快速纯化色谱仪

纯化气对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的影响大不

液相色谱仪纯化后去除水相的仪器

有谁用过快速制备、快速纯化系统，可否讲讲它的好处以及它的应用领域。谢谢！

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析过程中可以纯化溶剂么？还是这是两个过程，我听师姐说就是分析过程中就会有纯化过程，有点懵

[~75164~][~75165~][~75166~]新出的快速制备色谱仪，对化学合成产物，天然产物的提纯很有帮助，用它来作正相，反相分离都很方便，比高压制备快多了。

高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱顾铭* 欧阳藩 苏志国（中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京，100080）摘要 用国产高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化中草药——丹参，选用正己烷-乙醇-水体系，固定相保留率达到78.8%。采用分步洗脱，3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分，经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰，并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD3%，符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此，HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。关键词 高速逆流色谱（HSCCC），中药指纹图谱，丹参中图分类号 R917仪器TBE-300半制备型高速逆流色谱仪（深圳同田生化技术有限公司，中国）。聚四氟乙烯管缠绕在3个水平轴上形成螺旋管（管直径2.6mm，分离体积300mL），进样圈20mL。高速逆流色谱配备了柱塞式泵（S系列，北京圣益通技术开发有限责任公司，中国），紫外检测仪（8823A，北京新技术应用研究所，中国），记录仪（3057型，四川记录仪器厂，中国）。

[size=5]最近学校买了台天津博纳艾杰尔agela CHEETAHTM系列中压快速纯化制备系统，以前没用过此类制备色谱，请问哪问有CHEETAHTM使用说明啊？请多多指教！[/size]

高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱顾铭* 欧阳藩 苏志国（中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京，100080）摘要 用国产高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化中草药——丹参，选用正己烷-乙醇-水体系，固定相保留率达到78.8%。采用分步洗脱，3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分，经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰，并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD3%，符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此，HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。关键词 高速逆流色谱（HSCCC），中药指纹图谱，丹参中图分类号 R917仪器TBE-300半制备型高速逆流色谱仪（深圳同田生化技术有限公司，中国）。聚四氟乙烯管缠绕在3个水平轴上形成螺旋管（管直径2.6mm，分离体积300mL），进样圈20mL。高速逆流色谱配备了柱塞式泵（S系列，北京圣益通技术开发有限责任公司，中国），紫外检测仪（8823A，北京新技术应用研究所，中国），记录仪（3057型，四川记录仪器厂，中国）。*通讯作者。Tel: 86-10-82627061；Fax: 86-10-62558174；E-mail: rainbow_gm@sina.com

[color=#444444]用液相跑某一个样品，发现杂质峰比较多，欲将主峰物质进一步分离纯化，收集相应峰馏分。用普通的分析检测型的HPLC可以做到吗？还是用制备型色谱？只要收集到一点点就可以，然后可以做定性分析...我查文献里说都是用制备型色谱分离，希望懂色谱的高手指导一下，多谢[/color]

