抗体药物纯化专用制备色谱

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  • 上海纯华生物科技有限公司 金牌4年
    400-860-5168转4572
    为了更好服务于第三方检测机构和CRO企业，国家级仪器重大专项的承担者上海科哲生化科技有限公司将下属色谱事业部分立，成立了上海纯华生物科技公司，上海纯华生物科技有限公司集高效液相色谱、制备液相系统、蒸发光检测器、荧光检测器、多维液相等产品于一体，具有独步国内的荧光检测器技术，对于黄曲霉毒素、多氯联苯、维生素等荧光物质检测可提供完整的解决方案，是第三方检测机构最实惠的选择。
    主营产品：
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  • 苏州汇通色谱分离纯化有限公司 金牌5年
    400-860-5168转4265
    “苏州汇通色谱分离纯化有限公司”是一家以自主知识产权技术和产品为核心，具有独立研发能力的高技术企业，主要以药厂、生物制品企业、高纯度化学制品企业、质量鉴定单位、大学、科学研究机构和生物技术公司为目标客户，提供高效、高选择性制备色谱分离柱产品；高纯度产品色谱纯化工程设计以及高纯度产品纯化服务。与市场上现存公司相比，本公司拥有高科技（特殊设计）的专利分离介质，高纯度色谱纯化工程设计核心能力，已发展高通量、高选择性、高分离效率的模块式分离系列产品及配套的相应方法；公司除为企业提供高性能的色谱分离柱系统系列产品外，还可以直接为企业提供复杂样品体系的纯品，为企业“工程化”提供一条龙服务；既结合色谱分离专家的理论与实践，为客户发展复杂样品体系的分离、分析、纯化制备方法和有效的工具，同时为市场提供色谱纯度的试剂级产品。
    主营产品： 制备液相色谱   恒流泵   馏分收集器   色谱检测器  
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  • 上海大有色谱技术服务有限公司
    我公司是以色谱(层析) 纯化技术的技术开发、技术转让、技术服务、技术培训、工厂纯化的交钥匙工程及各种样品纯化委托加工为主要经营内容的高科技公司。 公司销售高、中、低压大型制备色谱系统及DAC色谱柱，中型制备色谱柱及分析型色谱柱和装柱机。是Grace、Tosoh 等国外著名品牌纯化介质和填料的一级授权代理商。同时，也委托国外有实力的工厂代理加工有特色的填料，以自主品牌销售，获得广大客户认可。 我们的产品主要应用于基因工程药物，血制品，多肽，天然产物及其他小分子药物。合作的客户有：哈药集团、通化东宝、沈阳三生、华北制药、无锡药明康德、江苏恒瑞、上海中信国健、上海新兴血液、深圳翰宇等。 我司位于上海市漕宝路500号上海生命科学院内，建有色谱柱装填及检测实验室，可为用户装填25mm、50mm、100mm内径MODcol 弹簧制备柱。 我司享有中科院的网络信息资源，有大量技术资料可供选用，欢迎来电索取。
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抗体药物纯化专用制备色谱相关的仪器

  • 上海纯华PrepChromaster-8000型高压制备色谱系统 400-860-5168转4572
    PrepChromaster-8000型高压制备色谱系统-----专为高通量纯化打造 为了满足中药与天然产物分离纯化领域的需求，推出了PrepChromaster品牌，为该领域提供制备色谱解决方案级产品，是中药与天然产物分离纯化实验室的理想选择。PrepChromaster-8000型是一款连接快速色谱和传统高压制备高效液相色谱的二元制备色谱设备，主要应用于药物活性成分、天然产物研究，合成化学分离纯化，在节省制备成本的同时极大地提高了分离效率。仪器特点1、本系统最大制备量可达克级，可适配10-100mm直径的各类色谱柱；2、本系统检测器使用全波长紫外-可见检测器，可同时选用4个不同检测波长3、本系统可使用Flash柱，支持各种级别的Flash低压分离纯化；4、本系统可以使用高压不锈钢柱，支持300bar以内高压级别的分离；5、本系统支持液体或固体样品上样，可以避免贮备过多的定量环；6、具有压力显示、报警、过压保护功能，实时监控泵的压力波动；7、本系统具有全波长光谱扫描功能，可检测190nm-850nm范围任意四个波长信号；8、带有光源自检功能，管理光源寿命，提醒及时更换；9、带有单色仪自校正功能，波长准确性高；10、进样方式独特设计，防止样品与溶剂扩散；11、本系统采用先进的进样技术，两种进样模式可选，进样时间短，避免样品残留和堵塞；12、高速准确的阀切换，避免样品的损失，提高回收率。