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巴浦洛夫说:“科学是依赖于方法的进步程度推动而前进的。”被列为二十一世纪十大尖端科技之一的超高压生物处理技术,是一次工业革命,它将对生物工艺学产生巨大的影响。它提出了大量的新的研究课题,丰富了生物学理论,蕴含着极大的技术开发潜力,具有广阔的市场前景。 超高压生物处理技术应用领域非常广泛,为生物、医药和食品工程的科学研究、产品开发、工艺改革提供新的平台。1.病毒灭活 200~300Mpa超高压能破坏病毒膜结构内部的非共价键结合。使膜衣壳蛋白亚单位之间解体,空间结构变化,构象转换,生物活性改变,从而使病毒颗粒丧失感染性。但超高压不破坏共价键,因此抗原的单个亚单位未被破坏,保持了免疫原性不变。用此方法可以获得没有传染性而免疫原性不变的完整的病毒颗粒。2.制取疫苗 传统的制取疫苗方法均采用热力和化学处理灭活病毒,这些方法存在很大弊端。例如流感病毒灭活疫苗传统制备方法为化学方法。它使用化学试剂甲醛灭活病毒,易使病毒表面粒子受损,影响疫苗的免疫原性。同时甲醛具有刺激性和副作用,接种后易引起人体反应。超离心机和层析色谱技术使病毒纯度大大提高,但儿童使用仍有不良反应。流感病毒亚单位和表面抗原疫苗接种,虽然不良反应有所减少,但其免疫原性不如纯化的全病毒粒疫苗。而超高压250Mpa灭活疫苗的方法,不仅保留流感全病毒完整结构不被破坏,而且病毒完全灭活,同时抗原的免疫原性不受影响,反而效价提高。它不残留化学物质成分,使用安全。超高压灭病毒具有广谱性,对于这种变异快,变种多的流感病毒最为适宜,它工艺简便,生产周期短,成本低。3.处理血浆 目前已有多种方法应用于血液制品的病毒灭活处理,如:巴斯德法、S/D法、亚甲兰光照法等。但现有的这些方法都有一定缺陷。S/D法只对有脂质包膜的病毒有效,而且在给病人输血前必须将灭活剂彻底清除。过滤法处理过程缓慢,价格昂贵,而且只对高纯度血液制品有效。加热处理会使蛋白质变性,需加入稳定剂。更重要的是目前所采用处理过程都有降低血液及血液制品中蛋白质治疗功能的可能性。超高压灭活血浆中的病毒是一个物理过程,无化学品加入,也不同于高温处理,施压和泄压都是即时的,均匀的。它对致病微生物的杀灭有广谱效果。没有交叉污染。实验证明,适当的超高压对血液制品的活性成分无明显的损伤,是一种高效的、简洁的、可靠的病毒灭活方法,具有很好的应用前景。
首先非常感谢月旭公司提供的超高压液相柱免费试用机会,这是本人第一次使用超高压液相柱,感觉超高压液相柱相比于普通液相柱各个方面都很棒。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604271704_591656_2468420_3.jpg这里简单谈谈我试用月旭这款超高压液相色谱柱的情况,本来是准备做样品中有机酸分析,后因有机酸标品未到货,故而尝试20种游离氨基酸的分析,这里仅仅只是做了标品的对照。仪器为Agilent 1290 Infinity,实验条件如下:以2, 4 -二硝基氟苯(DNFB)作衍生化试剂,0.015 mol/L磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲液(pH=7.50)和50%乙腈水溶液为流动相,采用反相HPLC法分析测定。得到的色谱图如下图所示,按保留时间排序,每个色谱峰对应的组分分别为:天门冬氨酸,谷氨酸,天门冬酰胺,丝氨酸,精氨酸,甘氨酸,苏氨酸,脯氨酸,丙氨酸,缬氨酸,甲硫氨酸,异亮氨酸,胱氨酸,亮氨酸,色氨酸,苯丙氨酸,组氨酸,半胱氨酸,赖氨酸,酪氨酸,其中最强峰为溶剂峰。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604271704_591657_2468420_3.png条件: Welch Ultimate UHPLC LP-C18 50×4.60mm 1.8micron;梯度洗脱;柱温25℃;DAD检测器,检测波长:360 nm;进样量2 μL。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604271704_591658_2468420_3.png条件:phenomenexSynergi Hydro-RP 250×4.60mm 4micron;梯度洗脱;柱温25℃;DAD检测器,检测波长:360 nm;进样量10 μL。从试用效果简单谈下我的感想,从比较情况来看,这款超高压液相柱还是非常不错的,细说主要是以下几点:(一)Welch超高压液相柱相比普通C18柱不仅提高了分离速度,样品保留时间由原来的50min缩减至13min,分析效率得到极大的提高;(二)相比于普通液相柱,Welch超高压液相柱具有较高的灵敏度,分析样品的响应信号有明显的提高,不仅得到较好的峰形,无拖尾现象,并且具有更好的重现性;(三)Welch超高压液相柱的使用,不仅减少流动相中有机溶剂的使用,缩短了分离时间且分析结果更加精确。当然,测试的过程中也出现一个小插曲,就是液相柱在分析完样品后柱压有明显升高,排查后为柱子堵塞,连续冲了2晚终于柱压正常,这说明超高压液相柱极易堵塞,建议接预柱使用。最后,对于这次月旭超高压液相柱的试用非常满意,感谢月旭公司能够提供这样的机会。
超高压液相色谱中使用亚2μm填料,以其高效、快速的特点已成为液相色谱发展的新方向之一。该文在回顾压力对液相色谱行为影响研究的基础上,对超高压液相色谱仪器的进展及相关问题加以系统综述,引文36篇。【作者单位】:南京理工大学工业化学研究所 南京理工大学工业化学研究所 南京理工大学工业化学研究所 大连依利特分析仪器有限公司 中国科学院大连化学物理研究所 江苏南京210094 大连依利特分析仪器有限公司 辽宁大连116023 江苏南京210094 大连依利特分析仪器有限公司 辽宁大连116023 江苏南京210094 辽宁大连116023 中国科学院大连化学物理研究所 辽宁大连116023 辽宁大连116023 华东理工大学 上海200237【关键词】:超高压液相色谱仪 亚2μm填料 柱效 综述【基金】:国家自然科学基金面上基金资助项目(No.20675083)【分类号】:O657.72【DOI】:CNKI:SUN:SPZZ.0.2008-01-020【正文快照】: 在进行色谱方法建立时,人们力求在尽可能短的分析时间内获得尽可能多的样品信息。因此,高效、快速的色谱分离方法始终是分析学家追求的目标。在液相色谱方法中,采用小粒径的填料通常可以得到更高的柱效及更快的分离速度。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=107372]超高压液相色谱仪的研究进展及超高压引起的相关问题[/url]