常常会有人问，明明可以人工过柱，为什么我还要购置一台快速液相制备色谱仪？市场上这么多仪器，到底又该怎么选择？回答这个问题之前，我们先讲一下，什么是快速制备色谱呢？[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20170714/f94ee734eaf24bae9ec60ed232470d2a.png[/img]快速制备色谱，也就是Flash制备色谱，一般最大承压在145-200psi。由于压力比高压要小很多，所以更多的说法会把快速制备色谱以及中压制备色谱合称为中低压制备色谱。[b]主要优点[/b]1)相对于常压色谱来说，分离效率来的更高；2)在蛋白质纯化上有天然传统优势；3)比高压制备色谱来的经济，仪器要求配置低，而且用户可以自己装柱；4)使用预装柱，可以提高效率；5)与TLC有一定的直接关系，利用TLC可以快速的建立分离方法。[b]一般来说，购置快速制备色谱仪的原因不外乎以下几个：[/b]1）提高效率，节省时间、人力2）比传统的过柱方式，更节省溶剂3）可以通过过柱机实现常规手工过柱不容易分离的样品很多人在购买仪器的时候，常常会忘记自己的原始需求，陷入一些选择的惯性，比如看指标、比质量或者价格等等，就像我本来只想要买一个可以用来打电话的手机，却开始纠结于手机的拍照效果好不好，比了一圈下来，反而更纠结了。那么，到底应该怎样来选择一台快速制备色谱仪呢？今天小编就给大家一些建议，避免一些选择的误区。[b]第一点， 是否高效便捷？[/b]制备色谱仪相比于传统的过柱方法来说，最大的优势就是高效快速，操作简单。如果用了仪器，反而操作步骤更多了，效率变低，那么这台仪器也没有购买的价值了。高效便捷主要体现在两个方面，一个是仪器整体的操作体验舒适度。另一方面就是分离纯化的效率。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20170714/5ff5ceef51e34065ab1b5dc8b736031b.png[/img]1)仪器的操作体验，很好理解，就是用起来舒不舒服，首先是看仪器的硬件设施，比如用iPad触控的体验肯定比用台式机好；其次，是软件的操作体验，从开始实验到后期实验管理的整个流程设计是否合理，包括软件操作是否顺畅、能否方便的查看实验进度、记录实验情况等等。2)而就分离纯化效率来说，一般来说，快速制备色谱的效率肯定比人工过柱要高出很多。从分离时间上来说，一般用机器过，一个样品半小时就好了，而人工过，可能要几个小时甚至1天；另外，从分离效果上来说，有些样品比如点TLC板的两个点靠的很近，人工分不开，用机器就能分开，这样也无形中提高了实验效率。如果可以做到这两点，那么这个仪器的分离纯化效率就是过关了。[b]第二点，拥有成本。[/b]很多时候，我们衡量购买一台仪器的成本，除了购买初始软硬件的投入外，更科学的衡量方式，是衡量这台仪器从购买到报废整个生命周期中的拥有成本。它除了初始软硬件投入外，还包括耗材、操作人员培训、操作时间、维修成本、故障停机时间等几个大的部分，而这个主要由三方面决定：1）操作的便捷程度，决定了培训时间及操作时间，简单来说，就是仪器是不是容易上手，而这又回到了最开始说的仪器操作体验；2）能否有效节省耗材，决定了消耗成本。衡量一台仪器是否可以节省耗材，主要看它能否节省溶剂以及延长柱子的使用寿命。与传统玻璃过柱相比，快速制备色谱的一大优势就是能够节省更多的溶剂，这也是衡量一台仪器的重要因素，因此在了解或者试用一台仪器的时候，这也必须要纳入考量；除此之外，目前一些仪器比如三泰科技的SepaBean™ machine，可以通过专属的RFID标识或者SepaFlash色谱柱上的专属二维码，记录柱子的每一次使用情况，从而达到科学有效的重复使用色谱柱，这样日积月累，节省的耗材成本也非常可观；3）售后服务水平，决定了仪器的维修成本和故障停机时间。如果仪器出现问题的时候，用户能够得到更加快速的响应，仪器能更快恢复正常，那么我们就说用户的使用成本越低，反之，成本就高。[img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20170714/098b09e00718445d9317ed13b735ef28.png[/img]这一方面，是取决于公司本身的售后体系是否高效完善，包括售后技术指导、售后反应速度、售后服务态度等等。举例来说：常常会出现这种情况，新旧工程师交替，新的工程师不会使用仪器，旧的又走了，那么对应厂商能否及时的跟踪培训就显得特别重要。另一方面，取决于一些零配件能否有充足的备货，出了问题是否能够快速更换，以及售后的费用等等。同样一个配件，一个只需要1个礼拜就到货并且解决问题，一个要等1个月，中间就存在很大的差距。从这个角度来说，国产机器就具有一定的优越性，更换周期短，成本也相对较低。[b]第三点、必要的功能性[/b]购买一台仪器，本身就是希望能够代替人工，或者能够实现人工做不到的事情，所以一些机器必要的功能性，也很重要。很多仪器虽然标榜自己为自动仪器，但是其实很多都是半自动的操作，这让很多仪器买回去之后使用起来并没有简化流程，慢慢大家还是回到了手工过柱的日子，仪器也变成了摆设。比如用机器是不是能够分离一些手工过柱很难分离的产物，比如有没有收集系统、检测系统等等，这都是要根据你的实际需要考虑进去的。目前大多数的公司都会提供试用服务，这也是了解一台仪器以及一个公司最直接的方法，一般试用都要提前预约，所以也要向各个公司了解清楚，配合自己的实验需求提前安排。购置一台快速制备色谱仪，对于很多实验室或者企业来说，也算是一笔不小的开支。在可控的成本里，挑选出最适合的仪器，是一门学问。小编在这里也是给大家一些小的建议，如果还有其他疑问，欢迎留言或者私信，小编一定知无不言言无不尽啦！

