极低丰度蛋白

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极低丰度蛋白相关的耗材

  • 白蛋白去除离心柱IgG
    使用即用型的预装柱和离心柱形式,方便快捷的从更大体积人血清样品中(~150 μl)选择性的去除95%以上的白蛋白和IgG。;高的去除效率和高重复性,能去除95%的白蛋白和90%的IgG。;改善了人血清中低丰度蛋白的检测。;操作简单快捷。;预装柱Hitrap提供快速简单的流程可以处理150ul大体积的样品,可连在系统上也可以手动注射器操作。;离心柱SpinTrap可利用标准的离心机来处理较小体积50ul的样品。
  • 白蛋白&IgG去除预装柱
    使用即用型的预装柱和离心柱形式,方便快捷的从更大体积人血清样品中(~150 μl)选择性的去除95%以上的白蛋白和IgG。;高的去除效率和高重复性,能去除95%的白蛋白和90%的IgG。;改善了人血清中低丰度蛋白的检测。;操作简单快捷。;预装柱Hitrap提供快速简单的流程可以处理150ul大体积的样品,可连在系统上也可以手动注射器操作。;离心柱SpinTrap可利用标准的离心机来处理较小体积50ul的样品。
  • 赛默飞 蛋白酶解后肽图分析色谱柱 | 059131
    产品特点:?Acclaim 120 C18 色谱柱使用 Thermo Scientific Acclaim 120 C18 色谱柱,可提高反相色谱应用的分离效率。这些色谱柱的特点是采用金属含量极低的超纯硅胶基质,从而最大限度减小拖尾效应并获得对称峰形。这种独特的化学键合可获得极佳的表面覆盖效果,进而提供不受次级相互作用影响且预测性高的色谱分离。在不同种类的多项应用中,使用这些高效率色谱柱均可达到最高分离度。Acclaim Polar Advantage II LC 色谱柱采用 Thermo Scientific Acclaim PolarAdvantage II (PA2) 反相色谱柱可在单次样品运行中分离极性和非极性化合物。这些高效、硅胶基质的色谱柱拥有极性嵌入键合固定相,与传统反相固定相相比,可以在更广泛的色谱条件下工作。其独特的化学特性提供了增强的水解稳定性,pH 1.5–10,100% 水流动相。该色谱柱表现出选择性,与传统 C18 色谱柱互补,分析碱性和酸性化合物时峰形出色。订货信息:蛋白酶解后肽图分析色谱柱Acclaim 120 3 μm C18键合相2.1×50 mm2.1×100 mm2.1×150 mm4.6×50 mm4.6×100 mm4.6×150 mmC18059128059129059130059131059132059133PAII C18077999077998063187063189078001063191Acclaim120 5 μm C18保护柱 (2/PK)键合相2.1×100 mm2.1×150 mm4.6×100 mm4.6×150 mm4.6×250 mm2.1 mm4.6 mmC18059143059144059147059148059149069689069695PA II------063197063199069692069699

极低丰度蛋白相关的仪器

  • 岛津集团发布新型PPSQ-51A单反应器蛋白测序仪和PPSQ-53A三重反应蛋白测序仪。 新PPSQ-51A / 53A蛋白质测序仪采用岛津SPD-M30A光电二极管阵列检测器,配有新型毛细管流通池,灵敏度是原型号标准检测池的10倍,能进行较长序列的蛋白质研究。 主要特点:1、在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸的分析,等度序列分析提供更稳定的保留时间。这意味着可以使用色谱减法取消在以前的周期中检测到的峰,方便用户识别正确的氨基酸。在等度洗脱模式下进行PTH-氨基酸分析也使实验室通过流动相回收减少废液的浪费,降低运行成本。2、操作简单,专业的蛋白质测序仪将对反应单元和高效液相色谱分析单元提供控制功能,便于进行序列分析。3、新PPSQ软件可配置为满足实验室的各种需要,无论是监管、研究和开发,还是学术。该软件符合FDA 21 CFR Part 11指南对安全、用户管理和审计跟踪的要求。易于使用的数据分析功能,简化操作,数据处理和报告。这些功能允许色谱的后处理、多重色谱的叠加、色谱减法、和氨基酸序列的自动估计。此外,PPSQ-51A / 53A音序器提供定制的报告,并对数据进行快速、全面的的图形显示。拥有以前机型的客户(31A/33A/51B/53B)可以升级现有系统为相同灵敏度,并能拥有和PPSQ-51A / 53A一样的软件。升级包在有高层次的灵活性以及数据库的标准版和客户端服务器版本中都可以使FDA 21 CFR Part 11合规。
