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http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/12/201612271543_01_676_3.jpg由于 ADF法和NDF法不能测定食品中的可溶性膳食纤维含量,人们根据Trowell等对膳食纤维的定义模仿食物在消化道的消化过程提出了酶法分析。样品分别利用α-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖苷酶进行酶解消化,除去蛋白质和淀粉。在ASP和Prosky等来自29个国家43个实验室的学者的共同努力下,提出了比较完整的酶 - 重量法,并被 AOAC、AACC 等权威机构采纳为AOAC 法和 AACC 法并进一步成为 F D A 和 WHO/FAO等承认的国际通用方法。该方法的最大优点在于能同时分析出样品中可溶性与不溶性膳食纤维的含量,且分析设备少。但过程比较复杂,影响因素多,操作不方便且成本高,后又被Lee&Prosky等改良成为操作比较简单精确的方法,该方法被推荐为 AOAC/AACC 共同的分析测定方法。酶法分析膳食纤维除酶重量法外,比较常用的还有以Englyst法和Uppsala为主的酶一化学法。该法是用淀粉酶除去淀粉,再用酸把膳食纤维水解成单糖,然后用比色法、GLC 或 HPLC 测定单糖组成和含量,该法能快速、准确地测定总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维,并能确定组成膳食纤维的单糖成分,为分析不同膳食纤维生理功能提供了有效的手段。但是,该法是建立在把膳食纤维定义为非淀粉多糖的基础上,因而不能测定木质素、多酚化合物、纤维醇等膳食纤维,所以该法只在英国等少数欧盟国家使用并逐渐被酶一重量法代替。
首先,我们要明确实验的目的和原理。酶重量法主要是通过酶解去除样品中的蛋白质和淀粉等非纤维成分,然后通过称重来计算膳食纤维的含量。简单来说,就是通过酶的作用,把膳食纤维从食品中分离出来,再称重量。 接下来,是样品的制备。取约1克的样品,加入75%的乙醇中,振荡30分钟,然后离心15分钟,弃去上清液。这个步骤需要重复一次,确保样品中的可溶性糖分和其他非纤维物质被充分去除。晾干沉淀后,我们就可以进行下一步了。 然后,是酶解处理。这一步很关键,我们要加入纤维素酶和皮二糖酶,让它们在适宜的温度和pH值下发挥作用,分解样品中的非纤维成分。具体来说,先将样品沉淀加入含有纤维素酶和醋酸钠的烧杯中,搅拌均匀,在室温下放置20分钟。之后,再加入皮二糖酶,继续搅拌均匀,室温下放置至少2小时。 酶解完成后,我们就要进行沉淀分离了。将酶解后的样品倒入锥形瓶中,上层液为可溶性纤维,下层沉淀为不可溶性纤维。这里要注意,一定要确保分离彻底,避免可溶性纤维和不可溶性纤维的交叉污染。 最后,是干燥称重。将分离得到的不可溶性纤维沉淀放入钛纸中,进行干燥,直至恒重。然后,称重得到不可溶性纤维含量。总膳食纤维含量则是不可溶性纤维与可溶性纤维含量之和。 在整个实验过程中,有几个注意事项需要特别关注。首先是样品的重复性,确保每次操作的平行性,以提高结果的准确性。其次是可溶性纤维的完全沉淀,避免其在干燥过程中损失。此外,酶解过程中的温度和时间的控制也非常关键,它们会直接影响实验结果。
最近在网上看到膳食纤维酶功能非常多,提到酶就想到的是蛋白质,可膳食纤维酶到底是什么,纤维素酶(滤纸酶、羧甲基纤维素酶。。。),到底如何使用,主要成分又是什么,感觉很奇怪,各位讨论一下吧!