13、本系统可以使用小粒度填料的不锈钢柱和商品化的Flash柱；14、独立的进样和馏分收集流路，避免交叉污染；15、智能馏分收集器可按体积、阈值、时间和色谱峰收集馏分；16、本系统提供多种标准试管架和试管，用户可自定义试管架，标配孔径18mm试管架；17、软件具有自动进样、梯度、色谱图、馏分收集图、设备状态同图显示的功能；18、软件具有自动进样状态显示与控制功能，可显示阀、注射泵、进样臂的状态；19、软件支持梯度，程序设定功能，具有阶梯、线性、点-拖式梯度曲线；20、软件支持智能馏分收集，具有时间、阈值、峰值、手动等多种收集方式；21、软件支持馏分索引功能，实时显示馏分收集位置与对应的色谱峰位置；22、软件支持色谱分峰与定量功能、审计追踪、数据管理、用户管理、个人管理等功能；23、仪器操作有软件控制，分离纯化参数都可以在线更改；24、软件中文界面，模块化设计，便于学习和操作，符合中国用户使用习惯。 仪器组成1、高压二元梯度泵系统；2、混合器；3、四波长UV-VIS检测器；4、自动进样器馏分收集一体机；5、溶剂槽；6、模块化液相工作站；7、电脑 ； 技术指标泵1、流量范围：0～200mL/min单泵，0～400mL/min双泵；2、压力范围：标准300bar；紫外检测器1、检测器范围：190～850nm；2、检测器光源：氘灯-钨灯组合光源；3、波长精度：±1nm；重复性0.2nm；4、检测方式：UV-VIS检测器，4波长实时显示；自动进样模块1、定量环：10mL；2、进样位数：108位；3、试管规格：13*100mm；馏分收集模块1、馏分收集容器：400位（标配）；2、试管规格：18*180mm，（其它规格可定制）； 可选配件1、 蒸发光散射检测器；2、二极管阵列检测器； 由于技术不断进步，本公司保留设计更改之权利，更改恕不通知，敬请谅解。
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    厂商： 上海纯华生物科技有限公司
    品牌： 纯华/CHUNHUA
    型号： PrepChromaster-8000
    价格： 20万 - 30万元
  • PuriSmart-200型制备色谱系统 400-875-7187
    PuriSmart-200型制备色谱系统上海科哲生化科技公司是上海知名分析仪器企业，为了满足中药分离纯化的客户需求，以国家重大仪器专项成果为基础，成立了分离纯化事业部，并启用PuriSmart品牌，专注于中药分离纯化。PuriSmart-200型制备色谱系统是为满足小型研发组的分离纯化需求的制备型HPLC系统，产品结实耐用、具有极高的性价比，是小型中药研发组创立之初的理想选择。仪器特点1、 使用高精度HPLC制备色谱泵，重现性良好；2、 使用高压梯度混合，不需要脱气机，梯度基本无滞后；3、 使用进口专用高压六通阀，配合制备定量管，使用寿命长；4、采用氘灯-钨灯组合光源，双波长检测器，可检测190nm-850nm范围任意两个波长信号；5、带有光源自检功能，管理光源寿命，提醒及时更换；6、带有单色仪自校正功能，波长准确性高；7、采用进口高性能光电检出器，性能稳定、检测灵敏；8、采用1200线高分辨光栅，在紫外-可见范围具有良好的分光效能；9、采用X-Y矩阵式收集，收集数量远高于多通阀；10、软件具有梯度、色谱图、馏分收集图、设备状态同图显示的功能；11、软件具有多检测器同一坐标系内显示色谱图的功能；12、软件具有在线UV-VIS光谱扫描的功能，可得出组分的紫外光谱图；13、软件支持色谱分峰与定量功能、审计追踪、数据管理、用户管理、个人管理等功能；14、软件中文界面，模块化设计，便于学习和操作，符合中国用户使用习惯； 仪器指标泵1、流量范围：0-100 mL/min；2、压力范围：0-30MPa；3、流速准确度：±1.5%；4、压力脉动：＜±0.2MPa紫外检测器1、波长范围：190 nm-850 nm（双波长同时检测）；2、波长精度：±1nm；重复性0.1nm；3、单色仪：1200线光栅；4、光源：氘灯-钨灯组合光源；5、波长精度: ±1nm；6、基线噪音：±0.1mAU，254nm；7、基线漂移：0.2mAU，254nm；手动进样器1、进样量：5mL（标配），其它规格可选； 仪器组成1、高压双泵二元梯度系统；2、制备级混合器3、双波长UV-VIS检测器；4、高压六通进样阀（含定量环）；5、溶剂槽；6、制备柱（C18, Φ10× 250mm,10μm填料）；7、模块化液相工作站；8、电脑； 选配件1、ELSD-5000KS制备型蒸发光散射检测器；2、二极管阵列检测器；3、示差检测器；4、其它规格色谱柱； 由于技术不断进步，本公司保留设计更改之权利，更改恕不通知敬请谅解。
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    厂商： 上海科哲生化科技有限公司
    品牌： 科哲/KEZHE SHANGHAI
    型号： PuriSmart-200型
    价格： 30万 - 40万元
  • 抗体药物纯化专用制备色谱