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  • 核酸蛋白检测仪 400-860-5168转1212
    仪器简介:核酸蛋白检测仪-仪器说明   TBD-3000型核酸蛋白检测仪系我公司新开发的紫外检测仪,采用双光束设计,具有稳定时间短,抗温度干扰,极低漂移性能等特点。TBD-3000 核酸蛋白检测仪可以和恒流泵, 部分收集器和记录仪配套使用, 能对溶液中的蛋白质、酶、核苷酸、多肽等有吸收作用的成分作定性分析,广泛用于生化研究, 生物工程, 医疗检验, 药物测定, 农业科研, 化工食品等科学领域。技术参数:核酸蛋白检测仪-主要技术指标: 检测波长: 214、230、260、280nm;可根据不同需要定制 噪声电平: = 0.0004A 漂移: = 0.002A/n (外界温度恒定) 光程: 3mm 样品池容积: 212ml, 吸光度显示: 128× 32 LCD液晶显示 功率消耗: =25W 电源电压: 220V± 10% 50Hz 工作温度范围: 0---40℃ 环境相对湿度:70% 外形尺寸: 360 X 160 X 255 mm3 重量: 4kg 采用双光束设计,具有稳定时间短,抗温度干扰,极低漂移性能; 点击这里查看更多! 主要特点:核酸蛋白检测仪-测量原理 TBD-3000型核酸蛋白检测仪是利用不同核酸、蛋白分子结构对特定波长的光具有选择性吸收的原理制成的。当溶液浓度较稀的情况下, 光与物质相互作用时, 其对光的吸收大小遵循郎伯&mdash 比尔定律, 即光吸收律。    用公式表示:    A=-lg(1/T)=KCL    其中: T=I/I0    式中: A--------为吸光度      T--------为透光率      I0--------为照射到溶液上的入射光      I---------为透过溶液后的出射光      K--------为吸光系数      C--------待测溶液浓度      L--------为光程      测得吸光度A, 就可得溶液浓度。
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  • 恒奥德仪器 鸡蛋鲜度仪 蛋品分析仪蛋白度计蛋白度 型号H17934 蛋质测定仪介绍:蛋质测定仪使用方便,只需将仪器 平稳设置在测定台面上,转动中央测定 针即可快速,准确读出浓厚蛋白度。 测定度为 1/100mm。根据浓厚蛋白测 定结果,使用蛋质计算尺即可快速推算 出哈氏单位(Haugh Unit)哈氏单位是根据蛋重和浓蛋白度,按公式计算出其标的种方法,可以衡量蛋白品质和蛋的新鲜程度,它是现在际上对蛋品质评定的重要标和常用方法。 新鲜蛋的哈夫数在 80 以上。随着存放时间的延长,由于蛋白质的水解,使浓厚蛋白变稀,蛋白度下降,哈夫单位变小。当哈夫单位小于 31 时则为次蛋。 蛋白度计参数:1、数字显示,测量范围 0.00-12.00mm2、具有调节按钮,通过调节,测量蛋白的度3、测量的确度为 0.01mm4、单位可提供 inch、mm 两种选择5、蛋白度测量表具有控制开关6、尺 寸 Dimension:(height)180mm 2.新品液晶显示智能磨音测量仪/磨音测量仪/智能磨音检测仪/电耳 MCY-7 、作原理: 智能磨音测量仪通过安装在现场的特殊结构的探头,接收磨机发出的噪声,经屏蔽电线传输到仪器。转换为数字百分比显示,同时输出与显示值成比例的4~20mA电流信号供后端DCS 系统采集使用。显示物料位值与磨内物料填充量成正比,反比于磨机发出的噪声,因此它能定量的测盘磨机负荷的大小。操作人员可以根据磨音的低控制各种入磨原料的流量,从而实现对磨机负荷的控制,使磨机产量提,电耗低。其内具有矫正信号源,以便维护人员检查维护,并具有饱磨空磨声光报警装置,可以提醒操作人员及时作出处理。 