色谱分离技术通俗说法

寡核苷酸分离技术合成寡核苷酸和DNA片段被应用于迅速发展的应用领域，包括作为主体或杂交探针用于治疗性制剂。沃特世寡核苷酸分离技术(OST：Oligonucleotide Separation Technology)基于BEH杂化颗粒的反相色谱柱，以及Gen-Pak离子交换柱，应对各种高分辨分析与实验室规模分离挑战所需，包括涉及各种DNA和RNA品种。沃特世OST色谱柱装有键合了C 18 的第二代杂化技术BEH颗粒。对去三苯甲基(detritylated，或称脱保护)的合成寡核苷酸样品的分离，基于成熟的离子对反相色谱法。沃特世提供1.7 μm UPLC颗粒或2.5 μm HPLC颗粒，装填以各种不同色谱柱规格，从而灵活满足各种实验室规模分离或分析的不同需求，并能实现异乎寻常的样品分辨率和卓越的色谱柱使用寿命。此外，沃特世的制造和质控测试程序，有助于确保批次之间与柱之间的性能的一致性，而无论应用的难度有多高。1、分离效率相当于或优于PAGE、CGE、或离子交换HPLC方法2、可从去三苯甲基(脱保护)的全长产物中分辨出失败序列3、可放大的柱规格，满足实验室规模的分离需求4、超长的色谱柱使用寿命，降低单次分析或分离成本5、经MassPREP OST标准品质控测试，帮助确保性能稳定对寡核苷酸混合物具有异乎寻常的高分辨率ACQUITY UPLC OST C 18 ，1.7 μm色谱柱(设计专用于ACQUITY UPLC系统)和XBridge OST C 18 ，2.5 μm色谱柱，能完全适用于离子对反相色谱法分析和纯化去三苯甲基寡核苷酸的需求。如图所示(右图)，使用沃特世UPLC技术所进行的分离，具有与毛细管凝胶电泳(CGE)相媲美的组分分辨率，而且分析时间显著缩短。由于使用亚2 μm BEH技术颗粒提高了分辨力，因而有可能对大寡核苷酸序列进行分离(如将N与N-1分开)。此外，使用沃特世OST色谱柱配合质谱联用技术以及对质谱兼容的洗脱剂，有可能对与失败序列的色谱分离开的目标寡核苷酸产物的分子量特征进行定量分析。分离15-60mer去三苯甲基寡脱氧胸苷序列组(Detritylated Oligodeoxythymidine Ladder)分离去三苯甲基寡脱氧胸苷序列组，比较毛细管凝胶电泳(CGE)与离子对反相色谱方法的分离效果纯化单链RNA干扰RNA寡核苷酸的UPLC/MS分析RNA干扰(RNAi)机制的发现现在被广泛用于静默目标基因表达，这推动了对小分子干扰RNA(siRNA)分析的需求。为满足对20-25个核苷酸的小分子干扰RNA(siRNA)进行耐用的、快速的、灵敏的分析的需求，沃特世开发了一个UPLC/MS方法，运用了UPLC OST色谱柱和Synapt HDMS质谱仪。采集准确质量可对5’-截断寡聚体(寡核苷酸合成过程所产生的失败序列)以及其它一些杂质峰进行分配。质谱图中的质量的每个峰均使用MaxEnt 1软件进行去卷积化。图2给出了推测性的5’-端失败产物。对寡核苷酸母体的几乎完整序列均进行了解释。质谱分析还显示除了目标21-mer RNAi序列以外，还存在一个额外的尿苷单核苷酸。对一个21mer的RNA进行LC/MS分析不同离子对试剂对不同寡核苷酸序列分离的影响杰出的柱寿命在这些苛刻的分离条件下，填充以BEH技术颗粒的沃特世OST色谱柱显示出引人注目的柱寿命，同时还具有并保持卓越的分离性能。而在相同的苛刻分离条件下，传统硅胶基质色谱柱的使用寿命显著缩短。分离5-25mer去三甲苯基(脱保护)寡脱氧胸苷序列——进样1000针柱分辨率没有任何变化寡核苷酸分离技术(OST)柱产品一览表产品描述 粒径 孔径 柱规格 部件号ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 50 mm 186003949ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 100 mm 186003950ACQUITY UPLC OST C 18 * 1.7 μm 135 2.1 x 150 mm 186005516ACQUITY UPLC OST C 18 方法验证包** 1.7 μm 135 2.1x 100 mm 186004898ACQUITY UPLC OST C 18 定制柱* 1.7 μm 135 定制 186003951XBridge OST C 18 2.5 μm 135 2.1 x 50 mm 186003952XBridge OST C 18 2.5 μm 135 4.6 x 50 mm 186003953XBridge OST C 18 2.5 μm 135 10 x 50 mm 186003954XBridge OST C 18 方法验证包** 2.5 μm 135 4.6 x 50 mm 186004906XBridge OST C 18 定制柱 2.5 μm 135 定制 186003955* 用于配合沃特世UPLC系统使用**来自于不同批次填料所装填的三根色谱柱可放大的DNA与RNAi分离，良好的产品回收率研究基因静默、或用于基因敲除时，需要高纯度寡核苷酸。XBridge OST C 18 色谱柱，具有极高分辨率，其柱规格设计用于满足实验室规模的分离需求，是纯化去三苯甲基(脱保护)寡核苷酸的首选色谱柱。如下表所示，XBridge OST C 18 色谱柱规格和操作流速的选择，主要取决于合成反应混合物的规模大小。我们建议根据寡核苷酸样品的载量选择适当的色谱柱规格，这样可使组分分辨率最大化，使目标产物与不要的失败序列分离开得到最大回收率。柱规格 大概样品载量** mg*** 流速2.1 x 50 mm 0.04 μmoles 0.2 mg 0.2 mL/min4.6 x 50 mm 0.20 μmoles 1.0 mg 1.0 mL/min10 x 50 mm 1.00 μmoles 4.5 mg 4.5 mL/min19 x 50 mm* 4.00 μmoles 16.0 mg 16.0 mL/min30 x 50 mm* 9.00 μmoles 40.0 mg 40.0 mL/min50 x 50 mm* 25.00 μmoles 110.0 mg 110.0 mL/min* OST订制柱** 所列数值仅为约值，且取决于寡核苷酸的长度、碱基组成、以及所采用的“切取中心”的馏分收集方法。*** 按平均寡核苷酸分子量及合成产率估算将siRNA Duplex与其相关杂质分离开

