推荐厂家
暂无
暂无
【作者】 蔡俊安(河南百年康鑫药业有限公司)【摘要】 目的建立测定冬凌草糖浆的冬凌草甲素含量的高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(50∶50)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为239 nm。结果冬凌草甲素进样量在0.093~0.746μg范围内与峰面积积分值线性关系良好,回归方程为Y=413 933.35-63 428.66 X,r=0.999 7(n=5);平均加样回收率为99.0%,RSD为1.06%(n=5)。结论该法简便、准确、专属性和重复性好,为冬凌草糖浆中冬凌草甲素的定量分析提供了科学有效的方法。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208211753_385117_1609970_3.jpg
[size=15px][font=宋体][color=black]冬凌草乙素[i][/i]([/color][/font][font=&][color=black]Ponicidin[/color][/font][font=宋体][color=black])是从中药冬凌草([/color][/font][i][font=&][color=black]Rabdosia rubescens[/color][/font][/i][font=宋体][color=black])中提取的二萜类化合物,具有免疫调节、抗炎、抗病毒和抗癌等多种活性。尽管冬凌草乙素对多种恶性肿瘤有疗效,但其与肝细胞癌([/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black])相关的确切功能和作用机制仍然未知。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]冬凌草乙素体外显著抑制肝癌细胞增殖和迁移,体内抑制肿瘤生长并促进肿瘤细胞凋亡。[/color][/font][font=宋体][color=red]机制上,冬凌草乙素靶向[/color][/font][font=&][color=red]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=red]([/color][/font][font=&][color=red]E3[/color][/font][font=宋体][color=red]泛素连接酶)并促进[/color][/font][font=&][color=red]Keap1-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=red]复合物形成,介导[/color][/font][font=&][color=red]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=red]的泛素化降解。此外,冬凌草乙素通过[/color][/font][font=&][color=red]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=red]激活半胱氨酸依赖性线粒体通路,导致线粒体损伤和[/color][/font][font=&][color=red]ROS[/color][/font][font=宋体][color=red]产生,从而促进肝癌细胞线粒体凋亡。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [align=center] [/align] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、冬凌草乙素抑制[/color][/font][font=&][color=#0070c0]HCC[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]细胞的增殖和迁移[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [align=center] [/align] [size=15px][font=宋体][color=black]作者首先通过体外实验发现能以剂量依赖性方式有效抑制[/color][/font][font=&][color=black]HepG2[/color][/font][font=宋体][color=black]细胞[i][/i]的增殖和迁移。为了确定冬凌草乙素的靶标,作者合成生物素标记的冬凌草乙素([/color][/font][font=&][color=black]Bio-Ponicidin[/color][/font][/size][font=宋体])开展[/font][font=宋体]Pulldown[/font][font=宋体]实验,通过质谱鉴定[/font][font=宋体]Keap1[/font][font=宋体]蛋白([/font][font=宋体]Kelch-like ECH-associated protein 1[/font][font=宋体],[/font][font=宋体]Keap1[/font][font=宋体],[/font][font=宋体]E3[/font][font=宋体]泛素连接酶的底物识别亚单位)为冬凌草乙素的可能靶标。[/font] [align=center] [/align] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]在[/color][/font][font=&][color=#0070c0]HCC[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]组织样本中上调[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]接着,作者利用[/color][/font][font=&][color=black]TCGA[/color][/font][font=宋体][color=black]数据库发现[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]高表达与[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]患者较低的生存率有关,并利用[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]组织芯片发现肝癌组织中[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]的表达高于癌旁组织,结果表明[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]在[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]发病机制中具有潜在作用。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白是一种重要的调节蛋白,可以通过与其他蛋白质相互作用来调节细胞内信号通路,于是作者通过文献检索发现[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]是一种与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]互作的重要蛋白质,且前面的[/color][/font][font=&][color=black]Pulldown[/color][/font][font=宋体][color=black]实验也显示[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]被拉下。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=&][color=black]TCGA[/color][/font][font=宋体][color=black]数据库分析显示[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]高表达与[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]存活率较低相关,组织芯片显示[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]组织中的[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]表达高于癌旁组织,且与较高的病理分级相关,结果表明[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]同样在[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]发病机制中具有潜在作用。