二、性能标:1、测量范围:000%~2、探头阻抗:600Q±15%3、频响:50~18,000HZ4、频率范围20~16000Hz5、灵敏度:-34~-49dB(0dB=1V/Pa,1KHz)6、信 噪比≥58dB7、模拟输出两路标准4~20mA8、数字输出 RS-485故障安9、测量误差:±0.1%10、恒流度: 负载变化时,输出电流变化优于0.5%11、防护等:IP6512、作温度:-20℃~60℃13、环境湿度:85%14、电源电压:输入:50Hz,~220V±15%15、机箱尺寸:x宽x深73x150x160mm16、带负载能力:2K 3.数显邵氏A型硬度计 橡胶硬度仪 型号:HAD-E5430 1.概述 HAD-E5430本仪器是种数字式邵氏硬度测量设备,能快速准确地测量塑料、软橡胶、合成橡胶、打印胶辊等材料的硬度。产品依据邵氏硬度测量原理及邵氏硬度定义,结合微电子术、集测量装置和数据处理于体,具有测值准确、操作简单、体积小、重量轻、携带方便等优点,在化和橡胶行业有广泛应用。 本仪器符合以下标准:GB/T531-92 、JJG304-2003、HG2368-92 1.1产品特点 数字式A型邵氏硬度计,适合测试塑料、软橡胶、打印机滚轴和其他弹性材料的硬度; 位移传感器内置,体积小,抗干扰能力强; 主机重量轻,体积小,操作简单,携带方便; 1.3英寸OLED显示屏,128×64图形点阵,信息显示清晰; 具有实时测量和峰值锁存两种作模式,满足实际测量需求; 可储存200个峰值锁存测量平均值; 带有USB接口,方便与计算机的连接; 可配备数据处理软件,测量数据能以Microsoft Word 或Excel格式传输到上位机,满足质量保证活动和管理的更要求; 峰值锁存模式下,可预设测值上、下限,限有显示提示,方便用户批量检测; 带有电压显示和欠压提示,有欠压自动关机能; 具有无操作自动关机能,且自动关机时长可调,也可根据需要关闭此能。 术参数 硬度标尺:A型 测量范围:0~100HA 测量误差:≤±1HA(20~90HA范围内) 分辨力:0.1HA 电源:内置可充电锂电池。 3.2尺寸及重量 外形尺寸:173×56×42(mm) 重量:约175g 4.氧化锌避雷器测试仪 MOA电压测试仪 型号:YBL-II 、概述 YBL-II氧化锌避雷器测试仪是用于检测10kV及以下电力系统用无间隙氧化锌避雷器MOA阀电间接触不良的内缺陷,测量MOA的直流参考电压(U1mA)和0.75 U1mA下的泄漏电流。该仪器将直流压电源、测量和控制系统组成体,元件浓缩在个机箱内,具有体积小,重量轻等特点,是电力系统以及氧化锌避雷器生产厂现场试验的设备。 二、产品术参数 1、测量范围:电压0~30kV 电流:0~1000μA 2、测量度:电压1% 3、环境温度:0~+40℃ 4、相对湿度:25℃时≤85% 5、海拔度:<1000M 6、电源电压:220V±10% 7、电源频率:50±1HZ 5.台式ATP荧光快速检测仪 ATP荧光检测仪 细菌检测仪 型号:DP-TSD 、操作原理生物荧光检测仪利用生物化学发光术将不可见的ATP浓度变为可见光输出,从而以定量的结果间接显示微生物数量,数值位于0-999999之间,以相对光单位RLU表示虽然RLU并不是个实实在在的光强度单住,但它能够为ATP生物化学发光检测提供种真实的检测方法。1RLU约等于1fmol的 ATP。RLU读数可以与用户设定的限值范围相,提供面的结果限值,即通过、警戒或标 术参数检测度 5X10*mol/ATP 检测范围 0到999999 RLUs 检测时间 1-60秒可选择 检测干扰 ±2 RLUs 可设定的结果限值个数 250个 存储大小 4000个检测结果 串行接口 EIA-232兼容 USB接口 操作温度范围 5℃到40℃ 相对湿度范围 20-85%, 连续读数 500个检测结果 6.恒奥德仪器 石油蜡针入度测定仪 润滑脂和石油脂锥入度测定仪 型号:H7929 H7929用途及适用范围 H7929石油蜡针入度测定仪是根据中华人民共和交通行业标准JTG E20《公路程沥青及沥青混合料试验规程》 中的T 0604 《沥青针入度试验》、中华人民共和标准GB/T 4509《石油沥青针入度测定法》、GB/T 4985《石油蜡针入度测定法》、GB/T 269《润滑脂和石油脂锥入度测定法》所规定的要求设计制的。 本仪器主要适用于测定石蜡针入度。 本仪器也可用于固体细粒、粉剂、胶体、冻体等材料,以及乳酪、糖胶、牛油、麦其淋、奶油、发酵体等食品原料检验,在食品业、交通公路程及其他业门都可广泛应用。 