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干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一。干燥的方法许多,如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等。但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品,一般是体积缩小、质地变硬,有些物质发生了氧化,一些易挥发的成分大部分会损失掉,有些热敏性的物质,如蛋白质、维生素会发生变性。微生物会失去生物活力,干燥后的物质不易在水中溶解等。因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别。 而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法,产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行,即在产品冻结的状态下进行,直到后期,为了进一步降低产品的残余水份含量,才让产品升至0℃以上的温度,但一般不超过40℃。 冷冻干燥就是把含有大量水分物质,预先进行降温冻结成固体,然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来,而物质本身剩留在冻结时的冰架中,因此它干燥后体积不变,疏松多孔在升华时要吸收热量。引起产品本身温度的下降而减慢升华速度,为了增加升华速度,缩短干燥时间,必须要对产品进行适当加热。整个干燥是在较低的温度下进行的冷冻干燥机有下列优点: 一、冷冻干燥在低温下进行,因此对于许多热敏性的物质特别适用。如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力。因此在医药上得到广泛地应用。 二、在低温下干燥时,物质中的一些挥发性成分损失很小,适合一些化学产品,药品和食品干燥。 三、在冷冻干燥过程中,微生物的生长和酶的作用无法进行,因此能保持原来的性装。 四、由于在冻结的状态下进行干燥,因此体积几乎不变,保持了原来的结构,不会发生浓缩现象。 五、干燥后的物质疏松多孔,呈海绵状,加水后溶解迅速而完全,几乎立即恢复原来的性状。 六、由于干燥在真空下进行,氧气极少,因此一些易氧化的物质得到了保护。 七、干燥能排除95-99%以上的水份,使干燥后产品能长期保存而不致变质。 因此,冷冻干燥目前在医药工业,食品工业,科研和其他部门得到广泛的应用。 产品的冷冻干燥需要在一定装置中进行,这个装置叫做真空冷冻干燥机,简称冻干机。 冻干机按系统分,由致冷系统、真空系统、加热系统、和控制系统四个主要部分组成。按结构分,由冻干箱或称干燥箱、冷凝器或称水汽凝集器、冷冻机、真空泵和阀门、电气控制元件等组成。 冻干箱是一个能够致冷到-40℃左右,能够加热到+50℃左右的高低温箱,也是一个能抽成真空的密闭容器。它是冻干机的主要部分,需要冻干的产品就放在箱内分层的金属板层上,对产品进行冷冻,并在真空下加温,使产品内的水分升华而干燥。 冷凝器同样是一个真空密闭容器,在它的内部有一个较大表面积的金属吸附面,吸附面的温度能降到-40℃以下,并且能恒定地维持这个低温。冷凝器的功用是把冻干箱内产品升华出来的水蒸气冻结吸附在其金属表面上。 冻干箱、冷凝器、真空管道和阀门,再加上真空泵,便构成冻干机的真空系统。真空系统要求没有漏气现象,真空泵是真空系统建立真空的重要部件。真空系统对于产品的迅速升华干燥是必不可少的。
1 范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本规范,然而,鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本规范。国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》 GB 19489 实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范(试行)3 术语和定义下列术语和定义适用于本规范。3.1冷冻干燥 freeze-drying 将微生物冷冻,在减压下利用升华作用除去水分,使细胞的生理活动趋于停止,从而长期维持存活状态。3.2液氮超低温保藏 preservation in liquid nitrogen 液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮,或在-150℃的氮气中的长期保藏方法,它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。3.3 -80℃低温冷冻保藏 preservation in -80℃将菌种保藏在[
第一次使用冷冻干燥机时,必须对仪器各部件进行彻底的清洁,不锈钢的部件使用乙醇进行清洗,有机玻璃使用生理盐水进行清洗。安瓿瓶用超声波清洗机进行清洗。 冷冻干燥之前必须要进行预冻,欲动需要准备低温冰箱,零下40摄氏度,或者是零下80摄氏度的低温冰箱,把准备干燥的物品置于低温冰箱或液氮中,一般需要四个小时左右,可以直接从外面进行观察到,物品完全冰冻结实后,才可进行冷冻干燥的实验,把物品迅速移动到冷冻干燥机托盘之内,以保证冷冻干燥效果。 主机与真空泵之间由绿色的真空管连接,连接处使用国际标准卡箍。这种卡箍为了有效防止空气的泄漏,在卡箍内特被设计了一只密封橡胶圈。在防止漏气的方法上.涂抹适量真空脂在橡胶圈上,再用卡箍卡紧,能使连接处更紧密的贴合在一起。如果没有卡紧卡箍,就会造成空气泄漏,导致在抽取真空的时候仪表盘显示数显值大于20pa,此时就应该检查真空泵以及冷冻干燥机玻璃罩的气密性。 冷冻干燥机主机的右侧板上设有两个电源插座,一个将真空泵的电源线连接上主机,再将第二个冷冻干燥机上的总电源插上电源。 真空泵运转前必须检查是否加入真空泵油,否则不能正常运行。油面不得低于油镜的中线,真空泵刚开始时使用时有比较强烈的抖动,慢慢的会变的平稳。 如果气密性不好,应该在冷阱上方的密封橡胶圈涂抹一些真空脂,将有机玻璃罩轻旋在橡胶圈上,在打开真空泵测试其气密性。以确保气封闭的完整。