    三为科学蛋白纯化专用制备色谱是一款简洁高效的蛋白，核酸，多肽，血制品，抗体药物，病毒疫苗，胰岛素，重组蛋白，基因合成，引物合成专用的制备色谱纯化系统，其中biolot50实验室蛋白纯化系统应用于方法探索、工艺优化 和填料筛选，适用于毫克到克级样品的蛋白纯化制备。Biolot系统的硬件由PEEK泵、紫外检测器、电导/PH检测器、自动馏分收集器、混合器和阀组成，与bioview软件、层析柱和填料配套使用，仪器可满足任何纯化挑战。系统配置灵活、支持各种层析技术，并满足客户从小试到中试纯化工艺的的开发要求。 Biolot蛋白纯化系统产品性能： 可快速分离蛋白质、多肽等生物大分子化合物 高度灵活的模块化配置，让科研过程更直观 采用高精度柱塞泵、高稳定性、低脉冲 高灵敏度在线检测，可选配UV、PH、电导、示差折光等多种检测器 流路为PEEK材料，生物兼容性好 泵头具有自动清洗功能，避免缓冲液残留、结晶析出 全自动馏分收集器，具有多种收集模式，可配置多种规格收集管 标配梯度程序、客户可根据实验需要进行重新设置 存储和执行色谱分离方法 高度智能化操作系统，使用简单方便 控制软件符合“FDA 21 CFR Part 11 认证”认证要求Biolot100蛋白纯化系统技术参数：型号Biolot 100系统泵PEEK柱塞泵（高精度、低脉冲）流速范围0.01-100ml/min流速精度± 0.5% 压力范围0—20Mpa压力脉动≤0.2MPa梯度类型台阶、线性变化梯度、可在线修改梯度最小梯度调节±0.5%ABS(双泵)检测器光源进口氘灯+钨灯（系统自动切换灯源）检测波长190～800nm（两波长同时检测）波长精度±1nm吸光度范围-3--3AU (线性 0--2 AU）电导范围0—999.9ms/cmPH范围0—14收集器全自动馏分收集器收集管架2×60支试管（高度150mm，直径15mm）收集模式普通模式、顺序收集、循环收集手动上样阀标配1ml定量环（可选配各种规格定量环）电源85 ～ 264VAC,50Hz控制软件通过RS-232(USB),采用基于Windows XP/Windows7/ Windows8/ Windows10/的PC软件工作站，多模块系统控制、设计符合“FDA 21 CFR Part 11 认证”参考尺寸输液泵：370×240×152mm3 紫外检测器：370×240×152mm3 电导/PH：370×240×100mm3 自动馏分收集器：355×241×320mm3 更多制备液相色谱/蛋白纯化系统/中压制备色谱近10个型号详见官网流量：50ml、100ml、200ml 1000ml 流通池：半制备池、制备池泵材料：不锈钢泵、peek泵
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    厂商： 上海三为科学仪器有限公司
    品牌： 三为/sanotac
    型号： ebiolot 100
    价格： 10万 - 20万元
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抗体药物纯化专用制备色谱相关的资讯

  • 【ISCO 制备色谱仪】快速色谱法在简单碳水化合物纯化中的应用
    01 摘要碳水化合物化合物可利用 RediSep Gold Amine 色谱柱结合蒸发光散射检测（ELSD）进行简便的纯化。该色谱柱采用亲水相互作用液相色谱（HILIC）梯度洗脱法，以乙腈或丙酮与水的梯度进行操作。将待纯化的样品溶解于 DMSO 中，不仅允许大量样品加载，同时还能保持良好的分辨率。02 背景碳水化合物通常采用氨基柱进行分析，该方法具有良好的分辨率。这种分析方法一般使用乙腈和水作为流动相，样品通常溶解在水中。由于样品注射量较小，样品有机会吸附在固定相上。在制备色谱中，相对于色谱柱尺寸而言，样品负载和注射体积要大得多，因此将样品溶于水中注射可以防止碳水化合物吸附在柱子上，导致它们在空隙处洗脱。干法加载样品到固体装载小柱上通常用于快速色谱，但用户需要自己用氨基介质填充他们的小柱。样品仍然溶解在水中进行加载，这需要很长时间才能在运行样品前蒸发。二甲基亚砜（DMSO）常用于反相色谱的样品溶解，因为它能溶解大多数化合物。DMSO 能够溶解碳水化合物，但在 HILIC 中是一种弱溶剂，因此它允许样品吸附在柱子上。在使用氨基柱时，DMSO 在洗脱早期被洗脱；然而，在采用非氨基介质的其他 HILIC 运行中，它可能在梯度洗脱的后期才被洗脱。03 结果与讨论虽然亲水相互作用液相色谱（HILIC）属于正相色谱，但它使用的溶剂通常适用于反相色谱，因此需要根据表 1 中的设置调整蒸发光散射检测器（ELSD）的参数，以保持基线稳定的同时维持灵敏度。表1. 纯化碳水化合物的蒸发光散射检测器（ELSD）设置。ELSD控制设置值Spray Chamber20℃Drift Tube60℃Gain1SensitivityHigh样品均溶解于 DMSO 中。如有必要，将样品在热水浴中加热以促进溶解。使用 PeakTrak Flash Focus 梯度生成器在系统上开发方法。运行了一个亻贞查梯度以验证样品能够被洗脱，并证明化合物之间有足够的分辨率以实现成功的纯化。所需化合物的保留用于计算聚焦梯度的溶剂组成。所有运行均使用 RediSep Gold 氨基柱。运行完成后，用2-丙醇洗涤并储存柱子，2-丙醇与有机溶剂混溶，可实现较少极性化合物的快速纯化。