H7929仪器术标及参数 1、作电源: AC(220±10%)V 50Hz; 2、测量范围: (0~600)针入度; 3、分辨率: 0.01mm(0.1针入度); 4、针入时控: 5秒、8秒、10秒、12秒、30秒、60秒,时间误差小于±0.1秒; 5、加热器率: 200W; 6、控温度: 25℃±0.1℃; 7、恒温浴: 为硬质玻璃缸; 8、搅拌: 磁力搅拌子旋转搅拌; 9、适用环境: 温度:(15~35)℃,相对湿度:≤85%; 10、外形尺寸: 260mm×400mm×640mm(长×宽×); 11、仪器净重: 16kg。 7.磷酸盐测定仪 磷酸盐检测仪仪 型号:HAD-LSY 产品介绍: 仪器采用单色冷光源,利用微电脑自动处理数据,直接显示水样的磷酸盐浓度值。广泛适用于饮用水、地表水、地面水、污水和业废水的测定。 术参数: 1、测量范围:0.01~50.00mg/L 2、示值误差: ≤±5% 3、重复性 :≤3% 4、光学稳定性:仪器吸光值在20min内漂移小于0.002A 5、外形尺寸:80mm×230mm×55mm 6、重量: 500g 7、正常使用条件: ⑴ 环境温度:5~40℃ ⑵ 相对湿度: ≤85% ⑶ 供电电源: 可充锂电池 ⑷ 无显著的振动及电磁干扰,避免阳光直射。 产品特点: 1. 仪器采用冷光源、窄带干涉光学系统,光学稳定性好 2. 仪器采用性能低耗单片机,并配以容量可充电锂电池,待机时间可达6个月以上。 3. LCD大屏幕液晶汉字菜单显示,操作方便直观。 4. 仪器方便小巧,方便携带现场检测 5. 仪器除出厂直接使用曲线,用户可以自行添加曲线、标定曲线。 6. 可保存标准曲线20条及500个测定值。 7. 具有键恢复出厂能,防止曲线丢失或误删 8. 具有USB接口,可将数据传输到电脑,以文件的方式保存。 9. 数据断电保护能。 10. 主机机壳采用模压ABS材料,防腐防水防尘性能好。 8.电动土壤取样钻机 型号:HAD-H508 、产品介绍: HAD-H508电动土壤取样钻机是在参考大型液压、汽油、气动钻机的基础上设计的款轻便的土壤土壤采样器。即使没有操作经验的钻探人员,简单培训就可操作。取样过程及其简单,1到2个人即可成设备的操作。整个钻过程无需加水,保证了样品取得的质量(无污染、无扰动)。 与常规的大型钻机,HAD-H508电动土壤取样钻机携带更加方便,操作更加简单,非专业的人员即可轻松成设备的操作。在些深度要求不(10米内)、地形相对复杂、大型设备不易到达的项目现场,采用该设备是不错的选择。 与传统的手钻,HAD-H508电动土壤取样钻机取样的深度更深、取样的效率更,并且取得的是原状、基本无扰动和压缩(视地形而定)的土壤样品。在取样深度过半米、对土壤样品的质量(原状、无扰动、无压缩)要求较的项目中,采用该设备是不错的选择。 二、详细参数: 1、电动主机: 电压:220V 率:3.6KW 打火方式:开关式 耗能:低耗能 冲击次数:2600/M 冲击能量:60J~79J 取芯深度:0-10M 主机重量:22KG 2、标配采样钻杆不低于2米,根据实际作需要可适度增加钻杆 3、采样深度,可以连接钻杆次性采样,中途不提钻 4、钻杆:内外径不低于38mm/50mm;长度不低于1.00米/根,采用螺纹链接,易于组装和拆卸 5、钻头:取硬土质钻头、取标准土钻头各1个 6、样品管:内外径不低于34mm/35mm;长度不低于1.00米/根;配垫片 7、起拔装置:快速起拔,速度不低于3.00米/分钟,采用更加合理的人体程学设计,既可以手压也可以脚踩 8、仪器为便携式现场采样设备,适于车载。 9.数字斯计 型号:HAD-T10D 概述 1、HAD-T10D型手持式数字特斯拉计应用于磁材料表面磁场、直流电机、扬声器、磁选机、磁除铁器的作磁场的磁性测量。且可应用于检测机械加后物品残留磁性、检测磁分布、产品退磁后剩余磁场、并控制电镀物品带磁情况、检测马达磁性、检测电磁场的漏磁。 2、可配径向、轴向探头。与T10C的区别是:待机时间长,可设置自动开、关机能。大大延长了电池的使用时间。 术标 1、量程范围:0~200mT~2000 mT 频率范围:10Hz~200Hz 2、准确度:0~100mT 1%,100mT以上2%(均匀磁场中测量) 3、分辨力: DC×1 :0.00~200.00mT 0.01mT DC×10:0.0~2000.0mT 0.1mT AC×1 :0.00~200.00mT 0.01mT AC×10:0.0~2000.0mT 0.1mT 4、被测磁场:直流磁场(静态磁场) 交流磁场(动态磁场) 5、能说明:峰值保持能 6、Gs(斯)/mT(毫特斯拉)可自由切换 7、直流测量时有NS性显示。