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看了一篇文章,做植物内生菌分离之后,再筛选可产生PQQ(吡咯并喹啉醌)的内生菌的步骤如下初筛:选择加入甲醇后发酵液变为红色的内生菌(说明选择是甲醇利用型内生菌)复筛:原文如下”PQQ 的光谱法分析参照杨延新的方法进行,将 PQQ 产物分别加入石英和玻璃比色杯中进行紫外扫描,以 MPQ 培养基加入 3 倍体积甲醇液为对照,记录 D326nm和 D400nm值,计算OD326nm-OD400nm值用以检测 PQQ 含量“不明白之处是为何减去400nm处的值。随后查杨延新的文献上又有如下解释“光谱法是以 D326nm值与 D400nm值的差值来检测PQQ 含量。 PQQ 在 247 和 330 nm 左右有 2 个特征吸收峰。考虑到蛋白质和核酸的干扰,排除 247 nm的吸收峰,选择 330 nm 吸收峰的峰值吸收,即 326nm。 400 nm 为末端吸收,利用 326 与 400 nm 的差值可以消除系统误差。”不明白到底什么是末端吸收,查了相关解释也是一懂半懂,400nm处究竟什么引起系统误差??后来问过别人,说是因为如果做全波长扫描的话,在400处有吸收峰,400处值不是最低,所以要减去400的值。可是明明是326是PQQ的最大吸收峰,而要测得也只是PQQ而已,到底为何减去400的值,好纠结,不懂啊~~~~~对紫外吸收这块实在很初学,麻烦高手解释一下~~~~谢谢~~~
紫外测定含量是不建议选择末端吸收峰作为测定波长,距离终点多大的范围算是末端吸收峰呢
首先明确一下什么是末端吸收:指的是流动相在紫外短波段的吸收。描述一种溶剂的末端吸收常用其截止波长描述。溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收,此时溶剂被看作是光学不透明的,它严重干扰组分的吸收测量。其测量是将溶剂装入1cm的比色皿,以空气为参比,逐渐降低入射波长,溶剂的吸光度A=1时的波长称为溶剂的截止波长,也称极限波长。乙腈的截止波长是190nm,而甲醇是210nm。