第一个实例使用了核糖和葡萄糖。亻贞查梯度和聚焦梯度都使用乙腈作为弱溶剂。亻贞查运行只用了少量几毫克，并且为了提高这个小样品负载的灵敏度，ELSD 增益被调高到 3。第二个洗脱峰用于聚焦梯度；计算梯度后，ELSD 增益被重置为 1 以保持 ELSD 响应在量程内。总样品负载为 100 毫克，使用 50 克 RediSep Gold Amine 柱。果糖和蔗糖通常一起出现在样品中。图 2 展示了从葡萄糖杂质中纯化果糖的过程。该混合物以与核糖-葡萄糖样品类似的方式运行，梯度聚焦于葡萄糖。在约 1.8 柱体积（CV）出现的峰是用于溶解样品的 DMSO。图1. 核糖和葡萄糖在 5.5 克 RediSep Gold Amine 柱上运行亻贞查方法（上图），并聚焦到 50 克 RediSep Gold 胺柱上。样品总负载量为核糖和葡萄糖各 50 毫克。聚焦梯度中约 1.8 柱体积处的小峰是 DMSO。图2. 使用 RediSep Gold Amine 柱和乙腈/水梯度从蔗糖中纯化不纯的果糖。04 丙酮作为弱溶剂丙酮也是 HILIC 的弱溶剂，可以替代乙腈使用。尽管醇类可以用于 HILIC，但这些溶剂对于在胺柱上纯化碳水化合物来说太强了。使用丙酮纯化了一个果糖和葡萄糖的样品。该混合物的纯化方式与之前的例子相似，除了亻贞查梯度使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold Amine 柱，因为 PeakTrak 允许使用任何尺寸的 Teledyne ISCO 柱进行亻贞查运行。聚焦梯度使用了一根 50 克的 RediSep Gold Amine 柱，但计算出的梯度需要较低的水浓度来纯化葡萄糖，这表明对于这些化合物，丙酮是比乙腈更强的溶剂。图3. 使用丙酮/水梯度纯化的果糖和蔗糖。亻贞查运行使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold 胺柱。05 结论使用 NextGen 300+ 配备蒸发光散射检测器（ELSD）和 RediSep Gold 胺柱，通过 HILIC 梯度方法可以高效纯化碳水化合物。使用 DMSO 溶解样品既保证了高样品负载量，又保持了良好的分辨率。PeakTrak Flash Focus 梯度生成器使得 Teledyne ISCO 制造的所有色谱柱都能快速开发和放大方法。
    时间： 2024-06-11
    作者： 培安公司
  • 沃特世9月12日"高校系列1——HPLC制备纯化篇：制备色谱柱与仪器应用与维护"网络讲座即将启动
    日期: 2017年9月12日时间: 14:00 – 16:00地点: 网络讲座语言: 简体中文 面对不同的研究课题，化药、肽药、中药，不同的极性，你会根据项目特点来选择合适的制备柱吗？你知道从UPLC直接放大到制备纯化的计算工具吗？你们实验室有Waters AutoP自动纯化系统吗？本次网络讲座将会帮助您了解极具特色的Waters制备柱，帮助您更好的应对您的项目；资深应用工程师为您辅导AutoP的操作维护事项，让您的仪器更稳定耐用，实验课题进展更为顺利！ 讲座概要： 如何选择并顺利应用合适的制备柱？Auto-Purification 制备液相特色应用与操作维护 主讲人：黄金昌（沃特世资深应用工程师）；吴柳柳（沃特世应用工程师） 登录沃特世官网并搜索“高校系列1——HPLC制备纯化篇：制备色谱柱与仪器应用与维护”即可进行注册报名。 此网络讲座免费报名参加。您只需要使用一台链接网络的电脑即可参加，如果您需要在讲座中加入讨论或语音提问，请您提前准备好麦克风。收到您的注册信息后我们会筛选并在讲座前一天通过电子邮件给您发送讲座登录链接。如有任何问题请拨打电话：021-61562642或发送邮件至minxing_guo@waters.com，谢谢。
    时间： 2017-09-04
    作者： Waters
  • 2026年全球制备色谱市场将达130亿
    仪器信息网讯 根据外网研究机构调研显示， 2021年全球制备、过程色谱市场规模约为93亿美元，而到2026年，该市场规模将达128亿美元，年复合增长率约为6.7%。对例如胰岛素等生物制品需求增加，对ω−3脂肪酸的高需求，业内对制备和过程色谱认识的进一步提高，食品安全问题增多，以及政府对合成生物学和基因组项目的投资增加，都将推动预测期内市场的增长。由于印度和中国等新兴国家需求旺盛，在预测期内，亚太地区的制备和过程色谱市场将显著增长。该地区制药和生物技术公司研发投入增加，是支持市场增长的主要因素。报告指出，近年来，制备及过程色谱的市场参与者，例如色谱仪器、消耗品、配件制造商和服务提供商，正在积极提高应用行业对制备色谱和过程色谱技术进步的认识。大量相关会议和专题讨论会召开，形成了广泛的影响力。这些都有助于提高人们对制备色谱法和工艺色谱法以及即将推出和可用的先进技术产品的认识，这对于推动市场增长有着积极意义。制备色谱和过程色谱的终端用户主要集中在生物技术、制药、食品、保健品等行业以及科研实验室。