想从动物心脏中纯化一种蛋白，用没有做过亲和色谱提取的？谢谢

http://www.instrument.com.cn/show/Breviary.asp?FileName=C121538%2Ejpg&iwidth=200&iHeight=200 博纳艾杰尔科技 的 CHEETAH 中压快速纯化制备色谱（CHEETAH MP 200）(CHEETAH MP200)已参加“国产好仪器”活动并通过初审。自上市以来，这款产品已经被多家单位采用，如果您使用过此仪器设备或者对其有所了解，欢迎一起聊聊它各方面的情况。您还可以通过投票抽奖、参与调研等方式参与活动，并获得手机电子充值卡。【点击参与活动】 仪器简介： 适用行业：CHEETAH® MP 100/200快速纯化制备系统主要应用在植物化学、有机合成、药物化学、精细化工、生物工程及生命科学等领域的产品的提取、检测及纯化工作中。 详细介绍：CHEETAH® 系列快速纯化色谱，采用工业一体化设计，实时在线监控，大大缩短了分离时间。仪器操作简单实用，只需几个按键便可实现样品分离，提升产品价值。 1. 12.1 超大触摸屏控制，操作更加方便 2. 即时“峰- 管位置对应，方便实验过程中的实时处理 3. 防腐蚀台面设计，适用于多种溶剂 4. 方便可拆卸式设计，维护性强 5. 二元梯度，最多可进行四元切换，最大压力200psi，最大流速200mL/min 6. 检测器采用独特的光路和液路设计，降低噪音，有效避免气泡对检测的干扰。 7. 简单实用的柱支架设计。适用于多种规格Flash 柱和玻璃柱。更可选配豪华进样器， 支持固体和液体进样。 技术参数： CHEETAH® MP 200 订货号 FS-9200 FS-9204 FS-9200T FS-9204T FS-9200S FS-9204S 溶剂输送泵 二元梯度 四元梯度 二元梯度 四元梯度 二元梯度 四元梯度 流速：1-200mL/min；最大压力：200psi 检测器 波长：200-400nm可调 吸光度范围：≤2AU 波长精度±0.5nm 波长：200-400nm可调 吸光度范围：≤5AU 波长精度±1nm 波长：200-800nm可调 吸光度范围：≤5AU 波长精度±1nm 双波长紫外检测器 收集容器 内置单独二维馏分收集器调节软件，标配收集试管架：F1-13mm、F2-15mm、F3-18mm、F4-25mm和 F5-100mL；可调整软件界面适应各种容器的馏分收集（包括1升大容量瓶）。 扩展性 可以和第二种检测器通讯和收集（蒸发光、示差）。 上样方式 支持液体/固体上样 收集方式 体积/时间、UV/RI/ELSD阈值、UV/RI/ELSD斜率、全收集、手动收集、窗口（time/uv）自由组合 实时控制 运行中可修改梯度、流速，并可更改收集方式。 安全性 实时压力报警/漏液报警。 创新与改进 1. 双波长：一个波长的检测用于目标物的收集，同时使用另外....【了解更多此仪器设备的信息】

有谁知道反相色谱在合成肽分析、纯化中是如何应用的？谢谢

请问有用过美国高麦氩色谱（GM100)的吗？其中有一个载气（氩气）的纯化器。有换过的吗？原装的太贵了将近3万，请问是否有可替代的厂家或者设备？Parameter is not valid.

