红外法制片方法

导读显微镜玻片做不好，哎呀，心痛！怎么办？实验技能小课堂开课了！！✨今天小编给大家总结了显微镜玻片的不同制作方法，希望能和大家一起渡过难关。 01涂片法 涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织等。涂片时应注意：（1）载玻片要持平。（2）涂层须均匀且薄。（3）固定，可用化学固定剂或干燥法（细菌）固定。（4）染色，染色液要盖住全部涂面。（5）冲洗，用吸水纸吸干或烤干。（6）封片。 02压片法 将生物材料置于载玻片和盖片之间，施加一定压力，将组织细胞压散的一种制片方法，一般过程：（1）取材。（2）固定：取材后立即压片观察，可不作单独固定处理；取材后不立即视察，可将材料用固定液固定。（3）离析：对细胞团用水解分离液处理。（4）染色。（5）压片：将材料放在载玻片上，加一滴清水或染液，盖上盖玻片用拇指轻轻压片。（6）观察。 03切片法 观察机体各部的微细结构时常用，其中以石蜡切片最为常见。其制备程序大致如下:（1）取材与固定:取得新鲜材料后，切成适当的小块立即投入固定剂中进行固定。（2）脱水、透明与包埋:把固定好的材料的水分脱掉，经透明处理后，再浸入已融化的石蜡中进行浸透、包埋。（3）切片与染色:用切片机切成薄片，贴于载玻片上。脱蜡后进行染色。（4）封固:滴加中性树胶和盖片进行封固备用。

常用的微生物染色方法有哪些？一、简单染色不同的细菌，或者由于观察者所侧重观察的内容不同一，所以所使用的染料也有差异，但是简单染色的方法是一样的。先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上菌膜区域，以覆盖菌膜为准。按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤(见图5-2)。zuihou得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。二、芽孢染色法芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌能产生内孢子，这些孢子耐高温、干旱及有毒化学试剂。内孢子还能抵制细菌染色液的进入，在革兰氏染色法涂片染色时，革兰氏阳性菌的芽孢呈现无色。然而，芽孢一旦着色后就很难脱色。虽然芽孢通常可在革兰氏染色片中看到(芽孢由于不易让染料进入多呈现无色),但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，更便于观察。其实验的操作方法与革兰氏染色类似。主要的芽孢染色法有以下两种。(一)孔雀绿染色法(1)将生有芽孢的斜而菌苔按革兰氏染色法涂片后，用饱和孔雀绿水溶液(约为7.6%)染10 min。(2)用自来水冲洗。(3)用0.5%番红液复染30%.(4)水洗，吸干。(5)镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈绿色。(二) 石炭酸复红染色法(1)按常规涂片。(2)滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。(3)涂片冷却后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。(4)彻底水洗。(5)用吕氏美蓝复染2 min -3 min。 (6)水洗、吸干。(7)镜检：镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。具体实验时，在对一些特殊芽孢染色时，需要对染色液和复染液进行修改。三、鞭毛染色鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，直径一般为10nm~20 nm,超出了光学显微镜的观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到鞭毛。通过使用特殊的染色技术，可以将染色液附加到鞭毛的周围，增加它的直径，从而能够在光学显微镜下观察到鞭毛，而且能检测鞭毛在细菌中的分布。