其中，由于生物制药行业的蓬勃发展，药物、疫苗开发等研发活动增多，研发投入增长明显，生物技术和制药行业对制备和过程色谱的需求在各行业中最高，终端用户数量也最大。特别是目前大热的单克隆抗体对于制备色谱、过程色谱市场是一个很好的机会。单克隆抗体作为生物制药在治疗多种疾病方面显示出巨大潜力，目前主要的制药公司都增加了对单克隆抗体的关注，同时各国监管机构批准的单克隆抗体数量不断增加。制备色谱、过程色谱在纯化单克隆抗体中起着至关重要的作用，单克隆抗体市场的发展将推动制备和过程色谱市场的增长。但是也要看到，制备及过程色谱相关仪器成本居高不下限制了相关技术的应用推广。中小型的石化、食品、生物技术和制药企业等在其生产过程中需要许多此类系统，因此，采购这些系统的会使得企业资本投入显著增加。此外，由于预算控制等因素，中小型的科研实验室很难负担这些系统。同时，较高的维护成本以及一些其他间接费用也使得拥有并使用这些系统的成本变高。此外，目前使用制备色谱法和过程色谱法的制药公司也不愿投资于新仪器。在这种情况下，仪器的高成本预计会限制制备色谱和过程色谱市场的增长。同时，缺乏熟练的专业人士也对技术的推广带来了负面影响。色谱分析技术的正确使用需要具有相关经验的专业知识。特别是，色谱仪器的技术不断进步，也大大增加了其复杂性。操作维护仪器、方法开发以及分析数据等都需要具备相关知识以及有大量实践经验。专业人员的严重缺乏，将抑制色谱市场在未来几年的增长。报告也指出，制备及过程色谱的主要市场参与者包括上赛默飞、丹纳赫、默克、伯乐、安捷伦、岛津、沃特世、诺华赛、大赛璐、珀金埃尔默、日立、技尔、赛多利斯、瑞普利金等。
    时间： 2022-09-28
    作者： 彩虹
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抗体药物纯化专用制备色谱相关的方案

  • 测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件
    抗体药物偶联物 (ADC) 是一类新兴生物治疗药物，旨在通过将药物与单克隆抗体相连实现靶向给药。与小分子药物不同，ADC 不是单分子实体，而是一类异质性的抗体，每种抗体所携带的药物数量以及经历的翻译后修饰都各不相同。药物/抗体比率 (DAR) 是指 ADC 偶联的药物的平均数量。DAR 是 ADC 开发过程中需要优化和密切监测的关键质量属性，因为它将影响疗效和毒性。由于药物的释放，在血液循环中 ADC 的 DAR 将随时间发生变化。因此，制定一套测定药代动力学 (PK) 研究样品中 ADC DAR 的稳定解决方案非常关键。要确定 ADC DAR，首先必须纯化血清中的 ADC，然后使用 LC/MS 对其进行分析。通常该工作流程中的样品前处理和数据分析环节需耗费大量人力，因此易受变异性和人为误差影响。本应用简报介绍了一种用于测定血清样品中 ADC DAR 的解决方案，该方案采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对 ADC 进行自动亲和纯化；将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 与Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪联用，用于采集准确的完整蛋白分子量数据；并利用 Agilent MassHunter BioConfirm 和 DAR 计算器软件确定 ADC 质量和 DAR。该工作流程可节省人力、降低变异性以及减少产生与 ADC DAR 测定相关的人为误差的可能性，而且仅需很少的工作量即可扩展样品处理量。
  • 合成药物中间体的分离纯化
    正相色谱和反相色谱是Flash制备色谱常用的两种分离模式，被广泛应用于各类有机合成产物的分离纯化中。在正相色谱中，采用极性固定相（如带有二醇基、氨基或氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等）并结合使用非极性流动相（如正己烷等），根据分子的极性大小将其分开。由于正相色谱以吸附效应作为分离的基础，因此也被称为吸附色谱。而在反相色谱中，采用非极性固定相（如带有C18基团的硅胶等）配合极性流动相对样品进行分离。这两种分离模式基于不同的分离机理，因此在将两种分离模式联用时可称之为正交色谱分离模式，从而获得对复杂样品更高的分辨力和更好的分离效果。本文中以某合成药物中间体为样品，利用SepaFlash系列正相硅胶柱及反相C18柱联合使用，实现了对样品的高效分离纯化，获得了满足纯度要求的目标产物，为此类复杂样品的快速制备纯化提供了新的思路。
  • 抗体药物的层析纯化工艺及HPLC质量控制方法