凝胶过滤色谱摘要：本文主要讲解了凝胶过滤色谱法（分子筛）在蛋白纯化实验中的应用，包括纯化原理、实验方案设计、技术操作以及相关案例介绍和问题分析。基本原理凝胶过滤色谱蛋白纯化法，又称为空间排阻色谱，分子筛等。其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。当样品从色谱柱的顶端向下运动时，大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱；而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中，且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同，分子量越大，流出时间就越早，最终分离分子大小不同的蛋白质。http://www.detaibio.com/assets/image/topics/gel-filtration-chromatography-theory.jpg通常，多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的，交联程度决定凝胶颗粒的孔径。常用的色谱基质有：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、聚丙烯酰氨凝胶（Bio-Gel P）等。高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子，或是除去低分子量缓冲液成分和盐，而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。实验方案设计凝胶介质的选择凝胶介质的选择主要是根据待分离的蛋白和杂蛋白的分子量选择具有相应分离范围的凝胶，同时还需要考虑到分辨率和稳定性的因素。比如，如果是要将目的蛋白和小分子物质分开，可以根据他们分配系数的差异，选用Sephadex G-25和 G-50；对于小肽和低分子量物质的脱盐，则可以选用Sephadex G-10、G-15以及Bio-Gel P-2或P-4；如果是分子量相近的蛋白质，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。具体凝胶过滤色谱介质应用如下：常用凝胶过滤色谱介质的分离范围凝胶介质蛋白质的分离范围/103凝胶介质蛋白质的分离范围/103Sephadex G25Sephadex G50Sephadex G100Sephadex G200Sepharose 6BSepharose 4B1~51.5~304~1505~60010~400060~20000Sepharose 2BBio-Gel P-4Bio-Gel P-10Bio-Gel P-60Bio-Gel P-150Bio-Gel P-30070~400000.5~45~1730~7050~150100~400凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液，搅拌，静置，倾去上层混悬液，除去上清液中的凝胶碎块，重复数次，直到上清澄清为止。色谱柱的选择色谱柱的体积和高径比与色谱分离效果密切相关，凝胶柱床的体积、柱长和柱的直径以及柱比的选择必须根据样品的数量，性质和分离目的进行确定。组别分离时，大多采用2~30cm长的色谱柱，柱床体积为样品溶液体积的5倍以上，柱比一般在5~10之间；而分级分离一般需要100cm左右的色谱柱，并要求柱床体积大于样品体积25倍以上，柱比在20~100之间。凝胶柱的填装凝胶色谱柱与其它色谱方法不同，溶质分子与固定相之间没有力的作用，样品组分的分离完全依赖于他们各自的流速差异。装住时关住柱子下口，在柱内加入约1/3柱床体积的水或缓冲液，然后沿着柱子一侧将缓冲液中的凝胶搅拌均匀，缓慢并连续的一次性注入柱内。待凝胶沉积约5厘米左右时，打开柱子下口，控制流速在1ml/min。样品的处理与上样根据样品的类型和纯化分析，需要选择合适的缓冲液，为了达到良好的分析效果，上样量必须保持在较小的体积，一般为柱床体积的1%~5%，蛋白质样品上样前应进行浓缩，使样品浓度不大于4%（样品浓度与分配系数无关），但需要注意的是，较大分子量的物质，溶液粘度会随浓度增加而增大，使分子运动受限，影响流速。上样前，样品要经滤膜过滤或离心，除去可能堵塞色谱柱的杂质。洗脱与收集凝胶过滤色谱的缓冲液用单一缓冲液或含盐缓冲液作为洗脱液即可，主要考虑俩个方面的原因：蛋白的溶解性和稳定性。所用的缓冲液要保证蛋白质样品在其中不会变性或沉淀，PH应选在样品较稳定、溶解性良好的范围之内，同时缓冲液中要含有一定的盐（NaCL），对蛋白质起稳定和保护作用。洗脱过程中始终保持一定的操作压，流速不可过高，保持在0.5~3.0mL/min即可。案列介绍AKTA凝胶过滤色谱分离蛋白质材料色谱介质：Sephacryl S-200，蛋白质分离范围（5~250）×103 色谱柱：XK16/60预装柱色谱设备：AKTA Explorer混合样品：含单克隆抗体，分子量180000；牛血清白蛋白（68000），溶菌酶（14000）NaOH 0.5 mol/LNaCl 200 mmol/LPB 20 mmol/LPH7.0 缓冲液方法凝胶除菌处理超纯水冲洗柱子后，用0.5mol/L NaOH正向冲洗柱，流速3mL/min，冲洗3柱体积平衡NaOH处理完毕后，用超纯水冲洗2柱体积，接着用含200mmol/L NaCl和20mmol/L PB的7.0PH缓冲液冲洗5~10倍柱体积上样平衡完毕后，选择样品泵进行上样，上样流速3mL/min，上样体积为1mL洗脱上样结束后，用平衡缓冲液进行洗脱清洗与保存纯化结束后，用0.5mol/L NaOH反向冲洗2柱体积，冲洗时间30~60min，冲洗结束后，用超纯水正向冲洗5柱体积，再用20%乙醇冲洗3柱体积，然后拆下柱子，俩端封死，低温保存。问题分析和解决方案色谱分离前如何净化样品在色谱分离前，对样品进行离心和过滤，离心能除去大部分块状物，如果离心后样品仍不清澈，可用滤膜过滤。由醋酸纤维薄膜或PVDF材料制成的滤膜能够非特异性的结合少量蛋白。溶液交换不彻底严格控制上样体积，上样体积不超过柱体积30%。若样品溶液体积较多，可以分多次上样，注意每次上样时间间隔，可根据电导色谱峰确定下一次上样时间。分辨率不高1)提高装柱质量，使色谱柱装填匀实； 2)提高柱床高度； 3)控制上样体积，最大上样体积不超过柱床体积5%； 4)控制样品黏度与洗脱溶液黏度保持一致； 5)根据样品特点选择合适的洗脱溶液，调节洗脱溶液的离子强度或亲水性； 6)选择合适的凝胶柱（如何选择请参照上文）色谱峰对称性差1)提高装柱质量，装柱匀实——若柱装的太松，容易引起拖尾，装的太紧，会引起前沿；2)柱较脏，再生色谱柱肩峰出现的原因及解决方法1)柱床松动，重新装柱或反向冲洗柱2)柱筛板堵塞，超声清洗筛板3)柱干裂，重新装柱

AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤很简单的，比较适合初学者。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113913]AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤[/url]

