呕吐毒素固相净化柱

大家在用免疫亲和柱-高效液相色谱法测定黄曲霉毒素和呕吐毒素等真菌毒素时，有没有一些技术要点可以一起分析下，比如前处理过程、净化过程等。新人刚接触这块，希望大家能多指导，十分感谢！

解释毒性效应呕吐毒素（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。呕吐毒素的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。强制标准研究表明猪对呕吐毒素很敏感，当呕吐毒素含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对呕吐毒素的敏感性各不相同。研究表明呕吐毒素会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。因此，精确测定可能含有呕吐毒素的食物和食品就现得十分重要。美国FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了呕吐毒素含量的强制标准。建议限量美国食品和药品管理局已经颁布的呕吐毒素建议限量如图示“建议限量”。概述首次分离脱氧雪腐镰刀菌烯醇主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。DON的主要产生菌是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)，据报道也有其它一些镰刀菌可产生。DON于1972年由日本的Morooka等首次分离，同年，Yoshizawa等阐明了这种新的真菌毒素的结构，并将其命名为4-deoxynivalenol(DON)。细胞毒性DON广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外，它还常与其它的霉卤毒素如黄曲霉毒素共同污染农作物，进入人体后可以相互影响。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关，对人类及动物的健康构成威胁。DON属于剧毒或中等毒物，研究表明，DON在体内可能有一定的蓄积，但无特殊的靶器官，具有很强的细胞毒性。人畜摄入了被DON污染的食物／饲料后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡，但不同的动物对DON的敏感程度不一，猪是最敏感的动物。研究表明，DON可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物中DON的限量标准为1．0mg／kg。理化性质DON的化学名为3a，7a，l5一三羟基一l2，l3一环氧单端孢酶一9一烯I8酮，是一种B型单端孢酶烯族化合物，为一种倍半烯衍生物。分子量为296．3，分子式为C15H20O6，结晶为无色针状，熔点为l5l～153℃，α，β一不饱和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。但此紫外吸收与其它许多物质紫外吸收相重叠，并非特征性的。DON易溶于水和极性溶剂甲醇、乙醇、乙腈、丙酮及乙酸乙酯，但不溶于正己烷和乙醚。1988年Shepherd和Gilbert证实DON在有机溶剂中稳定，因此乙酸乙酯和乙腈是最适合的溶剂，长期储存更是如此。DON耐热、耐压，弱酸中不分解，加碱及高压处理可以破坏其部分毒力。DON的耐藏力也很强。据报道病麦经4年的贮藏，其中的DON仍能保留原有的毒性。检测DON的污染常出现于小麦、大麦、玉米和饲料中，因此绝大部分DON检测方法是针对这些物质，而分析谷物及饲料中的DON并非易事，许多因素必须给以良好控制。例如要从大量的原始材料中抽取适当的样品，适当地储备、处理以及恰当地从样品中抽小样。原始材料可能存在的不均一性和在储备、分装过程中可能出现的污染物使分析进一步复杂化；另一方面，分析过程中需要估计精确度、精密性、最低检出限以确保检测得出的数据能具有代表性，尽可能把分析错误减到最