分光光度仪比色法原理

纳氏试剂分光光度比色法测定水中氨氮时，虽然步骤较为简单，但实验条件还是有一定的要求，任何一处细节出现偏差，都会对测量结果产生影响。下面结合我公司的氨氮测定仪 6b-50型（v9），对纳氏试剂分光光度法测定水中氨氮含量时影响测定准确度的因素和解决的办法进行了总结，与大家共同探讨。原理介绍纳氏试剂比色法是一种测定饮用水、地面水和废水中铵的方法。其原理是：以游离的氨或铵离子等形式存在的铵氮与纳氏试剂反应生成黄棕色络合物，该络合物的色度与铵氮的含量成正比，可用目视比色和分光光度法测定。目视比色法测定时，最低检出浓度为0.2mg/l，上限浓度为2 mg/l；分光光度法测定时，最低检出浓度为0.05 mg/l，上限浓度为2 mg/l。本方法已定为国家标准分析方法。 仪器准备 6B-50型（v9）氨氮测定仪 江苏盛奥华环保科技有限公司 影响因素1：实验用水及试剂的质量检验氨氮专用试剂主要包含两种：n1-100样 / n2-100样，我司提供的是固体粉末状试剂，需要用户自行加入100ml蒸馏水配置成液体试剂备用。配置过程中如有少量沉淀，去除即可。配置完成后避光、阴凉处或放置冰箱低温1-2度保存。试剂如果变色浑浊过期使用，实验数据是不准确的。因此试剂配置、存放、使用过程中都需要注意，避免造成不必要的麻烦。 影响因素2：实验环境氨是实验室最常用的易挥发性试剂，而氨氮的分析应在无氨的实验室环境中进行，室内不应含有扬尘、石油类及其它的氮化合物，严禁在使用含氨试剂（如测定总硬度：使用氨缓冲溶液）的实验室中做氨氮项目的分析，所使用的试剂、玻璃器皿等也要单独存放，避免交叉污染，影响试剂空白值、样品测定值。影响因素3：玻璃器皿的洗涤所使用的玻璃器皿应先用（1＋9）盐酸浸泡后，再用无氨水冲洗数次才能使用，否则，也会造成空白值偏高或平行性较差的情况。影响因素4：滤纸对空白值的影响氨氮实验需将水样过滤后测定，所用滤纸一般都含有铵盐，可能引起过滤空白值升高，所以需做过滤空白对照实验，以扣除滤纸影响。实验表明，不同滤纸之间铵盐含量差别很大，有些含量较高的滤纸虽经多次用水洗涤，仍达不到实验要求，因此使用前需对每一批次滤纸进行抽检，淋洗时要少量多次，减少滤纸的影响。我们选用经稀hcl浸泡并洗净的0.45um醋酸乙酯纤维滤膜过滤水样，解决了用滤纸过滤产生的高空白值问题。不仅过滤空白值低，而且重复性好，所以推荐使用0.45um醋酸乙酯纤维滤膜过滤。 影响因素5：反应条件的控制（1）反应时间对实验的影响测定氨氮时，反应时间不宜过长。6B-50型氨氮测定仪实验中，取定量的空白和水样，先后加入n1试剂1ml，n2试剂1ml。摇匀常温下静置10分钟即可倒入比色皿，放入仪器中测量读数。因而，测定水中氨氮时，显色时间不宜过长，进而保证达到分析的精密度和准确度。（2） 反应体系的ph值对实验的影响我司化验员经过多年的反复实验，发现水样ph值的变化对测定结果有明显影响，水样呈中性或碱性，得出的测定结果相对偏差符合分析要求，呈酸性的水样无可比性，所以对于水样应特别注意调节反应体系的ph值，最好将溶液显色控制在ph值为11.8~12.4。准确检测水中氨氮的含量，有利于更加有效地指导生产，确保安全、优质供水。 结 论纳氏试剂分光光度法测定氨氮应注意和解决的常见问题： ⑴试剂的正确配制决定着方法精密度和准确度，特别要注意理解实验原理、正确掌握试剂配制的要领。⑵注意主要试剂性状，选购合格的试剂。⑶降低空白实验值可提高实验精密度，对实验用水、试剂空白和过滤滤纸要注意检查。⑷反应条件、时间、体系ph决定反应平衡和反应生成物的稳定性，控制反应在最佳条件下进行，尽可能提高操作准确度，确保分析结果的精密度、准确度、稳定性和可靠性。

