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细胞培养是一项非常重要的实验技术,已经成为生物制药、生命科学、临床移植等领域*的一种研究方式。细胞培养必须借助细胞耗材方能达到细胞生长所需的条件,细胞培养瓶和培养皿是常见的两大类,那么这两种耗材有什么区别呢? 细胞培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞,瓶口较小,细胞不易被污染。细胞培养皿适合在各种实验中选用,临时培养。二者的区别在于安全系数的高低和培养细胞数量的多少。以细胞为载体或者对象的实验用培养皿比较好,因为用的量比较少,节约细胞,而且培养皿比较方便做对照实验,但是培养皿开口较大,相对更容易污染,所以操作时更要小心。 组织块原代培养或容易被污染的细胞培养时用培养瓶,长出的细胞传代后就可以依个人喜好而定,细胞培养瓶的面积较大,所以需要大量扩增细胞的时候可以用培养瓶。 细胞培养瓶和培养皿都是实验室里面用于微生物或细胞培养的容器,具体选用哪种耗材要根据实验的具体需求而定,还要考虑到细胞的培养方式,是悬浮培养还是贴壁培养,合适的耗材是实验成功的基础。
从大小来讲,细胞培养瓶约可分为约600ml,250ml,50ml和25ml的,一般都经过表面改性处理,适合细胞贴壁和生长。600ml 、300ml的多用于大规模培养时用(如单克隆细胞的培养等),50ml的多用于一般性细胞实验用(一般性的传代,保存细胞,为实验提供细胞等),25ml一般是用来复苏细胞或细胞较少时的培养,还有做原代细胞时也可以做多瓶而避免交叉污染。当然还有其他如圆形的等,都可根据个人爱好和实验需要自己选择。 根据细胞培养瓶制作材料的不同,也有玻璃和塑料之分,这里谈一点自己的浅见(欢迎不同意见的战友拍砖)。不同的细胞对胰酶的敏感度不一样,所以在实验中我们常常会遇到一些细胞消化半天也没有起色,导致细胞状态不断下滑,直至最后的死亡以至于实验进展的不顺利。当然,有时候是可以通过加一些EDTA等来增强胰酶的能力,或者提高胰酶的浓度来实现,在培养一些细胞过程中,我发现,一些细胞对玻璃和塑料制品粘附能力不同,如RAW264.7,平滑肌细胞等,在转换培养瓶之后,可以发现好消化了很多,并且在回到原制品的培养瓶时不会改变它的贴壁能力。这里希望有经验的战友可以分享你们的经验。 关于培养板的购买其实我也没有什么经验,想说的就是要尽量避免购买国产的培养板,国产的一些培养瓶还可以,但是培养板我们买过很多国产的,确实效果不是很好,细胞在里面基本上长的非常非常磕碜。所以经费富余的情况下,这些东西能买进口的就买吧。大公司的基本都可以买,BD,Corning等等。这些东西原则上是一次性的,但是我们大部分实验室根本不可能做到,其实泡酸,洗干净再用也没问题,毕竟我们没有老外那么富足的经费,所以我们就累点吧,多做点体力活锻炼一下身体吧。滴管其实也没什么好说的,国产的就足够了。要说的是图中我比较喜欢用C类的滴管,原因就是塞上棉花后吹打细胞不会怕棉花湿掉而引起污染,而且用完棉花也方便取出,便于下次再用。
注意事项: 1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。2.安装蔡式滤器时通常使用孔径 0.45 微米 和 0.22 微米滤膜各一张,放置位置为 0.45 的位于 0.22 微米的滤膜上方,并且要特别注意滤膜光面朝上。 3.配制 RPMI1640 培养基时因为还要加入小牛血清,而小牛血清略偏酸性,为了保证培养液 PH 值最终为 7.2 ,可在配制时调 PH 至 7.4 。 细胞培养的一般过程 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试,具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。R 理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置 4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。 三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的 PH是否太酸或太碱(由酚红指示剂指示),此外对培养温度和 CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期(数小时到数十天不等),在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养,将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代,而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质,也可能仅有不死性(Immortality)而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。四、冻存及复苏为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度?-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入 37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。