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化学发光凝胶成像仪 http://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像.jpghttp://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像面板.jpg操作流程:1. 打开电脑;2. 打开成像仪器电源(左后侧)和CCD 电源(黑色),将样品放入工作台;3. 双击桌面上图标,打开Quantity One 软件,或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入;4. 从File 下拉菜单栏中选择ChemiDoc XRS…,打开图像采集窗口;5. Select Application 选择相关应用;aUV Transillumination 透射UV:针对DNA EB 胶或其他荧光,打开仪器面板上UV 按钮;bWhite Transillumination 透射白光:针对透光样品如蛋白凝胶,x-光片,把白光灯箱 放在UV工作台上,打开仪器面板上Trans-White;cWhite Epillumination 侧面白光:针对不透光样品或蛋白凝胶,打开仪器面板上Epi-White6. 单击Live/Focus 按钮,激活实时调节功能,此功能有三个上下键按钮:IRIS(光圈),ZOOM(缩放),FOCUS(聚焦),您可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节,调节步骤:a调节IRIS 至合适大小b点ZOOM,将胶适当放大c调节FOCUS,至图像最清晰7. 如果是DNA EB 胶或其他荧光或蛋白凝胶,单击Auto Expose,系统将自动选择曝光时间成像,如不满意,单击Manual Expose,并输入曝光时间(秒),图像满意后保存;8. 如是化学发光,在Select Application 下选择Chemiluminescence 或Chemi Hi Sensitivity(如样品强度较弱),先打开Epi-White 侧面白光,同第5 步调节清楚膜的聚焦状态(如膜上没有可对焦的标记,可用记号笔做个小记号)。然后关闭光源,不打开任何光源,将滤光片位置换到o 位(仪器上方右侧),将光圈Iris 开到最大,选择Auto Expose 自动曝光,或输入ManualExpose 时间,可对化学发光的弱信号进行长时间积累如30min,或单击Live Acquire 进行多桢图象实时采集,在对话框内定义曝光时间长短,采集几桢图象,在采集的多桢图象中选取满意的保存。 化学发光是特别弱的发光,所以曝光可以很长,记得做完化学发光后,把滤光片位置换到原先的位置(I 位)。
刚学习化学发光,请专家指点化学发光检测仪采用液相(态)检测方法比化学发光固相(态)检测(成像系统)灵敏多少个数量级? 3~5个?对于化学发光检测,是不是PMT单光子检测做的工作,化学发光成像系统一定不可以做? 例如?
化学发光定氮仪采用化学发光检测原理,待测样品(或标样)被引入到高温裂解炉后,在1050 ℃左右的高温下,样品被完全气化并发生氧化裂解,其中的氮化物定量地转化为一氧化氮(NO)。样品气经过膜式干燥器脱去其中的水份。亚稳态的一氧化氮在反应室内与来自臭氧发生器的O3气体发生反应,转化为激发态的NO2*。当激发态的NO2*跃迁到基态时发射出光子,光信号由光电倍增管按特定波长检测接收。再经微电流放大器放大、计算机数据处理,即可转换为与光强度成正比的电信号。在一定的条件下,反应中的化学发光强度与一氧化氮的生成量成正比,而一氧化氮的量又与样品中的总氮含量成正比,故可以通过测定化学发光的强度来测定样品中的总氮含量