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]进一步作者通过人类蛋白质组微阵列[i][/i]检测冬凌草乙素的直接靶蛋白,发现冬凌草乙素与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]直接结合而不与[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白结合,结果表明冬凌草乙素可能直接与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]结合并影响[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black],从而在[/color][/font][font=&][color=black]HCC[/color][/font][font=宋体][color=black]中发挥药理作用。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [align=center] [/align] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]3[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]和[/color][/font][font=&][color=#0070c0]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]相互作用的结构基础[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]可以与[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]结合,然而,它们结合的结构基础尚不清楚。为了观察[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]结合过程的动态变化,作者通过分子动力学模拟发现[/color][/font][font=&][color=black]Keap1-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]复合物的结构总体上保持稳定,且[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]上的[/color][/font][font=&][color=black]Val78[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]Glu79[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]Ser80[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]Glu83[/color][/font][font=宋体][color=black]氨基酸与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]的[/color][/font][font=&][color=black]Kelch[/color][/font][font=宋体][color=black]结构域相互作用。采用[/color][/font][font=&][color=black]AlphaFold3[/color][/font][font=宋体][color=black]算法来预测[/color][/font][font=&][color=black] Keap1-PGAM5 [/color][/font][font=宋体][color=black]的相互作用,发现复合物的总体预测折叠与真实结构相似。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [align=center] [/align] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]4[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]Keap1-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]配合物中晶体整体结构及相互作用的洞察分析[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]为了更好地理解[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]相互作用的分子机制,作者进行了结构生物学实验。通过晶体学实验获得了[/color][/font][font=&][color=black]Keap1-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]配合物的结构,分析得到两者的结合模式和结合位点,并通过蛋白点突变后的[/color][/font][font=&][color=black]ITC[/color][/font][font=宋体][color=black]实验发现[/color][/font][font=&][color=black]Glu79[/color][/font][font=宋体][color=black]是[/color][/font][font=&][color=black]Kelch[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]结合的关键残基。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]进一步作者通过[/color][/font][font=&][color=black]SPR[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]CETSA[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]Co-IP[/color][/font][font=宋体][color=black]、[/color][/font][font=&][color=black]EMSA[i][/i][/color][/font][font=宋体][color=black]等实验验证冬凌草乙素和[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]的[/color][/font][font=&][color=black]Kelch[/color][/font][font=宋体][color=black]结构域结合,而不能和[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]的[/color][/font][font=&][color=black]?54-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]([/color][/font][font=&][color=black]54-289[/color][/font][font=宋体][color=black]号氨基酸)突变蛋白结合。[/color][/font][font=&][color=black][/color][/font][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]考虑到[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]是一种[/color][/font][font=&][color=black]E3[/color][/font][font=宋体][color=black]连接酶,促进蛋白质的泛素化和降解。作者发现冬凌草乙素可以增加[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]的泛素化,增加[/color][/font][font=&][color=black]Keap1-PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]蛋白共定位,表明冬凌草乙素可以与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]结合,从而促进[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=black]与[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]的互作,促进[/color][/font][font=&][color=black]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=black]的泛素化。 [/color][/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]冬凌草乙素影响[/color][/font][font=&][color=#0070c0]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]的[/color][/font][font=&][color=#0070c0]Kelch[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]结构域的变构来稳定[/color][/font][font=&][color=#0070c0]Keap1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]与[/color][/font][font=&][color=#0070c0]PGAM5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]结合[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体][color=black]进一步通过分子对接模拟发现冬凌草乙素可以与[/color][/font][font=&][color=black]Keap1[/color][/font]
[align=center][b][font=宋体]虫草浓缩液中虫草酸和虫草素测定方法[/font][/b][/align][size=18px][font=宋体]虫草浓缩液由虫草水提物制得,用于化妆品原料。客户想测虫草浓缩液中虫草酸和虫草素,虫草酸又名甘露醇。[/font][font='Times New Roman','serif']1 [/font][font=宋体]试剂:乙腈(色谱级),超纯水,甲醇(分析纯),虫草酸和虫草素均购置北京索莱宝公司。[/font][font='Times New Roman','serif']2 [/font][font=宋体]标准品配制:称取一定量的虫草酸,用纯水溶解,定容,得到浓度为[/font][font='Times New Roman','serif']150 μg/mL[/font][font=宋体],待测;[/font][font=宋体]虫草素,用甲醇溶解,定容,得到浓度为[/font][font='Times New Roman','serif']220 μg/mL[/font][font=宋体],待测;[/font][font='Times New Roman','serif']3 [/font][font=宋体]样品制备:[/font][font='Times New Roman','serif']3.1 [/font][font=宋体]精密量取[/font][font='Times New Roman','serif']0.5 mL[/font][font=宋体]虫草浓缩液,分别用水定容至[/font][font='Times New Roman','serif']10 mL[/font][font=宋体]测定虫草酸,用甲醇定容至[/font][font='Times New Roman','serif']10 mL[/font][font=宋体]测定虫草素,过[/font][font='Times New Roman','serif']0.45 μm[/font][font=宋体]滤膜,待测。[/font][font='Times New Roman','serif']4 [/font][font=宋体]虫草素[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]条件:[/font][font='Times New Roman','serif']LC-20AT[/font][font=宋体]配制紫外检测器,[/font][font=宋体]波长:[/font][font='Times New Roman','serif']260 nm [/font][font=宋体];进样量:[/font][font='Times New Roman','serif']5μL[/font][font=宋体];色谱柱型号:[/font][font='Times New Roman','serif']Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250mm, 5 μm)[/font][font=宋体];柱温:[/font][font='Times New Roman','serif']30.0 [/font][font=宋体]℃;流速:[/font][font='Times New Roman','serif']0.8 mL/min[/font][font=宋体];流动相条件如表[/font][font='Times New Roman','serif']1[/font][font=宋体]:[/font][/size][align=center][img=,551,185]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310311641477076_4077_1858223_3.jpg!w551x185.jpg[/img][/align][font='Times New Roman','serif'] [/font][size=18px][font=宋体]虫草酸[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]条件:[/font][font='Times New Roman','serif']Angilent infinit1260[/font][font=宋体]配制示差检测器,进样量:[/font][font='Times New Roman','serif']5[/font][font=宋体]μ[/font][font='Times New Roman','serif']L[/font][font=宋体];色谱柱型号:[/font][font='Times New Roman','serif']Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm[/font][font=宋体]×[/font][font='Times New Roman','serif']250 mm, 5 μm)[/font][font=宋体];[/font][font=宋体]柱温:[/font][font='Times New Roman','serif']30.0 [/font][font=宋体]℃,;流动相条件乙腈:纯水[/font][font='Times New Roman','serif']=80:20[/font][font=宋体];流速:[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mL/min[/font][font=宋体]。[/font][/size][align=center][img=,690,265]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310311642440362_8441_1858223_3.jpg!w690x265.jpg[/img][/align][align=center][b][font=宋体]虫草素标准品色谱图[/font][/b][/align][align=center][img=,683,269]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310311642555977_2623_1858223_3.jpg!w683x269.jpg[/img][/align][align=center][b][font=宋体]虫草浓缩液中虫草素色谱图[/font][/b][/align][b][font=宋体]结果:虫草浓缩液中虫草酸含量([/font]7.65 mg/mL [font=宋体]),虫草素含量([/font]2.65[/b][font='Times New Roman','serif']μg/mL[/font][b][font=宋体])。[/font][font=宋体]小结:测定虫草素的过程中发现流动相梯度洗脱,回到起始梯度是需要平衡时间久一些,虫草素含量较低,虫草酸含量比较高。示差检测器也是进样前需要稳定[/font]2[font=宋体]小时左右,才能保证实验数据稳定性。[/font] [/b]