N代表正、S代表负 8、显示按键快速自动调零 9、环境温度:5℃~40℃ 10、相对湿度:20%~80%(无凝露) 11、供电电源:四节5号干电池 外接6V稳压电源 12、外型尺寸:150mm(L)×70mm(W)×30mm(H) 13、仪器重量:450g 14、显示方式:4 1/2 LCD 15、显示单位:mT/Gs 10自动苯结晶点测定仪 型号:HAD-R2100A HAD-R2100A自动苯结晶点测定仪,符合GB/T3145的标准,适用于测定结晶点在0~10℃范围的苯结晶点的测定。 该机采用混体信号ISP FLASH微控制器,整过测定过程除样品加注外自动行。真彩触摸屏,使操作更加方便、清晰、直观。 二、主要术参数 适用标准:GB/T3145 控制方式:浴体温度、试样温度、试样搅拌、结果采集、结果打印采用微电脑自动控制 做样温度:0~10±0.1℃ 制冷方式:半导体制冷 试样检测检测温度分辨率:0.01℃ 试样搅拌方式:电机机械搅拌 做样单元:双样 作电源: AC220V±10% 50Hz 整机率:1KW 作环境:相对湿度:<80% 温度:0~45℃
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极低丰度蛋白相关的试剂

极低丰度蛋白相关的方案

  • 人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)检测试剂盒
    人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)检测试剂盒人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)抗原、生物素化的人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人极低密度脂蛋白受体(VLDLR)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 杜马斯定氮仪测定乙醇梭菌蛋白中粗蛋白含量
    乙醇梭菌蛋白是用乙醇梭菌作为发酵菌种,利用含有一氧化碳的工业尾气和氨水为主要原料进行液态发酵、离心分离浓缩、喷雾干燥,人工合成的一种新型单细胞蛋白产品。乙醇梭菌蛋白饲料不仅蛋白质含量高,营养丰富,并且氨基酸结构平衡,易于动物消化,同时还具有优异的饲料蛋白质原料加工特性,富含核苷酸等功能性物质,有利于动物肠道与肝脏的健康。本实验参照《GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算》使用杜马斯定氮仪对乙醇梭菌蛋白的粗蛋白含量进行测定。
  • 杜马斯定氮仪测定玉米蛋白粉中粗蛋白含量
    玉米蛋白粉是玉米籽粒经食品工业生产淀粉或酿酒工业提纯后的副产品,其蛋白质营养成分丰富,并具有特殊的味道和色泽,可用作饲料使用,与饲料工业常用的鱼粉、豆饼比较,资源优势明显,饲用价值高,不含有毒有害物质,不需进行再处理,可直接用作蛋白原料。由于作为饲料出售价格低廉,近些年,部分企业以玉米蛋白粉为原料,从中提取玉米黄素和玉米朊,开发成功能性食品,附加值大大提高。本实验参照《GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算》使用杜马斯定氮仪对玉米蛋白粉的粗蛋白含量进行测定。

极低丰度蛋白相关的论坛

  • 【求助】求助:极低浓度的蛋白溶液问题?

    各位前辈,大虾,小弟先***!我第一次做这种实验,目的是想把一种极低浓度的蛋白溶液中的蛋白浓度测出来。查了资料,认为folin-酚法比较适合。文献报道说该法的检查限最低能到5 μg/ml。按照中国药典第三部lowry法测蛋白含量,我拿牛血清白蛋白标准品配了一个50 μg/ml的浓度和5 μg/ml的浓度。50 μg/ml的浓度的样品,能显出蓝色,但不深。5 μg/ml的浓度基本都不显示,跟空白一样。可见光检测,5 μg/ml的浓度与空白的吸收值基本一致。且为负值。问题:1、请问该法,在5 μg/ml的浓度时,是否还能显出蓝色,至少肉眼能分辨出来。2、50 μg/ml的浓度时,显出的颜色淡还是深,可见光吸收大概是多少?3、我的操作可能出现哪些问题,影响实验结果。谢谢,前辈、大虾、学长们啦!小弟贵球!!!!!

