaa-f107b654d2b0.jpg"//pp style="text-align: left line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "br//span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "但自己设计不好/span/spanspan style="font-family: 宋体 "~/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "网上说好的免费简历模板却要收钱/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "不要怕/span/spanspan style="font-family: 宋体 "~/span/pp style="margin: 5px 0px text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-size: 16px "/span/pp style="text-align: left line-height: 1.75em " /pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 宋体 "img src="https://img1.17img.cn/otherfile//images/201809/webinar/5fdf7e0e-fc79-4170-b3cc-d705bbf03b88.jpg"//span/pp style="text-align: left line-height: 1.75em "span style="font-family: 宋体 "br//span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "在收到很多同学留言/spanspan style="font-family: 宋体 "“/spanspan style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "简历模板/spanspan style="font-family: 宋体 "”/spanspan style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "后，/span/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "最近小编为大家搜集了一波/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "span style="color: rgb(255, 0, 0) font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei "strongspan style="font-family: 宋体 font-size: 16px "精美的简历模板/span/strong/spanstrongspan style="color: rgb(71, 193, 168) font-family: 宋体 font-size: 16px "/span/strongstrongspan style="color: rgb(71, 193, 168) font-family: 宋体 font-size: 16px "/span/strong/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "span style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "大家快来领取吧！/span/pp style="text-align: center line-height: 1.75em "strongspan style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "简历封面/span/strongspan style="font-family: 微软雅黑,Microsoft YaHei font-size: 16px "br//span/ppimg title="4.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/02ac67af-9a4c-4f75-96b4-f451e0b8b107.jpg"//pp style="text-align: center "strong单页简历/strong/ppimg width="900" height="633" title="2.webp.jpg" style="width: 910px height: 646px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/968af662-bc57-4143-819c-6aa9f6f70772.jpg"//pp style="text-align: center "strong双页简历/strong/ppimg title="6.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/3ef289ba-d4b3-40ef-9da8-c046faffa62d.jpg"//ppimg title="5.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/3ec28f91-b0c5-4afe-877c-8c1f9eb7303d.jpg"//pp style="text-align: center "strong细分行业简历/strong/ppimg title="7.webp.jpg" src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/d8fddc7f-c63a-40d9-a378-d7990446e9bd.jpg"//ppimg title="3.webp.jpg" 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