快速纯化色谱仪

01 摘要碳水化合物化合物可利用 RediSep Gold Amine 色谱柱结合蒸发光散射检测（ELSD）进行简便的纯化。该色谱柱采用亲水相互作用液相色谱（HILIC）梯度洗脱法，以乙腈或丙酮与水的梯度进行操作。将待纯化的样品溶解于 DMSO 中，不仅允许大量样品加载，同时还能保持良好的分辨率。02 背景碳水化合物通常采用氨基柱进行分析，该方法具有良好的分辨率。这种分析方法一般使用乙腈和水作为流动相，样品通常溶解在水中。由于样品注射量较小，样品有机会吸附在固定相上。在制备色谱中，相对于色谱柱尺寸而言，样品负载和注射体积要大得多，因此将样品溶于水中注射可以防止碳水化合物吸附在柱子上，导致它们在空隙处洗脱。干法加载样品到固体装载小柱上通常用于快速色谱，但用户需要自己用氨基介质填充他们的小柱。样品仍然溶解在水中进行加载，这需要很长时间才能在运行样品前蒸发。二甲基亚砜（DMSO）常用于反相色谱的样品溶解，因为它能溶解大多数化合物。DMSO 能够溶解碳水化合物，但在 HILIC 中是一种弱溶剂，因此它允许样品吸附在柱子上。在使用氨基柱时，DMSO 在洗脱早期被洗脱；然而，在采用非氨基介质的其他 HILIC 运行中，它可能在梯度洗脱的后期才被洗脱。03 结果与讨论虽然亲水相互作用液相色谱（HILIC）属于正相色谱，但它使用的溶剂通常适用于反相色谱，因此需要根据表 1 中的设置调整蒸发光散射检测器（ELSD）的参数，以保持基线稳定的同时维持灵敏度。表1. 纯化碳水化合物的蒸发光散射检测器（ELSD）设置。ELSD控制设置值Spray Chamber20℃Drift Tube60℃Gain1SensitivityHigh样品均溶解于 DMSO 中。如有必要，将样品在热水浴中加热以促进溶解。使用 PeakTrak Flash Focus 梯度生成器在系统上开发方法。运行了一个亻贞查梯度以验证样品能够被洗脱，并证明化合物之间有足够的分辨率以实现成功的纯化。所需化合物的保留用于计算聚焦梯度的溶剂组成。所有运行均使用 RediSep Gold 氨基柱。运行完成后，用2-丙醇洗涤并储存柱子，2-丙醇与有机溶剂混溶，可实现较少极性化合物的快速纯化。第一个实例使用了核糖和葡萄糖。亻贞查梯度和聚焦梯度都使用乙腈作为弱溶剂。亻贞查运行只用了少量几毫克，并且为了提高这个小样品负载的灵敏度，ELSD 增益被调高到 3。第二个洗脱峰用于聚焦梯度；计算梯度后，ELSD 增益被重置为 1 以保持 ELSD 响应在量程内。总样品负载为 100 毫克，使用 50 克 RediSep Gold Amine 柱。果糖和蔗糖通常一起出现在样品中。图 2 展示了从葡萄糖杂质中纯化果糖的过程。该混合物以与核糖-葡萄糖样品类似的方式运行，梯度聚焦于葡萄糖。在约 1.8 柱体积（CV）出现的峰是用于溶解样品的 DMSO。图1. 核糖和葡萄糖在 5.5 克 RediSep Gold Amine 柱上运行亻贞查方法（上图），并聚焦到 50 克 RediSep Gold 胺柱上。样品总负载量为核糖和葡萄糖各 50 毫克。聚焦梯度中约 1.8 柱体积处的小峰是 DMSO。图2. 使用 RediSep Gold Amine 柱和乙腈/水梯度从蔗糖中纯化不纯的果糖。04 丙酮作为弱溶剂丙酮也是 HILIC 的弱溶剂，可以替代乙腈使用。尽管醇类可以用于 HILIC，但这些溶剂对于在胺柱上纯化碳水化合物来说太强了。使用丙酮纯化了一个果糖和葡萄糖的样品。该混合物的纯化方式与之前的例子相似，除了亻贞查梯度使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold Amine 柱，因为 PeakTrak 允许使用任何尺寸的 Teledyne ISCO 柱进行亻贞查运行。聚焦梯度使用了一根 50 克的 RediSep Gold Amine 柱，但计算出的梯度需要较低的水浓度来纯化葡萄糖，这表明对于这些化合物，丙酮是比乙腈更强的溶剂。图3. 使用丙酮/水梯度纯化的果糖和蔗糖。亻贞查运行使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold 胺柱。05 结论使用 NextGen 300+ 配备蒸发光散射检测器（ELSD）和 RediSep Gold 胺柱，通过 HILIC 梯度方法可以高效纯化碳水化合物。使用 DMSO 溶解样品既保证了高样品负载量，又保持了良好的分辨率。PeakTrak Flash Focus 梯度生成器使得 Teledyne ISCO 制造的所有色谱柱都能快速开发和放大方法。

