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第十课 液相色谱仪-检测系统 检测系统高效液相色谱的检测器很多,最常用的有紫外检测器、示 差折光检测器和荧光检测器等。 (1)紫外检测器紫外检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器,适用有紫 外吸收物质的检测。在进 行高效液相色谱分析的样品中, 约有80%的样品可以使用这种检测器。紫外检测器的工作 原理如下:由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光, 经过透镜和遮光板变成两束平行光,无样品通过时,参比 池和样品池通过的光强度相等,光电管输出相同,无信号 产生;有样品通过时,由于样品对光的吸收,参比池和样 品池通过的光强度不相等,有信号产生。根据朗伯—比尔 定律,样品浓度越大,产生的信号越大, 这种检测器灵敏 度高,检测下限约为 10(-10) g/ml,而且线性范围广, 对温度和流速不敏感,适于进行梯度洗脱。 (2)示差折光检测器示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来进行组 分检测的。凡是具有与流动 相折射率不同的组分,均可 以使用这种 检测器。如果流动相选择适当,可以检测所 有的样品组分。示差折光检测器分为反射式和沂射式两种。 反射式示差折光检测器是根据下述原理制成的:光在两种 不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率 成正比。如果入射角固定,光线反射百分率仅与这两种物 质的沂射率成正比。光通过仅有流动相的参比池时,由于 流动相组成不变,故其折射率是固定的;光通过工作池时 ,由于存在待测组分而使折射串改变,从而引起光强度的 变化,测量光强度的变化,即可测出该组分浓度的变化。 偏转式示差折光检测器是根据下述原理:当一束光透过折 射率不同的两种物质时,此光束会发生一定程度的偏转, 其偏转程度正比于两物质折射率之差。 示差折光检测器 的优点是通用性强,操作简便;缺点是灵敏度低,最小检 出限约为 10(-7)g/ml ,不能做痕量分析。此外,由于 洗脱液组成的变化会使折射率变化很大,因此,这种检测 器也不适用于梯度洗脱。 (3)荧光检测器物质的分子或原子经光照射后,有些电子被激发至较高的能 级,这些电子从高能级 跃至低能级时,物质会发出比入射光 波长较 长的光,这种光称为荧光。在其他条件一定的情况 下,荧光强度与物质的浓度成正比。许多有机化合物具有天 然荧光活性,另外,有些化合物可以利用柱后反应法或柱前 反应法加入荧光化试剂,使其转化为具有荧光活性的衍生物 。在紫外光激发下,荧光活性物质产生荧光,由光电倍增管 转变为电信号。 荧光检测器是一种选择性检测器,它适合于 稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质等荧光物质的测 定。这种检测器灵敏度非常高,其检出限可达10(-12)_10 (-13)g/ml,比紫外检测器高2—3个数量级,适合于痕量分析 。而且可以用于梯度洗脱。其缺点是适用范围有一定的局限性。
在莱克多巴胺检测过程中,发现配置好的标准品隔天检测,响应度降低10倍左右,经全波段光谱图认证,莱克多巴胺可能被分解为其它种类的物质了。还请各位帮忙分享自己在检测莱克多巴胺时的情况,是否真会被分解。使用的仪器为液相色谱仪。
很多人说,液相色谱已经无法出研究成果很多人说,液相的检测方法已经很成熟很多人说,液相色谱还是占据绝对的地位你认为呢?说说液相色谱的检测前沿,你们都在检测些什么?