    抗体是一种结构复杂的生物大分子，由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体，其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体(IgG)在生产工艺(细胞培养、分离纯化)与保存过程中易发生不均一性的变化，包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步，单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱(HPLC)作为一种分离技术，在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。近年来，东曹生物的科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质，基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离，在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。
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  • 制备色谱纯化技术服务

    目前，新药研发市场竞争如火如荼，大小药物研发公司都在奋力一搏，但是真正能成功的如凤毛麟角。本公司提供制备色谱分离纯化包括SFC手性、非手性服务，反相制备，杂质制备服务及技术咨询服务可以真正加快你得到你的目标化合物的速度。欢迎大家跟帖

  • 试述制备单克隆抗体药物的工艺流程

    [font=宋体][font=宋体]单克隆抗体是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤[/font][font=Calibri](hybridoma)[/font][font=宋体]抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞杂交瘤。[b]下面为大家讲解[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production]制备单克隆抗体[/url]药物的工艺流程步骤[/b]：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、抗原提纯与动物免疫[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]107[/font][font=宋体]个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择与所用骨髓瘤细胞同源的[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]健康小鼠，鼠龄在[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]只小鼠。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得高效价抗体为最终目的。免疫间隔一般[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]周。一般被免疫动物的血清抗体效价越高，融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大，而且单克隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关。末次免疫后[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]天，分离脾细胞融合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞同源。如待融合的是脾细胞，各种骨髓瘤细胞株均可应用，但应用最多的是[/font][font=Calibri]Sp2/0[/font][font=宋体]细胞株。该细胞株生长及融合效率均佳，此外，该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重链或轻链。细胞的最高生长刻度为[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，倍增时间通常为[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]15h[/font][font=宋体]。融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞（活性应大于[/font][font=Calibri]95[/font][font=宋体]％）。骨髓瘤细胞株在融合前应先用含[/font][font=Calibri]8-[/font][font=宋体]氮鸟嘌呤的培养基作适应培养，在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为[/font][font=Calibri]2 [/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，次日一般即为对数生长期细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在体外培养条件下，细胞的生长依赖适当的细胞密度，因而，在培养融合细胞或细胞克隆化培养时，还需加入其他饲养细胞（[/font][font=Calibri]feeder cell[/font][font=宋体]）。