2007年7月，国际知名快速纯化制备色谱仪制造商ANALOGX公司总裁Mr. Demarco 先生来我公司参观访问，双方对进一步开拓中国市场进行了亲切而友好的交谈。 Analogix公司是世界上最专业的快速纯化色谱设备及色谱柱的生产厂商，总部位于美国东北部高科技走廊地区的伯灵顿市。其快速色谱产品的分离能力从0.5mg到5Kg，覆盖了从实验室研究、中试到小规模生产等各个领域，被广泛应用于有机物的纯化、天然产物的分离等。 Intelliflash 280是Analogix公司的主打产品。它的自动控制程度高，可实现无人照看工作或工作过程中修改实验参数；外观设计紧凑：占有空间为62 x 49 x 39cm (H x W x D)，可以放入实验操作箱进行操作； 高精度：双元泵的精度为± 1%； 模块化设计：便于系统升级和功能扩展； 纯化柱品种丰富，连接简单； 单波长或多波长检测器，除以上优点外，还可以实现样品的自动收集。 详情请浏览 http://www.pynnco.com , 或咨询：电话：010-65528800，传真：010-65519722，邮件sales@pynnco.com

华南理工大学招标中心受华南理工大学委托，就华南理工大学蛋白纯化色谱仪购置招标项目接受合格的国内投标人提交密封投标。有关事项如下：一、招标项目1、项目名称： 华南理工大学蛋白纯化色谱仪 购置 ，招标编号： SCUT[2014]WZ3312、数量：以招标文件为准3、 具体内容(仅供参考，具体以购买的招标文件书面版本为准) ： 331-参数.doc二、供应商资格要求1、投标人须符合《政府采购法》第二十二条的相关规定，已报名并获取本项目招标文件的在中华人民共和国注册的法人；2、投标人必须是具有本次招标采购设备的生产或销售权的制造商或经销商，同时具有完成本招标合同并能为本招标采购的设备提供长期售后服务和备品备件的能力3、投标人必须获得相应制造商、有效资质的总代理商的经销或授权证书。4、投标人应具备良好的商业信誉和健全的财务会计制度，有依法纳税的良好记录，在近三年经营活动中没有重大违法记录。三、获取招标文件的时间、地点、方式及招标文件售价1、获取招标文件时间：2014年12月29日～2015年1月8日（节假日除外），15:00～17:00(北京时间)，上午时间不售卖2、获取招标文件地点：广州市天河区华南理工大学南秀村物资大楼二楼招标中心3、获取招标文件方式：购买。请投标人代表携带投标人营业执照复印件、购买招标文件人身份证复印件、法人授权书和招标文件发售登记表购买招标文件（法人授权书模板和招标文件发售登记表的下载地址： /cms/attachment/36356027 ，以上资料均需加盖公章及法人代表印章或签名），如是外地的供应商（广州市区除外）则需扫描以上资料（还需包括购买招标文件的汇款单、投标人名称、邮寄地 址、邮政编码、联系人、联系电话等信息）发送至招标中心邮箱（zbshb@scut.edu.cn，不接受传真件）。国内邮购招标文件者应加50元人民币 作特快专递费，招标中心将用航空快递及时寄去招标文件，但在任何情况下招标机构对邮寄过程中发生的迟交或遗失都不承担责任。4、招标文件售价：人民币 150 元/套（售后不退）5、收款人：广东华工工程建设监理有限公司开户行：中国工商银行广州五山支行账 号：3602002609000735315四、投标截止时间、开标时间及地点1 、招标公告时间： 2014年12月26日～2015年1月12日2、递交投标文件时间：2015年1月13日8:30～9:00 (北京时间)3、投标截止时间：2015年1月13日9:00时(北京时间)4、开标时间：2015年1月13日9:00时(北京时间)5、开标地点：华南理工大学南秀村物资大楼二楼华工招标中心五、 招标机构：华南理工大学招标中心联系电话：020-22236966（杨老师） 传真：020-22236966 邮编：510640Email：zbshb@scut.edu.cn华南理工大学招标中心二○一四年十二月二十六日