快速中压纯化色谱

01 摘要碳水化合物化合物可利用 RediSep Gold Amine 色谱柱结合蒸发光散射检测（ELSD）进行简便的纯化。该色谱柱采用亲水相互作用液相色谱（HILIC）梯度洗脱法，以乙腈或丙酮与水的梯度进行操作。将待纯化的样品溶解于 DMSO 中，不仅允许大量样品加载，同时还能保持良好的分辨率。02 背景碳水化合物通常采用氨基柱进行分析，该方法具有良好的分辨率。这种分析方法一般使用乙腈和水作为流动相，样品通常溶解在水中。由于样品注射量较小，样品有机会吸附在固定相上。在制备色谱中，相对于色谱柱尺寸而言，样品负载和注射体积要大得多，因此将样品溶于水中注射可以防止碳水化合物吸附在柱子上，导致它们在空隙处洗脱。干法加载样品到固体装载小柱上通常用于快速色谱，但用户需要自己用氨基介质填充他们的小柱。样品仍然溶解在水中进行加载，这需要很长时间才能在运行样品前蒸发。二甲基亚砜（DMSO）常用于反相色谱的样品溶解，因为它能溶解大多数化合物。DMSO 能够溶解碳水化合物，但在 HILIC 中是一种弱溶剂，因此它允许样品吸附在柱子上。在使用氨基柱时，DMSO 在洗脱早期被洗脱；然而，在采用非氨基介质的其他 HILIC 运行中，它可能在梯度洗脱的后期才被洗脱。03 结果与讨论虽然亲水相互作用液相色谱（HILIC）属于正相色谱，但它使用的溶剂通常适用于反相色谱，因此需要根据表 1 中的设置调整蒸发光散射检测器（ELSD）的参数，以保持基线稳定的同时维持灵敏度。表1. 纯化碳水化合物的蒸发光散射检测器（ELSD）设置。ELSD控制设置值Spray Chamber20℃Drift Tube60℃Gain1SensitivityHigh样品均溶解于 DMSO 中。如有必要，将样品在热水浴中加热以促进溶解。使用 PeakTrak Flash Focus 梯度生成器在系统上开发方法。运行了一个亻贞查梯度以验证样品能够被洗脱，并证明化合物之间有足够的分辨率以实现成功的纯化。所需化合物的保留用于计算聚焦梯度的溶剂组成。所有运行均使用 RediSep Gold 氨基柱。运行完成后，用2-丙醇洗涤并储存柱子，2-丙醇与有机溶剂混溶，可实现较少极性化合物的快速纯化。第一个实例使用了核糖和葡萄糖。亻贞查梯度和聚焦梯度都使用乙腈作为弱溶剂。亻贞查运行只用了少量几毫克，并且为了提高这个小样品负载的灵敏度，ELSD 增益被调高到 3。第二个洗脱峰用于聚焦梯度；计算梯度后，ELSD 增益被重置为 1 以保持 ELSD 响应在量程内。总样品负载为 100 毫克，使用 50 克 RediSep Gold Amine 柱。果糖和蔗糖通常一起出现在样品中。图 2 展示了从葡萄糖杂质中纯化果糖的过程。该混合物以与核糖-葡萄糖样品类似的方式运行，梯度聚焦于葡萄糖。在约 1.8 柱体积（CV）出现的峰是用于溶解样品的 DMSO。图1. 核糖和葡萄糖在 5.5 克 RediSep Gold Amine 柱上运行亻贞查方法（上图），并聚焦到 50 克 RediSep Gold 胺柱上。样品总负载量为核糖和葡萄糖各 50 毫克。聚焦梯度中约 1.8 柱体积处的小峰是 DMSO。图2. 使用 RediSep Gold Amine 柱和乙腈/水梯度从蔗糖中纯化不纯的果糖。04 丙酮作为弱溶剂丙酮也是 HILIC 的弱溶剂，可以替代乙腈使用。尽管醇类可以用于 HILIC，但这些溶剂对于在胺柱上纯化碳水化合物来说太强了。使用丙酮纯化了一个果糖和葡萄糖的样品。该混合物的纯化方式与之前的例子相似，除了亻贞查梯度使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold Amine 柱，因为 PeakTrak 允许使用任何尺寸的 Teledyne ISCO 柱进行亻贞查运行。聚焦梯度使用了一根 50 克的 RediSep Gold Amine 柱，但计算出的梯度需要较低的水浓度来纯化葡萄糖，这表明对于这些化合物，丙酮是比乙腈更强的溶剂。图3. 使用丙酮/水梯度纯化的果糖和蔗糖。亻贞查运行使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold 胺柱。05 结论使用 NextGen 300+ 配备蒸发光散射检测器（ELSD）和 RediSep Gold 胺柱，通过 HILIC 梯度方法可以高效纯化碳水化合物。使用 DMSO 溶解样品既保证了高样品负载量，又保持了良好的分辨率。PeakTrak Flash Focus 梯度生成器使得 Teledyne ISCO 制造的所有色谱柱都能快速开发和放大方法。