随着全球“回归自然”的热潮，对天然植物活性成分的研究开发也就成了当前医药、食品、化妆品等领域的热点，基于天然产物资源开发的产业已被认为是世界上最有前途、最具生机的行业之一。从天然植物资源中分离天然活性成分具有很多的困难和问题，因为大多数植物资源中所含有的活性成分含量低，且存在于复杂的介质中，色谱分离法一直是天然产物成分分离的常用的方法，例如有柱色谱法和制备型高效液相色谱法等，但是，物质在固态填充物的不可逆吸附和变性是固相色谱所遇到的共同问题。另外，从分析到制备规模的放大，所需费用也相当昂贵。逆流色谱是一种无需任何固定相支撑体的液-液分配色谱分离技术，不存在对样品组分的吸附、变性、失活、拖尾等不良影响，节省填充材料和溶剂消耗；它的操作简便，重现性好，分离量较大，粗提物样品可以直接进样分离。目前已有许多成功应用的实例作为参考，所以在操作时溶剂系统的变换更为方便、快捷。对天然产物的分离纯化，是高速逆流色谱非常适合的应用领域。我国是世界上最早将逆流色谱技术应用于天然植物和中草药成分分离纯化的国家。早在1980年，张天佑教授就自行研制出了国产的逆流色谱仪，并开创了在天然植物和中草药领域的应用研究工作 。此后的20多年中，越来越多的中国科技工作者利用我国的资源优势和技术优势，在这一技术领域和应用领域做出了成绩和贡献。 不同种类天然产物的分离虽然已有文献总结，但系统性和更新程度还有待完善。山东省科学院分析测试中心王晓研究员的研究团队以在天然产物分离方面取得的优异成绩为基础，对不同种类的天然产物分离正在进行全面的最新的总结。不日，最新的不同种类天然产物的分离总结及独有的相关见解将面世。