撰文：丘杉引 言金纳米粒子具有独特的物理、化学特性及较好的生物相容性,是目前现有的纳米材料中应用和研究多的材料之一。依据其特性建立的纳米金比色法更具有操作简便、成本低廉、结果肉眼可见且灵敏度较高等优点,因此近年来在分析化学方面，如微量元素、小分子、蛋白质、dna、癌细胞等的检测十分普遍并发展迅速。但是研究人员也发现，这种检测方法并不十分完美。譬如，被检测物与金纳米粒子（aunps）的接触通常发生在液相体系中，但样品基体中不可避免的高盐度或强酸碱，有可能会破坏金纳米粒子表面官能团并使之发生聚集，因而对检测造成干扰。针对这一问题，四川大学绿色化学与技术教育部重点实验室和分析测试中心的徐开来、吴鹏老师等，提出了一种新型的气体进样纳米金比色法，并且证实了这种方法可以有效避免样品基体对检测结果的干扰，其相关研究成果已于近期发表在acs期刊《analytical chemistry》上。阅读本文，您将会了解具体的方法原理、研究过程以及其中的亮点和前景。纳米金比色法与金纳米粒子的特性 众所周知，纳米金比色法是依据金纳米粒子的特性而建立的。金纳米粒子是早出现，研究多的纳米材料之一，其合成方法已经非常成熟。其特性表现在：分散状态的金纳米粒子（例如分散在水溶液中），间距大于平均粒径时呈红色，而当金纳米粒子发生聚集，粒子间距小于平均粒径时，颜色由红向蓝转变，间距越小越趋近于蓝色。这是由于金纳米粒子表面等离子体共振现象引起的，即金纳米粒子间距变小时，等离子体共振吸收红移，颜色由红向蓝色转变。本团队研究人员也是利用了金纳米粒子这种独特的颜色和颜色转变性质开展了相关工作。研究的具体过程 此项研究，四川大学绿色化学与技术教育部重点实验室和分析测试中心的徐开来、吴鹏老师等，提出一种新的基于金纳米粒子比色分析的策略：将分析物首先转化为挥发性物质，使之与原始的样品基体分离，再将所得的挥发性物质导入到金纳米粒子溶液中，诱导金纳米粒子团聚使之变色。该团队是以人体必需的微量元素“硒”作为目标分析物的。适宜浓度的硒，在人体内具有抗氧化作用，可以增强人体免疫力，延缓衰老，但是过量的硒可引起中毒。纳米金比色法通过气态氢化物生成检测硒 工作原理示意图具体来说，该团队首先通过化学蒸气发生（cvg）将硒转换为挥发性的h2se，然后再与金纳米粒子溶胶接触引起颜色变化。该检测方法成功消除了样品高盐分基质（高达5%的盐分基体）的影响，从而具有优良的抗干扰能力。这种分析方法对分析物硒的检测下限可达到0.05μm（紫外-可见分光光度计）和1μm（裸眼观察）。在机理研究过程中，该团队使用horiba labram hr 800型共聚焦拉曼光谱仪，分析了aunps与挥发性h2se接触前后表面状态的变化，结果表明团聚状态的金纳米粒子表面有零价se存在，而零价se的产生是导致金纳米粒子团聚的主要原因。aunps（红色），与aunps& h2se（蓝色）材料的拉曼光谱图可观的发展前景 为了进一步证实这种方法确实有效并且将会对人们生活有较大帮助，该研究团队还利用这种方法对实际生物、环境样品中的硒进行了检测，例如鱼蛋白认证参考材料(dorm4)、富硒鸡蛋、模拟水样(gbw(e)080395)，自来水样品和高盐度海水样本等，均验证了该方法的有效性。鉴于cvg方法的普及和自然界存在丰富的挥发性有机化合物，这种新型的气体进样方法在生物和环境样品的研究中必将会有很大的发展前景。 研究亮点评述 显然，气体进样纳米金比色法的亮点是将分析物首先转化为挥发性物质，使之与原始的样品基体分离，再将所得的挥发性物质导入到金纳米粒子溶液中，诱导金纳米粒子团聚使之变色。这个研究设想非常具有创新性，研究结果也证实了它的有效性，发展前景相当可观，为人们进一步研究以及更好地利用纳米金比色法也开拓了思路。祝贺四川大学绿色化学与技术教育部重点实验室和分析测试中心的徐开来、吴鹏老师团队，也希望这篇文章对您有帮助！团队介绍四川大学分析测试中心的历史可上溯至1978年成立的原四川大学中心实验室和原四川医学院中心实验室，以及1980年成立的原成都科技大学理化中心，是首批接受世界银行贷款的教育部直属高校15个分析测试中心之一。多次顺利通过国家计量认证的复查、换证工作，已成为目前西南地区规模大、学科覆盖面宽、分析检测手段为齐全、大型精密仪器相对集中的权威检测机构。目前中心配备有horiba fluoromax-4高灵敏度荧光光谱仪，fluorolog-3模块化科研级荧光光谱仪，及horiba labram hr 800型共聚焦拉曼光谱仪。