  • 【求助】求助:极低浓度的蛋白溶液问题?

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极低丰度蛋白相关的资料

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  • 五洲东方成功举办低丰度蛋白提取新技术研讨会
    2012年4月27日,伴着中国农业大学西校区中的天下真花独牡丹的争奇斗艳,北京五洲东方科技发展有限公司举办的低丰度蛋白提取新技术研讨会获得圆满成功。   积极签到  首先,五洲东方的产品专家孙福鼎先生以&ldquo A practical guide to Density Gradients and a look at their future&rdquo 为主题介绍了目前世界最先进的密度梯度制备和分离技术,特别是配合超速离心机使用的样品制备、分离收集系统引起了老师和同学们的极大兴趣并进行了热烈的讨论。报告开始沟通交流  接下来由五洲东方北方区销售总监白玮博士给众师生带来了蛋白标志物研发解决方案:低丰度蛋白的分离和富集。其着重介绍了具有突破性的生物学分析为基础的分离分组技术,报告内容深入简出,一些老师和同学根据自身实验情况与白博士进行了深入交流和沟通。 分离分组报告  五洲东方会更努力的为用户提供更全面更优质的服务!
  • 张锋《自然》重磅:首次在真核生物中找到类Cas蛋白
    近日,《自然》杂志刊登张锋团队新研究成果,研究者首次在真核生物中找到受RNA引导的核酸内切酶Fanzor(Fz),并可组装能对人类基因组进行编辑的类CRISPR/Cas系统,经初步改造编辑活性可达18.4%。该蛋白的真核起源和较小体积,都预示着它可能具有比目前CRISPR/Cas更广阔的应用场景。论文题图毫不夸张地说,CRISPR/Cas的出现为生物学发展带来了巨大的变革,起源于原核生物的CRISPR也让人好奇,是否在真核生物中也存在类似的系统。2021年,张锋团队在《科学》发文,他们发现了一种类CRISPR系统OMEGA(obligate mobile element–guided activity)。OMEGA系统由转座子末端转录的非编码RNA(ωRNA)和内切酶组成,其中3种转座子编码蛋白IscB、IsrB、TnpB是天然存在的RNA引导的核酸酶,且IscB和TnpB分别为Cas9和Cas12的可能祖先。而早在2013年,Fanzor蛋白就被报道为一种真核TnpB-IS200/IS605样蛋白,这不由得让人怀疑,Fanzor就是那个我们还未知的真核生物中的Cas。经公开遗传数据库搜索,研究者发现Fanzor蛋白广泛存在于真菌、原生生物、节肢动物、软体动物、巨病毒等物种,可分为Fz1和Fz2两种不同的独立起源,并发现了细菌TnpB向真核生物水平转移并进化为Fanzor的痕迹。与TnpB和Cas12的结构对比可以看出,Fanzor结构与它们非常相似,这无疑说明Fanzor可能具有类似的功能。Cas12、TnpB、Fanzor的结构对比研究者猜测,Fanzor可能以ωRNA 3端侧翼序列为向导RNA,在目标DNA序列执行切割功能。为此,他们构建了Fz OMEGA系统,并与质粒文库匹配进行切割实验。实验结果可见,不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式,并具有针对双链DNA(dsDNA)的特异性。不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式Fanzor表现出ωRNA引导的、TAM和靶序列依赖的dsDNA切割研究者在人类细胞中测试了Fz OMEGA的编辑效率,针对8个不同基因位点,4个Fanzor同源物中有3个表现出了可测量的编辑活性,效率最高达11.8%,总体水平与AsCas2f1相当。编辑效率最高达11.8%为提升编辑效率,研究者还尝试了修饰ωRNA和向Fanzor中引入突变。多方尝试之下,可将编辑效率最高提升至18.4%。不同修饰ωRNA(上)和Fanzor突变(下)后的编辑效率研究者还通过冷冻电镜技术分析了SpuFz1的结构,在2.7Å下可见典型的双球形结构,REC和WED结构域识别包含TAM的DNA双链,NUC和RuvC结构域则形成了类似Cas的沟槽,容纳ωRNA与DNA形成的异源双链。