一． 逆流色谱技术简介现代逆流色谱技术起源于上世纪50年代的逆流分溶法（Counter Current Distribution, CCD），它利用不同物质在所选择的两相溶剂中的分配系数不同而通过多次逆流分溶对物质进行分离。它采用数百个分离管进行操作，每一次操作后，上层液体被转移至盛有新的下层溶剂的分离管中，而往原分离管中加入新的上层溶剂，看起来好似两相的液体以相反的方向流动，故称为逆流分溶法。逆流分溶法存在许多缺点，如使用易破碎的玻璃仪器，分离时间长，需要连续稀释样品等。但与液相色谱相比，它无需固体作固定相，从而避免了因此而带来的一系列问题。因此，在CCD基础上发展起来的逆流色谱（Counter Current Chromatography, CCC）在采用了与液相色谱相似的连续洗脱、检测和分布收集技术后从上世纪70年代开始得到迅速的发展，并在天然和合成化合物的分离纯化中发挥了日益重要的作用。上世纪70年代出现的液滴逆流色谱（Droplet Counter Current Chromatography, DCCC）使流动相形成液滴，通过作为固定相的液柱而达到分离纯化的目的。其装置主要由输液部分、检测收集部分和玻璃管液柱部分（300-500根60cm X 1.8mm的玻璃管）组成。由于流动相形成液滴，在细的玻璃管中与液体固定相有效地接触，摩擦不断形成新的表面，促进溶质在两相溶剂中的分配，所以分离效果好，而且不产生乳化现象。对于易氧化的物质，还可用氮气驱动流动相。采用DCCC分离纯化了许多包括中草药和抗生素在内的天然产物如柴胡皂甙和短杆菌肽, 短杆菌酪素和四环素等。液滴逆流色谱解决了操作自动化的问题，但仍存在分离时间长，使用易破碎的玻璃管，分离度还不高等问题。逆流色谱技术的重大突破出现在上世纪80年代，根据被分离混合物的理化特性，选择二元或多元的两相溶剂体系，以上相或下相为固定相，将其注满色谱柱后使色谱柱作特定的高速旋转运动，并用由此产生的离心力场支撑柱内的液体固定相，然后以另相为流动相，携带溶解的混合物由输入泵推入色谱柱，穿过两个液相对流的管柱，各组分根据在两相中的分配系数不同而得到分离。根据离心力场的不同可将现代逆流色谱分为离心分配色谱(Centrifugal Partition Chromatography, CPC)，也称盘管行星离心色谱(Coil Planet Centrifuge, CPC)和高速逆流色谱(High Speed Counter Current Chromatography, HSCCC)，前者属流体静力平衡系统，色谱柱由一系列刻在圆盘或圆筒内的导管相联的柱体组成，通过单轴旋转产生恒定的重力场，两个旋转密封的接口分别连接流动相的进口和出口；后者属流体动力平衡系统，由聚四氟乙烯软管绕制成的色谱柱除绕离心轴旋转外，还围绕自轴旋转，产生变化的重力场，并采用无旋转密封的连接方式。分离时两相液体被剧烈振动的离心力场依其界面特征被甩成极细的微粒，样品各组分在两相微粒的表面上分配并在微粒振荡与对流的环境中有效传递，相当于把通常的溶剂萃取高效（13次/秒以上）、自动、连续地予以完成。泡沫逆流色谱(Foam Counter Current Chromatography, Foam CCC)技术是在HSCCC的基础上发展起来的。使用时，氮气和流动相同时从相反方向注入管柱中形成气体和流动相的逆流，然后从盘管中部注入的混合物根据形成泡沫的能力得到分离，易形成泡沫的的组分随[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]被洗脱收集在泡沫流出部分，而其它组分则随流动相流出。在盘管行星离心色谱基础上还发展了交叉轴盘管行星离心色谱(Cross-axis Coil Planet Centrifuge, X-axis CPC)，这种仪器在使用中产生一种行星式运动，使得盘管支架在围绕离心中轴转动（公转）的同时还沿着自己的水平方向轴旋转（自转），使得部分的离心力矢量作用于盘管的半径方向，以防止因两相乳化而降低固定相保留率的现象出现。因此，X-axis CPC大大稳定了固定相的保留率，特别适用于大量制备性分离纯化。现代逆流色谱技术为化合物的分离纯化提供了一个新的手段，与HPLC等液-固色谱技术比较，由于分离原理不同，二者间存在很强的互补性。它无需固体作固定相，不存在固体对样品组分的吸附、玷污、变性、失活、拖尾等现象，能实现很高的回收率，节省昂贵的材料消耗和溶剂消耗（HPLC的1/10以下），运行使用的后续投入较低。逆流色谱在无需更换不同极性的色谱柱情况下，通过提高极性溶剂或非极性溶剂比例的方法，可以实现流动相从弱极性到强极性或相反的转化。由于色谱柱容积大，无填料，柱内空间全部是有效空间，因此，样品负载能力强，制备量大，重现性好。实验室规模的盘管总体积为100mL的逆流色谱仪一次可分离0.5-2克的粗品，而3000mL容量的制备型逆流色谱仪一次可分离15-60克的粗品。但是，与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]和高效液相色谱等相比，逆流色谱的分离效率即理论塔板数还不高（一般在1000以下），一次分离所需时间还较长（以小时计），因此，还不宜用于组成复杂的混合物的全谱分离分析。逆流色谱技术在基本原理以及溶剂系统选择等方面还有待于进一步的普及、研究、开发与应用。目前，HSCCC等技术在生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物以及无机离子等众多领域已得到成功应用，1996年美国出版的《High-Speed Countercurrent Chromatography》一书被选编为著名的分析化学丛书第132卷，2000年9月在英国Brunel大学召开了逆流色谱技术第一届国际学术会议，每年一度的国际分析化学与应用光谱学学术会议上，都设有CCC的专题组，“Journal of Chromatography” ,“Journal of Liquid Chromatography” 等重要学术刊物都有这一技术的论文发表。我国在CCC技术及其应用研究方面与国际发展同步，1980年研制出了我国第一台逆流色谱仪，并用于国产抗敌素成分的分离与分析检定，发表了一大批用HSCCC等分离制备中草药和茶叶等天然产物活性成分的论文，引起国际同行的瞩目，2002年在北京召开了逆流色谱技术的第二届国际学术会议。但是，在逆流色谱技术应用于抗生素的分离纯化方面，我国与国际上发展趋势相比还存在很大差距，相关论文甚少，因此，在我国开展高速逆流色谱技术分离纯化抗生素的工作有着广阔的应用和发展前景。二． 溶剂选择无论是用HPLC或CCC技术分离混合物，分离度(Rs)是一个很重要的参数，如下图所示，在HPLC中，提高分离度是通过使峰形变窄的方法达到的，而在CCC或CPC中，则是通过改进选择性来实现的，这种选择性主要取决于样品在两相溶剂中的分配系数。因此，溶剂系统的选择在CCC技术中尤为重要。 选择溶剂时要考虑到样品的极性、溶解度、电荷态和形成复合物的能力等，溶剂体系的沉降时间应小于30秒，以得到满意的固定相保留率。测定方法如下，各取2毫升平衡后的上相和下相液体移入一个5毫升的刻度玻璃管中，密封上下摇动5次后静置于水平面上并测定两相分层的时间即沉降时间。样品的分配系数K值（K=上相中样品浓度/下相中样品浓度，可由HPLC方法得出）最好在1左右，一般在0.2到2之间。以上相作固定相时为例，若K《《1，样品很快随流动相流出，达不到分离效果；若K》》1，样品出峰时间拉长，形成宽峰。由于CCC的理论塔板数在800左右，因此要得到高的分离度，样品各组分间的分离因子( , 各组分的K值之比)应大于1.5。此外，两相溶剂的体积应尽量相同以避免溶剂的浪费，溶剂最好挥发性强，这样完成操作后只要将洗脱液浓缩即可得到纯样品。 选择溶剂体系时，首先选出一个能使样品全部溶解的溶剂体系，然后调整各溶剂的比例使得被分离各组分满足K值和 值的要求，以提高分离度。可以采用相图来研究改变某一相的组成对另一相组成的影响，Sø rensen等人对近百种三元溶剂相图研究后，总结归纳出三类溶剂体系：乙酸乙酯—正丁醇—水(EtOAc—BuOH—H2O)，适用于极性弱的样品；水—二甲亚砜—四氢呋喃(H2O—DMSO—THF)，适用于极性强的难溶性样品如两性霉素B；氯仿—甲醇—水(CHCl3—MeOH—H2O)，适用于大部分样品。此后又发展了其它通用的多元溶剂体系如正戊烷—乙酸乙酯—甲醇—水(Heptane—EtOAc—MeOH—H2O)体系和正戊烷—甲醇—甲基叔丁基醚—甘醇二甲醚—水(Heptane—MeOH—MtBE—Glyme—水)体系等。常用溶剂体系的选择可参考表1，首先根据样品的理化特性选出最佳溶剂，然后在左右两栏中再选择相应的数种溶剂，以组成选择性最好的多元溶剂体系。