此项研究工作得到了国家自然科学基金优秀青年基金和四川省青年科学基金等资金的资助。并于近期发表：guoming cao, fujian xu, shan-ling wang, kailai xu*, xiandeng hou, and peng wu*, “gold nanoparticle-based colorimetric assay for selenium detection via hydride generation”. anal. chem., 2017, 89 (8), pp 4695–4700.horiba科学仪器事业部结合旗下具有近 200 多年发展历史的 jobin yvon 光学光谱技术，horiba scientific 致力于为科研及工业用户提供先进的检测和分析工具及解决方案。如：光学光谱、分子光谱、元素分析、材料表征及表面分析等先进检测技术。今天horiba 的高品质科学仪器已经成为全球科研、各行业研发及质量控制的首选。

近日上海某助剂公司采购了我公司一套COD快速测定仪，技术员上门调试培训，数据结果很理想。以这次培训实验为例，为大家分享下仪器的性能特点、实验过程、数据检测。 前言：污水处理过程中，我们会遇到很多指标性的标示，比如BOD、SS、SV30、活性污泥等，但其中有一个很重要的指标COD,那么COD代表了什么，主要有什么作用那，下面我们大致介绍一下 COD是一种常用的评价水体污染程度的综合性指标。它是英文chemical oxygen demand的缩写，中文名称为“化学需氧量”或“化学耗氧量”，是指利用化学氧化剂（如重铬酸钾）将水中的还原性物质（如有机物）氧化分解所消耗的氧量。水样在一定条件下，以氧化1升水样中还原性物质所消耗的氧化剂的量为指标，折算成每升水样全部被氧化后，需要的氧的毫克数，以mg/L表示。它反映了水体受到还原性物质污染的程度。由于有机物是水体中最常见的还原性物质，因此，COD在一定程度上反映了水体受到有机物污染的程度。COD越高，污染越严重。我国《地表水环境质量标准》规定，生活饮用水源COD浓度应小于15毫克/升，一般景观用水COD浓度应小于40毫克/升。前言、使用仪器和试剂介绍、实验部分、结果与讨论江苏盛奥华研制的COD测定仪依据环保部行业标准：快速消解分光光度法HJ/T399-2007《水和废水监测分析方法》（第四版），可快速、准确地测定各类水体中的化学需氧量指标，分析出水体受到有机物污染的程度。 仪器准备：a、主机部分6B-200型COD测定仪（江苏盛奥华环保科技有限公司）l 中文操作界面，大屏幕指引化菜单液晶显示l 可直接测定COD指标l 单波长，中心波长为610nml 可用国家标准样品进行曲线自动计算建立l 内存多条标准曲线可人为进行设定、保存和修改l 具有结果显示和存储功能l 冷光源，窄带干涉，光源寿命10万小时b、配套仪器 6B-12型智能消解器（江苏盛奥华环保科技有限公司） 试剂准备：COD专用试剂包含两部分：C1试剂和C2试剂。我们提供的是固体粉末试剂，需要用户按照说明书配置比例，加入定量的浓硫酸和蒸馏水配成液体试剂装入专用定量器中备用。 实验部分：1、 前期准备：A. 拆开两台仪器包装，连接220V电源预热备用B. 取瓶装的待测水样，专用试管、比色皿、移液管等用蒸馏水洗净备用2、 实验过程：A. 先向试管中加入定量的蒸馏水和待测水样，先后加入C1试剂和C2试剂。B. 盖好盖子摇匀，放置到消解器中消解10分钟C. 消解完成后，取出试管放到冷却架上空气冷却2分钟D. 冷却完成后，再加入定量的蒸馏水，盖好盖摇匀水冷至室温E. 取出专用比色皿，依次倒入空白样和待测样F. 最后轻轻放入测定仪主机中测定读数3、 检测完毕，洗净整理好玻璃器皿和仪器，留待下次实验操作 结果与讨论： 测定指标标样500mg/L标样1000mg/L待测水样COD498.85mg/L985.15mg/L3410mg/l结论：仪器国家标样测定数据在允许误差范围内，仪器性能稳定。待测水样测定数据理想。 实验现场图：