常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞，制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔，轻揉腹部数次，吸出后的液体中即含小鼠腹腔细胞，其中在巨噬细胞和其他细胞。亦有用小鼠的脾细胞、大鼠或豚鼠的腹腔细胞作为饲养细胞的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在制备饲养细胞时，切忌针头刺破动物的消化器官，否则所获细胞会有严重污染。饲养细胞调至[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，提前一天或当天置板孔中培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、细胞融合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞融合是杂交瘤技术的中心环节，基本步骤是将两种细胞混合后加入[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]使细胞彼此融合。其后吧培养液稀释[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]，消除[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]的作用。将融合后的细胞适当稀释，分置培养板孔中培养。融合过程中有几个问题应特别注意。①细胞比例：骨髓瘤细胞与脾细胞的比值可从[/font][font=Calibri]1:2[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]1:10[/font][font=宋体]不等，常用[/font][font=Calibri]1:4[/font][font=宋体]的比例。应保证两种细胞在融合前都具有较高活性。②反应时间：在两种细胞的混合细胞悬液中，第[/font][font=Calibri]1min[/font][font=宋体]滴加[/font][font=Calibri]4.5ml[/font][font=宋体]培养液；间隔[/font][font=Calibri]2min[/font][font=宋体]滴加[/font][font=Calibri]5ml[/font][font=宋体]培养液，尔后加培养液[/font][font=Calibri]50ml[/font][font=宋体]。③培养液的成分：对融合细胞，良好的培养液尤其重要，其中的小牛血清、各种离子和营养成分均需严格配制。如融合效率降低，应随时核查培养基情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有限稀释法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]筛选阳性株一般选用的骨髓瘤细胞为[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]敏感细胞株，所以只有融合的细胞才能待续存活一周以上。融合细胞呈克隆生长，经有限稀释后（一般稀释至[/font][font=Calibri]0.8[/font][font=宋体]个细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]孔），按[/font][font=Calibri]Poisson[/font][font=宋体]法计算，应有[/font][font=Calibri]36[/font][font=宋体]％的孔为[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]孔。细胞培养至覆盖[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]％～[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]％孔底时，吸取培养上清用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测抗体含量。