尤其是鞭毛染色可用于区分假单胞菌科的一些有两极鞭毛的细菌和肠杆菌科有周身鞭毛的细菌(在运动时)。鞭毛十分细小，很容易从细菌上脱离，所以要得到非常满意的鞭毛染色玻片十分困难。另外，很多染色方法会产生沉淀物，这又使得观察鞭毛十分困难。鞭毛染色一般分为两类：一种是银盐法，使银在鞭毛上堆积；另一种是使用复红沉积在鞭毛上。(一)银盐沉积法(改进的Fontana方法)应使用绝对干净(无油脂)的载玻片进行染色，zuihao是新的无油载玻片。用过的载玻片要在酪酸洗液中浸泡，并用蒸馏水冲洗干净后方可再次使用。细菌在琼脂斜面上，比zuijia生长温度低3℃~5℃的温度下培养，可在斜面上加1滴~2滴灭菌的生理盐水保持湿度。(1)将载玻片在火焰上快速灼烧5s,放在染色架上冷却，用蜡笔分成两个区域(用镊子夹住载玻片的一端)。(2)用移液管或巴斯德移液管移取2mL无菌水加入到幼龄(通常为18 h)、生长活跃的斜面菌株中，慢慢振荡并旋转试管使菌株悬浮。建议尽量避免使用接种环。然后转移到干净的试管中，通过悬滴试验检查菌体的运动性。用无菌水将悬浮液稀释至略有浑浊为止。放入20 ℃ -30 ℃培养箱中培养30 min,然后移取一满环悬浮液加在已冷却的载玻片一端。倾斜载玻片让液滴流到蜡笔画的中心线。在空气中自然干燥，不要加热玻片。(3)用媒染色剂媒染5 min。(4)慢慢用蒸馏水充分漂洗掉所有的媒染液。(5)用热的Fontana银液覆盖，染色5 min,每隔1 min更换1次染色液( Fontana银液在沸水浴中加热)。细菌涂层的每一部分都始终要浸在染色液中，不能裸露。(6)用水冲洗，在空气中晾干，镜检。(二) Leifson替代染色法下述Leifson鞭毛染色法可以代替上述方法的(3) ~(6)。(1)滴加1 ml的Leifson鞭毛染色液，注意不要使染色液干燥，直到玻片上形成细微的铁锈色沉淀(约10 min) 。(2)慢慢地用蒸馏水充分冲洗干净。(3)用1%的亚甲基蓝复染5 min ~10 min。(4)用水洗净，空气中干燥，镜检。没有复染时，细胞和鞭毛都呈现桃红色，复染后，细胞染成蓝色，鞭毛染成红色。实验中需要注意的是鞭毛很容易脱落，若观察时视野中大多为周身鞭毛细胞，说明该菌是周毛菌，但若观察到一个明显的极端鞭毛细胞时，并不一定说明不是周毛菌。注意事项：(1)适宜的培养基、温度和通气条件下，以短期内多次连续接种培养的幼龄菌种鞭毛情况zuihao。因此，用于鞭毛染色的菌种常常用幼龄菌，菌龄老化或某些培养条件变化常导致鞭毛脱落或丧失。(2)玻片应清洁无油污。鞭毛非常纤细且容易脱落，故操作过程动作要轻。(3)染色法的染料须当日配制， 4 h内效果zuihao。所以鞭毛染色液zuihao现用现配。四、荚膜染色荚膜是某些细菌在新陈代谢过程中形成的，分泌于细胞壁外的一层胶状黏液性物质，主要化学成分是多糖类物质。荚膜的折光性低，易溶于水，与染料亲和力低，但荚膜的通透性比较好，某些染料可透过荚膜而使菌体着色。因此染色后在菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即为荚膜。一般采用负染色的方法，使背景与菌体之间形成一透明区，将菌体衬托出来便于观察分辨，故又称衬托法染色。因荚膜薄，且易变形，所以不能用加热法固定。具体操作步骤(见图5-8)。(一)制片加1滴6%葡萄糖水溶液于载玻片一端，无菌操作，挑取细菌斜面上培养72 h左右的胶质芽孢杆菌与其混合。(二)推片法制片加1滴墨汁充分混匀。用推片法制片，将菌液铺成薄层， 自然干燥。(三)固定滴加1滴~2滴无水乙醇覆盖涂片，固定1 min, 自然干燥；也可以不加处理， 自然干燥。注意：不能用火加热干燥。(四)结晶紫染色在已自然晾干的涂面上，滴加1%结晶紫染色液染色。(五)冲洗2 min后，以20%硫酸铜冲洗数次。再用自来水冲洗1次。(六)拭干水分后镜检用擦镜纸拭干水分后镜检。有荚膜的菌菌体呈紫色，背景灰黑色，荚膜不着色呈无色透明圈。无荚膜的菌，由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能出现一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜，荚膜不着色的部分宽。