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[font='calibri'][size=13px]10种免疫荧光检测方法详解!从入门到专业![/size][/font]免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括,细胞固定和通透,封闭,孵育一抗,二抗等。除了这些基本步骤,接下来的实验方法希望可以帮到您。1. 细胞固定和通透为达到蕞佳的检测效果,细胞需要经过固定和通透。步骤很重要,细胞和抗原需要保证蕞佳的结构,并利于抗体与抗原结合。通常情况下,2. 抗体特异性免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体,可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下,纯化抗体的效果很好,但是正确的对照可以帮助精-准定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照,有利于减少降低背景干扰。3. 合适的抗体稀释比例通过优化抗体稀释比例来优化染色,通常情况下 1ug/ml 的纯化抗体或者 1:100-1:1000 的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能保证低背景染色的前提下,可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是第1次使用该抗体或测定某抗原,强烈建议浓度梯度实验。4. 优化缓冲液和封闭剂尽管很多抗原在常见的 Buffer 如 PBS 中可以很好的被染色,但是对于某些目的抗原,更换一下含有不同离子的缓冲液,比如钙、镁、钾等,可以带来很大程度上的改善。Rockland 可提供优化过的 IHC 用封闭缓冲液,同样适用于荧光染色实验。5. 选择正确的二抗如果您需要做免疫实验,我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单染实验;如果是双重甚至是多重染色,那么必须使用预吸附的二抗。同时,请优先选择来自同一物种的二抗。6. 使用合适的细胞密度选择合适的细胞数量进行染色,当细胞数量过多时,细胞结构不好,导致染色背景深,低细胞密度,会使细胞贴壁不佳,状态不好。7. 多重染色对同一样本进行两个不同抗原的检测时,可以用各自的抗体进行同时染色,但要求两个一抗的种属来源不同,标记物不同,而二抗的种属来源需保持一致。8. 降低背景高背景是免疫荧光常见的问题,解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液,降低抗体浓度,增加洗涤次数,洗涤至少三次,每次五分钟,推荐洗涤液为 PBS+0.05%Tween。9. 封片作为免疫荧光的蕞后一步,可以提高折射率,保护样品。10. 数据分析观察整体样片时,选择具有代表性的细胞进行数据获取与分析。以上是10种检测方法,但是针对免疫荧光检测服务,推荐义翘神州,服务优势:①技术员长期从事抗体质量控制工作,经验丰富。②拥有包括Nikon A1激光共聚焦显微镜等重要仪器,可满足您对样片、活细胞等样本的静态和动态观察拍摄。③检测结果准确、重复性高,实验结果可直接用于论文发表。更多免疫荧光检测服务详情可以参看https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service
[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]([/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体])是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合,以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化,是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原,原理相似,只是显色剂不同,免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理,即抗原和抗体特异性结合的原理,通过化学反应确定组织细胞中的抗原,使标记有抗体的显色试剂显色,并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中,常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素,被标记在抗体或抗原上,然后与其对应的抗原或抗体结合,在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一,具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足,技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断,以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台,为客户提供高质量的免疫荧光检测服务,包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光([/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体])检测服务和石蜡切片免疫组化([/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体])检测服务,有需求的朋友可以来义翘官网进行查询,详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]
十万火急!谁有梅里埃的全自动免疫荧光检测仪