超声破碎仪

用于组织破碎，有哪种超声破碎仪好？匀浆机跟超声破碎仪有什么区别吗？

细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w，10 s/10 s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA，100 mM NaCl，加溶菌酶至100 ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！ 如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面： 1. 外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题： 1. 蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。

超声破碎的原理：超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管，可能会碎裂，而通常使用的是塑料试管。 1、大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 2、3、酵母破碎的问题/a、一般的PROTOCOL都是用glass beads，破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。 b、化学裂解的方法，10g酵母 加1ml的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的。加尿素裂解液（尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH值8.0），据说效果可以c、毕氏酵母细胞破碎法文献上的方法： The pelleted cells were resuspended in 200 ll 1±8 M NaOH, 1±2 M b-mercaptoethanol, and incubated for 5 min on ice. After addition of 200 ll 10%TCA, the mixture was incubated for 5 min, centrifuged, and the pellet was resuspended in 50 ll 2?SDS-PAGE loading buffer and neutralized at pH 7±0 by adding 5±10 ll 1 M Tris base. The samples were heated to 95 °C for 3 min before loading onto SDS-PAGE gels (12% acrylamide). 若是想得到胞内蛋白可以用蜗牛酶处理，效果比较好！