首先依抗体的分泌情况筛选出高抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，尔后进行抗原特异的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、单克隆抗体的制备和冻存[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]筛选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10ml[/font][font=宋体]的腹水，有时甚至超过[/font][font=Calibri]40ml[/font][font=宋体]。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。接种细胞的数量应适当，一般为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/[/font][font=宋体]鼠，可根据腹水生长情况适当增减。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选出的阳性细胞株应及早冻存。冻存的温度越低越好，冻存于液氮的细胞株活性仅有轻微的降低，而冻存在－[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃冰箱则活性改变较快。细胞不同于菌种，冻存过程中需格外小心。二甲亚砜（[/font][font=Calibri]DMSO[/font][font=宋体]）是普遍应用的冻存保护剂。冻存细胞复苏后的活性多在[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]％～[/font][font=Calibri]95[/font][font=宋体]％之间。如果低于[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]％，则说明冻存复苏过程有问题[/font][font=Calibri].[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、单克隆抗体的纯化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体的纯化方法同多克隆抗体的纯化，腹水特异性抗体的浓度较抗血清中的多克隆抗体高，纯化效果好。按所要求的纯度不同采用相应的纯化方法。一般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化目的，也有采用较简单的酸沉淀方法。目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法，多用葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体（最常用[/font][font=Calibri]Sepharose[/font][font=宋体]）交联，制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱，回收率可达[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]％以上。蛋白可与[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG2a[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG2b[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]结合，同时还结合少量的[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]。洗脱液中的抗体浓度可用紫外光吸收法粗测，小鼠[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]单克隆抗体溶液在[/font][font=Calibri]A280nm[/font][font=宋体]时，[/font][font=Calibri]1.44[/font][font=宋体]（吸光单位）相当于[/font][font=Calibri]1mg/ml[/font][font=宋体]。经低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]洗脱后在收集管内预置中和液或速加中和液对保持纯化抗体的活性至关重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/mab-purification][b]单克隆抗体纯化[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/mab-purification[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]

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