糖苷分离技术(GST：Glycan Separation Technology)糖蛋白分析涉及确认复杂的N-和O-端结构，它们通常由相似的和重复的糖片段组成。使用配有荧光检测的亲水作用色谱(HILIC：Hydrophilic-Interaction Chromatography)是受到广泛认可的可靠技术，能够在糖苷被荧光标记衍生化后对它们进行有效的分离和定量。ACQUITY UPLC BEHGlycan色谱柱，专门设计并经过QC测试，为一系列糖苷结构提供在更短时间内进行卓越的UPLC组份分离的能力。再配合ACQUITY UPLC系统，就能帮助用户更快的得到正确的答案。沃特世ACQUITY UPLC BEH Glycan色谱柱，设计用于HILIC模式分离2-氨基苯甲酰胺(2-AB)标记糖苷。该色谱柱的化学性质与我们所推荐的UPLC仪器条件，能够使用一个二元梯度同时分离中性糖苷和带电糖苷。2-AB标记寡糖的保留性取决于该分子的亲水性。该色谱柱的高分辨能力部分来自其小粒径、1.7 μm的多孔填料。色谱柱的化学稳定性和机械稳定性则受益于沃特世的亚乙基桥杂化颗粒技术(BEH)组成和配体键合技术，这有助于确保批次间稳定一致的性能。1、与现有的基于HPLC的方法相比，在更短的时间内实现组份分离度的提高2、配合ACQUITY UPLC系统与荧光检测器时效果最佳3、基于沃特世BEH颗粒和键合技术，可实现对标记糖苷的稳定、可重现的分离4、用相关标记糖苷标准品进行质控测试，以确保稳定的批次间的重现性ACQUITY UPLC BEH Glycan色谱柱分离2-AB标记人IgG糖苷ACQUITY UPLC BEH Glycan色谱柱分离2-AB标记葡聚糖序列ACQUITY UPLC BEH Glycan柱产品描述 柱规格 粒径 部件号ACQUITY UPLC BEH Glycan 2.1 x 50 mm 1.7 μm 186004740ACQUITY UPLC BEH Glycan 2.1 x 100 mm 1.7 μm 186004741ACQUITY UPLC BEH Glycan 2.1 x 150 mm 1.7 μm 186004742ACQUITY UPLC BEH Glycan VanGuard 预柱 — 1.7 μm 186004739ACQUITY UPLC BEH Glycan方法验证包* 2.1 x 100 mm 1.7 μm 186004907*三根柱来自不同的填料批次注意：ACQUITY UPLC BEH Glycan, 1.7μm柱，设计用于ACQUITY UPLC系统。只有具备低系统死体积和低检测器谱带扩散的ACQUITY UPLC系统，才能实现ACQUITY UPLC BEH Glycan柱所装填的1.7μm颗粒的色谱优势。

能否重现性地完成高质量肽分离对蛋白质组学研究和基于肽图的生物药品表征而言，具有至关重要的作用。反相（RP）色谱因其具有相对较高的分辨力并能提供出色的定量（UV）和定性（ESI-MS）信息而成为首选分离模式。沃特世的基于亚乙基桥杂化颗粒技术（BEH技术）和新型带电表面杂化颗粒技术（CSH）的肽分离技术色谱柱可满足这类苛刻应用要求。新型ACQUITY UPLC和XSelect CSH 130 C18保护柱和色谱柱可提供优于多种非传统多孔或表面多孔C18柱产品的峰载量。最适合基于0.1%甲酸的LC/MS应用。对肽的保留性弱于BEH C18柱，但适合分离分子量达10,000道尔顿的多肽。不同颗粒大小（1.7 μm、3.5 μm和5 μm）可满足各类应用需求。使用细胞色素C胰蛋白酶消化液进行质控，确保批次和柱间一致性。ACQUITY UPLC以及XBridge BEH 130和BEH 300 C18保护柱和色谱柱对种类多样的肽均具有极佳的分离效果：大分子和小分子、酸性和碱性、亲水和疏水。130?和300?的孔径可提供不同的分离选择性并适合用于分子量低于或高于10,000道尔顿的多肽。不同颗粒大小（1.7 μm、3.5 μm和5 μm）可满足各类应用需求。使用细胞色素C的胰蛋白酶酶解物进行特定质控测试，确保方法验证时的批次稳定性。注意：本页面内容仅供参考，所有资料请以沃特世官方网站为准。