五、死活染色在显微镜下活细胞细胞膜完整、立体感强，细胞质透明度好，颗粒状物质少；死细胞膜破裂，无立体感，细胞通透性差，有颗粒状物质、空泡。染色排除法是生物研究中判断细胞活性的一种常用方法，简便，易于操作，实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。原理：因为活细胞的细胞膜具有选择透过性，细胞不需要的物质通常不进入细胞，染色剂中如台盼蓝能进入死细胞，从而可以使死细胞染色。依此染色便可以判断细胞的活性。活细胞必须要通过控制物质进出细胞膜来保持内部生理环境的稳定性。细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。常见的细胞染料有：中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双乙酸酯等。台盼蓝染料正常情况下被活细胞拦在细胞膜外，只有细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞，从而与解体的DNA结合，使其着色，因此，活细胞一般不被台盼蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。通过显微镜观察很容易识别出死亡的染色细胞，并可用细胞计数板进行计数。用美蓝染色液可以对酵母菌细胞进行死活染色鉴别。美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。活的酵母因为新陈代谢不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞不染色。因此，用美蓝对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，蓝色的为死细胞。需要注意的是：一个活细胞的还原能力是有限的，必须严格控制染色的时间和染料的浓度。方法：取0.1%美蓝液一滴，滴在玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混匀。染色3 min ~5 min后，加盖片制成水浸标本片，即可镜检，这种方法也适用于细菌和霉菌。北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

摘要：奥豪斯化身跨界达人，跻身胶片复古潮儿！今天为你讲解奥豪斯与胶片电影那些事儿。 一部热映的《芳华》把一段被尘封的历史推到了我们面前，同时也把承载了那段岁月的八一电影制片厂推到了我们面前。 八一电影制片厂，在那些岁月里，拍摄了诸多经典的、有着时代烙印的电影。如《地道战》、《地雷战》、《南征北站》等。这些黑白色的经典影片，没有如今的数码技术，到底是怎么拍摄出来的呢？ 这里就不得不提到电影史上非常重要的——胶片。 过去的电影，都是由胶片拍摄。胶片分为35mm，70mm等不同规格，利用光化学原理呈像，是影像的底片。制作胶片电影是非常精细、精致且宏大的一项工程，从拍摄、冲洗、剪辑、到成片，流程复杂，工艺精细。 (胶片摄影机快门曝光示意图） 首先讲几个关于胶片电影的冷知识： 1. 在2012年之前，国内还是胶片电影的天下，此后数字电影制作技术逐渐蓬勃，我们能看到的胶片电影越来越少了。 2. 手机美图软件的「菲林」效果其实就是胶片感。 3. 2017年最棒的一部胶片电影是由克里斯托弗诺兰执导的《敦刻尔克》，该片3/4为35mm胶片、70mm胶片、IMAX70mm胶片拍摄，画质细腻逼真。 4. 在胶片电影时代，一部90分钟长的电影要用4万米的胶卷，全国几百个院线同时放映，需要同数量的拷贝胶卷，合起来要几千万米。 5. 十几二十年前盗版电影很盛行，知道为什么吗？请看上一条。 6. 有电影人说：不是35mm胶卷（及以上）拍的电影，就是让观众在电影院里看电视剧。（近年来国内电视剧多采用数字拍摄，以节省成本、方便剪辑。） 7. 很多国家保密档案和文化研究资料的底稿都是胶片存底的。所以胶片电影也许会消失，但胶片不会消失。 8. 