p　　strong仪器信息网讯/strong 2019年4月3日，艾杰尔-飞诺美第1000台CHEETAH系列中压纯化色谱交付仪式在宁波康龙化成工厂举行。康龙化成副总裁魏忠勇、艾杰尔-飞诺美中国区总经理施扬等双方高层以及相关员工出席活动。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/6a8f28b0-fa14-48bd-9c7e-ef26a646e53d.jpg" style="" title="1.jpg"//pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/5a4d89f6-9db1-4927-87b7-231e9a2cdbed.jpg" style="" title="2.jpg"//pp style="text-align: center "　　交付仪式现场/pp　　艾杰尔的CHEETAH中压快速纯化制备色谱诞生于2009年，型号先后更新为CHEETAH MP100、CHEETAH MP200等 2018年推出了该系列的第二代产品CHEETAH II型，至今已近十年，纯化仪器数量也达到了1000台。/pp　　第1000台CHEETAH的用户是康龙化成，即是巧合也是必然。艾杰尔-飞诺美与康龙化成的合作源于色谱耗材。其关于仪器设备的合作开始于2010年，也就是CHEETAH上市的时间。至今，康龙化成拥有的CHEETAH仪器设备数量已经将近400台，占整个公司纯化设备的50%。而且据介绍，这些仪器是在10年间陆续购入的。当编辑问到康龙化成副总裁魏忠勇为何康龙化成会一直采购CHEETAH时，魏忠勇提到了三点，一是药物研发非常需要中高压纯化色谱；二是艾杰尔-飞诺美的纯化色谱仪器非常稳定，及长期稳定性好；最后一点即是艾杰尔-飞诺美的售后服务及时、质量好。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/b3a01786-1f95-4460-8155-5cc38270d7bf.jpg" title="3.jpg" alt="3.jpg"//pp style="text-align: center "　　艾杰尔-飞诺美中国区总经理施扬/pp　　艾杰尔成立于2007年，是一家专业从事色谱分离材料和自动化设备的高新技术企业。2014年，其生产的CHEETAH MP 200中压制备色谱入选国产好仪器(仪器信息网联合中国仪器仪表行业协会组织的项目)。2016年，艾杰尔与美国Phenomenex公司先后加入丹纳赫集团。2018年Phenomenex与艾杰尔联合。2019年3月新的LOGO在中国范围内正式启用，意味着，艾杰尔-飞诺美全面贯彻并推广Agela(艾杰尔)与Phenomenex(飞诺美)双品牌发展策略，从而全面打造双品牌“并驾齐驱”的市场格局。施扬说到，今天的活动是新LOGO的第一次亮相。今后，艾杰尔-飞诺美提供给用户的不仅仅是色谱耗材，而是从前处理、分析、制备全方位的解决方案。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/cadba6bc-d979-4d12-8520-95af5ee65837.jpg" style="" title="4.jpg"//pp style="text-align: center "艾杰尔-飞诺美推出双品牌LOGO标识/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/cca7e77f-51ca-4124-bbc3-2b25eb5951a0.jpg" style="" title="5.jpg"//pp style="text-align: center "　　康龙化成副总裁魏忠勇/pp　　康龙化成新药技术股份有限公司成立于2003年，是国际化的生命科学研发服务企业。其主营业务涉及新药研发临床前的全流程，包括化学、生物、药物代谢及药代动力学、药理、毒理等各个领域，目前在全球员工总人数已达6000多人。康龙化成于2014年在宁波杭州湾新区投资建设康龙化成生命科技产业园，此次新购入的CHEETAH II即是在这里交付使用的。魏忠勇谈到，康龙化成与艾杰尔-飞诺美这些年来共同发展，都取得了非常快速的发展成果，未来也将携手发展。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/db09bd28-e623-4a28-ab92-eeec326854c0.jpg" title="6.jpg" alt="6.jpg"//pp style="text-align: center "　　艾杰尔-飞诺美中国区销售总监牛玉峰主持活动span style="text-align: justify "　　/span/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/85dace24-5d2d-41e1-9109-057ffde23b66.jpg" title="7.jpg" alt="7.jpg"//pp style="text-align: center "艾杰尔-飞诺美服务团队/pp　　就像康龙化成副总裁魏忠勇说到的，康龙化成一直采购CHEETAH的原因之一就是艾杰尔-飞诺美的售后服务好。这次的交付仪式上，艾杰尔-飞诺美服务团队也“隆重”亮相。