Fanzor结构最后,研究者还对SpuFz1的天然ωRNA结构进行了分析,确定其中tem2的区域是功能所不需的,去除后ωRNA总长为96nt,可令结构更紧凑、便于应用。ωRNA结构中tem2不影响活性不过,目前为止,研究者们还没有搞清楚Fanzor蛋白的生理功能,仅猜测与转座有关。Fanzor的真核生物起源和它相较Cas12等更小的大小,使得它有潜力成为新一代的基因编辑手段,但是它的天然功能使其可能面对在生物体内活性低、作用严重受控等问题。研究者认为,这可以通过基因工程改造来优化。今日,《自然》杂志刊登张锋团队新研究成果,研究者首次在真核生物中找到受RNA引导的核酸内切酶Fanzor(Fz),并可组装能对人类基因组进行编辑的类CRISPR/Cas系统,经初步改造编辑活性可达18.4%。该蛋白的真核起源和较小体积,都预示着它可能具有比目前CRISPR/Cas更广阔的应用场景。论文题图毫不夸张地说,CRISPR/Cas的出现为生物学发展带来了巨大的变革,起源于原核生物的CRISPR也让人好奇,是否在真核生物中也存在类似的系统。2021年,张锋团队在《科学》发文,他们发现了一种类CRISPR系统OMEGA(obligate mobile element–guided activity)。OMEGA系统由转座子末端转录的非编码RNA(ωRNA)和内切酶组成,其中3种转座子编码蛋白IscB、IsrB、TnpB是天然存在的RNA引导的核酸酶,且IscB和TnpB分别为Cas9和Cas12的可能祖先。而早在2013年,Fanzor蛋白就被报道为一种真核TnpB-IS200/IS605样蛋白,这不由得让人怀疑,Fanzor就是那个我们还未知的真核生物中的Cas。经公开遗传数据库搜索,研究者发现Fanzor蛋白广泛存在于真菌、原生生物、节肢动物、软体动物、巨病毒等物种,可分为Fz1和Fz2两种不同的独立起源,并发现了细菌TnpB向真核生物水平转移并进化为Fanzor的痕迹。与TnpB和Cas12的结构对比可以看出,Fanzor结构与它们非常相似,这无疑说明Fanzor可能具有类似的功能。Cas12、TnpB、Fanzor的结构对比研究者猜测,Fanzor可能以ωRNA 3端侧翼序列为向导RNA,在目标DNA序列执行切割功能。为此,他们构建了Fz OMEGA系统,并与质粒文库匹配进行切割实验。实验结果可见,不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式,并具有针对双链DNA(dsDNA)的特异性。不同Fanzor蛋白具有特定的切割模式Fanzor表现出ωRNA引导的、TAM和靶序列依赖的dsDNA切割研究者在人类细胞中测试了Fz OMEGA的编辑效率,针对8个不同基因位点,4个Fanzor同源物中有3个表现出了可测量的编辑活性,效率最高达11.8%,总体水平与AsCas2f1相当。编辑效率最高达11.8%为提升编辑效率,研究者还尝试了修饰ωRNA和向Fanzor中引入突变。多方尝试之下,可将编辑效率最高提升至18.4%。不同修饰ωRNA(上)和Fanzor突变(下)后的编辑效率研究者还通过冷冻电镜技术分析了SpuFz1的结构,在2.7Å下可见典型的双球形结构,REC和WED结构域识别包含TAM的DNA双链,NUC和RuvC结构域则形成了类似Cas的沟槽,容纳ωRNA与DNA形成的异源双链。Fanzor结构最后,研究者还对SpuFz1的天然ωRNA结构进行了分析,确定其中tem2的区域是功能所不需的,去除后ωRNA总长为96nt,可令结构更紧凑、便于应用。ωRNA结构中tem2不影响活性不过,目前为止,研究者们还没有搞清楚Fanzor蛋白的生理功能,仅猜测与转座有关。Fanzor的真核生物起源和它相较Cas12等更小的大小,使得它有潜力成为新一代的基因编辑手段,但是它的天然功能使其可能面对在生物体内活性低、作用严重受控等问题。研究者认为,这可以通过基因工程改造来优化。参考资料:[1]Saito, M., Xu, P., Faure, G. et al. Fanzor is a eukaryotic programmable RNA-guided endonuclease. Nature (2023). https://doi.org/10.1038/s41586-023-06356-2[2]https://www.broadinstitute.org/news/researchers-uncover-new-CRISPR-like-system-in-animals-that-can-edit-the-human-genome