[font=宋体]蛋白纯化采用多种色谱技术，根据其性质的差异将产物分离。标签蛋白便于用亲和色谱法处理，亲和色谱法根据蛋白标签的生物识别来捕获靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在所有色谱技术中，亲和色谱法占主要地位。事实上，亲和色谱是最特异、最有效的蛋白纯化技术，为靶蛋白纯化提供了合理的依据。它利用了生物分子识别的原理，即生物活性大分子与亲和配体形成特定的可逆复合物的能力。随着高价值蛋白的传统纯化方案被基于亲和色谱等先进的方法所取代，人们的关注重点转向了设计和选择具有高亲和力和特异性的配体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]从用于生化表征的浓缩蛋白提取物的制备到治疗性重组蛋白的大规模生产，任何纯化过程都需要经济且足量地获得纯化蛋白。因此，下游处理面临的挑战是高产能、高分辨率和高成本效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和色谱法适用于基于高特异性相互作用的生化混合物的分离。在纯化过程中可以利用具有明确特性的靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换色谱法是一种常见的蛋白纯化方法，该方法基于与离子交换器的亲和力分离离子和极性分子。可溶性分子在通过色谱柱时与带相反电荷的不溶性固定相结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尺寸排阻色谱法，根据分子的大小和分子量分离分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]疏水作用色谱分离表面有疏水氨基酸侧链的靶蛋白，与疏水基团相互作用并结合在一起。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]下面是不同纯化方法的优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、亲和色谱法：[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：生物识别[/font][font=宋体]应用：受体和配体，酶和底物，抗原和抗体[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①一次能够分离一种特定的蛋白[/font][font=宋体]②高回收率[/font][font=宋体]③快速分离[/font][font=宋体]缺点：要求配体具有高选择性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、离子交换色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：电荷[/font][font=宋体]应用：带电分子[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高准确度和精度[/font][font=宋体]②高基质耐受性[/font][font=宋体]③高选择性[/font][font=宋体]缺点：柱间不一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、尺寸排阻色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：大小[/font][font=宋体]应用：大分子，大分子复合物[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高回收率[/font][font=宋体]②明确的分离时间[/font][font=宋体]③可获得窄条带[/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]MW [/font][font=宋体]的需求存在差异[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、疏水作用色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：疏水性[/font][font=宋体]应用：表面具有疏水氨基酸侧链的蛋白和多肽[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高选择性[/font][font=宋体]②温和、非变性条件[/font][font=宋体]缺点：相互作用强[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification][b]蛋白纯化方法[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font][font=Calibri] [/font]

目前，新药研发市场竞争如火如荼，大小药物研发公司都在奋力一搏，但是真正能成功的如凤毛麟角。本公司提供制备色谱分离纯化包括SFC手性、非手性服务，反相制备，杂质制备服务及技术咨询服务可以真正加快你得到你的目标化合物的速度。欢迎大家跟帖