艾杰尔-飞诺美非常重视应用方法的开发，目前公司已拥有国际水准的色谱分离材料的自主研发、应用和生产队伍，拥有装备精良的分析和纯化应用服务实验室，并积累了相当多的分离纯化应用的宝贵经验。/pp　　而对于具有重要意义的第1000台CHEETAH中压纯化色谱仪器用户，艾杰尔-飞诺美服务团队成员纷纷保证将提供更及时、高质量的售后服务。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/8f57c43f-be19-46b3-8e2a-1d3691f88f1c.jpg" style="" title="8.jpg"//pp style="text-align: center "双方领导共同揭幕交接牌/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/b1f233bd-2679-48ec-b961-4b80c365b6aa.jpg" style="" title="9.jpg"//pp style="text-align: center "双方领导切蛋糕，答谢会正式开始/pp style="text-align: center "img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/9b5cf754-7039-4853-85f7-01e26db5fb39.jpg" style="" title="10.jpg"//ppspan style="text-align: justify "/span/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/dc09c0b8-b573-44d5-b916-a0897f96f1f1.jpg" title="IMG_1218_meitu_1.jpg" alt="IMG_1218_meitu_1.jpg"//pp style="text-align: center "span style="text-align: justify "用户体验/span/pp　　本次交接的第1000台中压纯化色谱于2018年10月上市，已入围仪器信息网2018年度科学仪器行业优秀新产品名单。该新品具有很多功能，如控制单元通过无线网络与主机连接，可实现远程控制，实验人员可以坐在隔壁办公室操作实验室内的仪器，免受化学试剂对身体的伤害 软件具有数据权限管理功能，可设计不同账户权限级别，登录后获得相应权限，保障实验数据安全 使用PDA检测器实现全波长扫描，创新地对扫描的峰给出一个光谱角度的纯度值。/p

背景近年来，随着生活水平的提高，精油在生活中使用越来越多。精油具有特殊的香气，可应用于身体保健、美容护肤、情绪调节等方面，正在成为现代人追求健康生活的新趋势。精油中的许多香气成分是手性化合物，手性化合物的对映体之间闻起来的味道并不相同，对映体的比例变化会直接影响到精油的品质和使用感受。因此在精油开发过程中对映体的比例确认尤为重要，本文将介绍一种使用Nexera UC快速分离与高回收率制备薰衣草精油中芳樟醇对映体的方法。芳樟醇对映体的分离使用岛津Nexera UC手性筛查系统对薰衣草精油中芳樟醇对映体进行分离。经过条件优化，最终仅需2.5分钟即可成功分离出芳樟醇的对映体。分析条件和结果如下：分析条件薰衣草精油中芳樟醇对映体的色谱图芳樟醇对映体的纯化制备岛津Nexera UC超临界流体色谱仪高效可靠，检测灵敏，搭配灵活，满足各类应用要求。上述Nexera UC手性筛选系统通过连接馏分收集器升级为分析级馏分收集系统，一机兼具分析与纯化制备功能。使用与分析时相同的色谱条件，对市售的芳樟醇样品溶液（20g/L）进行纯化制备，结果显示，升级后的Nexera UC分析级馏分收集系统顺利纯化制备（+）-芳樟醇和（-）-芳樟醇对映体，搭配岛津LotusStream气液分离器*，样品回收率均超97%。芳樟醇对映体的制备色谱图芳樟醇对映体的回收率薰衣草精油中芳樟醇对映体的纯化制备市售的薰衣草精油经过简单稀释处理，使用上述分析条件和系统进行纯化制备，结果显示Nexera UC分析级馏分收集系统顺利制备出薰衣草精油中的芳樟醇对映体；对收集到的芳樟醇对映体馏分进行进一步分析发现，薰衣草精油中（+）-芳樟醇和（-）-芳樟醇对映体被有效分离纯化，对映体的馏分纯度均超过99%。薰衣草精油的制备色谱图芳樟醇对映体馏分再分析的色谱图芳樟醇对映体馏分的纯度（峰值检测：0.5-4.0分钟）结论本文介绍了使用Nexera UC对薰衣草精油中香气成分芳樟醇分离纯化制备的方法，该方法可快速准确地分离芳樟醇的对映体，馏分回收率高，制备纯度高。Nexera UC分析级馏分收集系统可用于从分析到纯化制备的应用，有效提高在开发过程中手性化合物分离和纯化制备的整体效率。实验涉及的设备Nexera UC手性筛选系统Nexera UC分析级馏分收集系统本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。