全国的电影胶片工已经不足五十人。（注释1） 9. 全国关闭了很多胶片冲洗厂，但八一电影制片厂还保留着冲洗设备，用来冲洗、修复老电影胶片和国家档案的底片与正片。（注释2） 10. 八一电影制片厂胶片冲洗室在冲洗胶片之前，需要按要求配制各类定影液显影液，其中最重要的就是测试溶液的酸碱度，这一关键步骤正是用奥豪斯ST系列酸度计完成的。 纳尼，洗个照片还要酸度计？这个你就不懂了吧，容小编给你讲解讲解。 这要从胶片的成像开始讲起。我们所说的胶片一般是银盐感光胶片，以光化学原理成像的胶片是这样构成的。 所谓的「银盐」，是指卤素与金属银形成的化合物的总称，如氯化银、溴化银和碘化银。 氯化银微溶于水，它对波长很短的紫色区域及紫外线感光。 溴化银对蓝色区域光线感光。碘化银的作用重在增加感光范围。 如添加碘化银和溴化银的混合乳剂，感光范围能达到毫微米。 所以银盐的存在，是为了在短期曝光内，通过光化学反应，在胶片上留下影像。（注释3） 胶片电影制作的每一环节都非常重要，但在拍摄水平、胶片质量不变的条件下，最能影响最终成像效果的则是胶片冲洗环节。 在胶片电影称王的时代，胶片冲洗厂遍地开花、昼夜运转。每一次冲洗都需要配备多种类、大分量的显影液、定影液等，根据显影效果不同，显影液和定影液的配方比例也有很不同。其中最重要的是各化学试剂的配比量和化学试剂的酸碱值。 对于显影效果来说，酸度值越低，显影效果越差，若值越高，显影越快，反差也越大。一般情况下，配出的冲洗液pH 值固定在8.4-8.7之间，就能满足绝大多数显影效果。 同时，配比的溶液温度要保证在℃-20℃之间，以保证胶片的质量，因溶液温度过高，洗出的胶片会有雾感；溶液温度过低，胶片容易变脆、易断裂。 在这样配制大量冲洗液的要求下，值的准确性就显得尤为重要。到如今，大批量胶片冲洗液的配制需求已经很少了，但对胶片冲洗液的品质追求，依然是胶片爱好者及国家胶片档案资料保护、修复的基本要求。 作为与胶片电影有着深厚渊源的八一电影制片厂，决定采购可以满足快速、稳定、准确」的奥豪斯ST系列pH 计，以完成如今小批量、精确度要求高的国家档案类胶片冲洗、老电影胶片修复、存储等工作。 那么奥豪斯系列酸度计到底有什么出色之处呢？小编就选择其中一款——ST3100台式酸度计，给大家讲讲那些闪闪发亮的功能吧！ 1. 奥豪斯ST3100台式酸度计可达到0.01pH 的精度，可以满足更精确的冲洗液配制要求。 （精度可达到0.01pH） 2. 多次测试酸碱值实验中，最难判断的是电极状态好坏，但奥豪斯ST3100台式酸度计自带的电极状况表情提示符，通过「笑脸」、「哭脸」等简易表情，帮助操作人员在测试前快速判断电极状况，方便了配制操作。 3. 配制冲洗液的工作室空间有限，奥豪斯ST3100台式酸度计采用主机和电极分体式设计，操作起来非常灵活。 4. 奥豪斯ST3100台式酸度计有温度补偿功能和温度电极，即使暂时选择不带温度电极的酸度计，后续如果需要，也可以配备。同时还有缓冲液自动识别，对于常常要测溶液温度的冲洗液配制实验来说，这个设计非常有用。 5. 奥豪斯ST3100台式酸度计的按键与显示非常简单，不用说明书就可以自学自用。为了方便使用，还自带快速操作指南。 6. 奥豪斯ST3100台式酸度计还有三点校准，比两点校准的测试范围更广、操作更方便。 7. 奥豪斯ST3100台式酸度计自带背光显示，在光线昏暗、环境有限的情况下也可以清楚读数。 8. 奥豪斯ST3100台式酸度计还有自动终点功能。在测试完成之后，不需要人为判断读数再手动确定读数，仪器会自动进行读数，得到的测试结果更为准确。 得知奥豪斯系列台式酸度计可以在八一电影制片厂有用武之地，作为一名奥豪斯人，小编真的觉得很自豪啊。 胶片电影不是一种情怀，而是一颗匠心。百年奥豪斯仪器，也正是秉持着这样一份匠心来做每一款产品。奥豪斯系列台式酸度计能进入八一电影制片厂，能为越来越重要、专业的胶片冲洗事业发光发热，也算是「天作之合」吧！ 想要了解奥豪斯还能跨界哪些领域吗，请联系我们！ 参考文献：注释1-2：李晗. 电影胶片工的“迟暮时代”[Z].经济，2016年12月07日注释3：蒋懿龙.知其然知其所以然 胶片成分及原理解读.[Z]摄影之家,2015年9月14日