[b][color=#333333]一、[/color]机械工程师[/b]职位要求(Job Requirements):1、机械类相关专业毕业，大学本科及以上学历，2年以上工作经验； 2、能够熟练运用PRO/E、Solid Works、AutoCAD等相关绘图软件，进行三维建模及绘制零部件的工程图、装配图；掌握行业设计规范，能独立进行机械相关设计（包括结构设计）； 3、能够熟悉机械材料性能、加工工艺、组装调试过程； 4、有仪器外壳设计加工、仪器生产过程中组装、调试经验者优先； 5、工作态度认真积极，主动性强，具备技术专业人员严谨的科学态度； 6、较强的团队合作精神，善于沟通，强烈的责任感。职责描述(Essential Duties & Responsibilities):1、负责仪器机械结构的设计、加工、组装调试和改进； 2、根据仪器需求设计工装夹具； 3、负责指导仪器生产过程中组装、调试，解决产品生产组装过程中的技术问题，生产中的技术支持； 4、编写相关技术文档，协助领导完成仪器开发与生产的其他工作。[b]二、软件工程师[/b]职位要求(Job Requirements):1、计算机、软件、电子信息或自动化控制等相关专业毕业，大学本科及以上学历； 2、熟悉软件开发流程及模块化设计，能够熟练独立使用C、C++、C﹟、Labview等编程工具中的一种或以上进行仪器控制软件开发、调试和代码优化升级； 3、熟悉仪器控制的各种上、下位机的接口通讯技术、数据采集和传输； 4、需有2年以上液相色谱控制软件开发相关工作经验； 5、工作态度认真积极，主动性强，具备技术专业人员严谨的科学态度； 6、较强的团队合作精神，善于沟通，强烈的责任感。职责描述(Essential Duties & Responsibilities):1、负责液相色谱仪器控制软件设计开发、测试、优化、升级及维护； 2、负责与仪器工程师共同进行需求调研、业务流程分析，参与仪器控制软件的整体规划与实施，独立完成软件代码撰写； 3、负责软件开发设计文档撰写、源代码等开发资料的整理； 4、完成领导分配的其他相关工作；[b]三、技术工程师[/b]职位要求(Job Requirements):1、分析化学、药学、生物相关专业本科及研究生以上学历； 2、具备HPLC较好的理论基础，有1-2年HPLC实验室相关经验者优先； 3、工作态度认真积极，主动性强，具备技术专业人员严谨的科学态度； 4、较强的团队合作精神，善于沟通，强烈的责任感。职责描述(Essential Duties & Responsibilities):1、负责医疗诊断产品线QC内控标准的建立； 2、负责编写相关SOP操作文件； 3、协助领导进行实验室试剂及耗材的管理和请购工作，规范实验室的管理； 4、负责本部门色谱柱入库、出库、使用、测试和报废的管理工作；5、协助领导建立相关质量管理体系。[b]四、纯化实验员[/b]职位要求(Job Requirements):1、生物、化学、发酵工程等相关专业，本科及以上学历； 2、具有相关研发经验，有相关工作经验佳； 3、熟悉多种纯化方法，能够制定简单的纯化策略，配合生产部门或客户的放大生产； 4、了解生产规程以及质量标准，提供符合法规的记录文件； 5、了解技术转移的法规要求； 6、能承受较大的工作压力，有较强的团队合作精神。职责描述(Essential Duties & Responsibilities):1、按照要求进行项目纯化实验，并分析实验数据； 2、及时撰写实验记录并完成工作总结； 3、和客户一起开发纯化工艺； 4、遵守公司保密制度，不泄露公司研发和技术秘密。[b]五、工业纯化技术工程师[/b]职位要求(Job Requirements):1、生物、化学、制药相关专业，硕士学历（大分子方向）； 2、植物、分析化学、生物化工、化学、药学相关专业，硕士学历（小分子方向）； 3、熟悉多种纯化方法，能够制定纯化策略； 4、熟悉生产规程以及质量标准； 5、能承受较大的工作压力，有较强的团队合作精神。职责描述(Essential Duties & Responsibilities):1、完成公司下达的研发任务，能独立查阅文献资料，进行纯化路线设计； 2、负责新的纯化工艺的研发； 3、针对项目要求进行项目纯化实验，并分析实验数据； 4、及时撰写实验记录并完成工作总结；5、协调研发部门和技术部门所需的产品生产和工作；6、为工业纯化客户提供技术支持、服务；7、遵守公司保密制度，不泄露公司研发和技术秘密。[b]六、工业纯化业务开发部项目经理[/b]职位要求(Job Requirements):1、制药、生物医药、生物工程及相关专业，硕士及以上学历；2、具有至少3年销售经验，有纯化相关技术经验优先；3、了解常规色谱模式，能够就简单的纯化策略与客户进行沟通；4、能承受较大的工作压力，有较强的团队合作精神。职责描述(Essential Duties &Responsibilities):1、系统开发整合客户资源，全面负责特定领域内工艺及产品的推广与销售，完成销售目标；2、快速明确客户需求，准确把握业务机会，推动项目开展；3、建立和维护良好的客户关系；4、积极掌握市场动态，总结市场发展趋势，为公司投入方向提供信息支持；5、能够适应经常出差。[b]有兴趣的版友请私信联系，或者直接发简历到[color=#333333]hr@sepax-tech.com.cn[/color]，注明是仪器信息网的版友或版友推荐人员可优先安排面试。[/b]

如题，凝胶色谱和蛋白质纯化仪有什么区别？互相能替代吗？在原理方面，应用方面，等等。最好能说具体些。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]换了纯化器以后谱线很乱，很杂是什么原因

反相色谱分离纯化后，怎样去除流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？

制备色谱可以分离纯化地质样品中的金属离子吗

我在做一个生物样品，成分十分复杂，想用凝胶色谱纯化我的样品，不知可行否？如果可行是不是我进样越少出峰时间的范围就越小阿，谢谢

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=41260]反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备[/url]