  • BLT小课堂 | 蛋白芯片技术原理及应用
    概念蛋白质芯片技术是在DNA芯片技术基础上发展的一项蛋白质组学技术。其原理是将大量不同的蛋白质分子(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等)通过微阵列的形式有序排列在固相载体表面,利用蛋白质与蛋白质或者蛋白质与其他分子之间的特异性结合,获得与之特异性结合的待测蛋白(如血清、血浆、淋巴、间质液、尿液、渗出液、细胞溶解液、分泌液等)的相关信息,便于我们分析未知蛋白的组分、序列,体内表达水平、生物学功能、与其他分子的相互调控关系、药物筛选、药物靶位的选择等。蛋白质芯片技术的出现,为我们提供了一种比传统的凝胶电泳、Western blot和Elisa更为方便和快速研究蛋白质的方法。该方法具有高通量,微型化和快速平行分析等优点,不仅对基础分子生物学的研究产生重要影响,也在临床诊断、疗效分析、药物筛选及新药研发等领域有着广泛应用。特点①蛋白芯片具有高特异性、重复性、准确性。这是由抗原抗体之间、蛋白与配体之间的特异性结合决定的。②蛋白芯片具有高通量和操作自动化的特点,在一次实验中可对上千种目标蛋白同时进行检测,效率极高。③可发现低丰度、小分子量蛋白质,并能测定疏水蛋白质,特别是膜蛋白质。④蛋白芯片具有高灵敏性,只需0.5-5μL样品,或2000个细胞即可检测。蛋白芯片技术在分子生物学及生物化学基础研究中的应用01 在蛋白质水平上检测基因的表达由于基因转录产物mRNA数量并不能准确反映基因的翻译产物蛋白质的质与量,因此在蛋白质水平上检测基因的表达对于了解基因的功能非常重要。蛋白质芯片技术产生前,蛋白质双向电泳技术是蛋白质组规模上进行蛋白质表达研究的唯一方法,但这种技术操作繁琐而且难以快速检测样品中成百上千种蛋白质的表达变化。蛋白质芯片的特异性、灵敏性和高通量等特点,在检测基因表达终产物蛋白质谱的构成及变化中发挥着不可替代的作用。02 高通量筛选抗原/抗体相互作用目前蛋白质芯片检测利用最广泛的生物分子相互作用是抗原抗体的特异性识别和结合,单克隆抗体是蛋白质芯片检测中使用最广泛的生物分子。运用蛋白质芯片可以研究不同抗原/抗体的特异性作用,而且对于检测样品中极微量的抗原/抗体分子作用非常有利。03 蛋白质/蛋白质相互作用分析酵母双杂交系统是近年来基因组规模上研究蛋白质相互作用的主要方法,但存在体内操作、假阳性、假阴性和外源蛋白质折叠、修饰等局限。蛋白质芯片技术不依靠任何生物有机体而在体外直接检测目标蛋白质,实验条件可随意控制,同时实验步骤自动化程度高,一次分析的蛋白质数量巨大,因而成为目前除酵母双杂交系统外进行大规模研究蛋白质相互作用的主要方法。04 酶/底物作用分析耶鲁大学的Snyder小组用蛋白芯片对酵母基因组编码的119种蛋白激酶的底物专一性进行了研究。实验中将蛋白激酶表达为谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白,针对17种不同的底物,平行测定了119种GST2蛋白激酶融合蛋白的底物专一性,发现了许多新的酶活性,大量蛋白激酶可以对酪氨酸进行磷酸化,而这些激酶在催化区域附近有共同的氨基酸残基。也证明了蛋白质芯片可作为高通量筛选酶-底物作用的良好平台。蛋白芯片的检测目前蛋白芯片的检测主要有两种方式。一种是以质谱技术为基础的直接检测法,采用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术,用激光解析电离的方法将保留在芯片上的蛋白质解离出来。具体过程为:芯片经室温干燥后,加能量吸附因子如芥子酸,使其与蛋白质结合成混合晶体,以促进蛋白质在飞行时间质谱检测中的解析和离子化,利用激光脉冲辐射使芯池中的分析物解析成荷电粒子,根据不同质荷比离子在仪器场中的飞行时间长短不一,通过飞行时间质谱来精确地测定出蛋白质的质量,并由此绘制出一张质谱来,以分析蛋白质的分子量和相对含量。另一种为蛋白质标记法,样品中的蛋白质预先用荧光染料或同位素等标记,结合到芯片上的蛋白质就会发出特定的信号,用CCD照相技术及荧光扫描系统等对激发的荧光信号进行检测。与飞行时间质谱相比,该方法定量更加准确,操作也更加简便。与DNA芯片一样,蛋白质芯片同样蕴含着丰富的信息量,必须利用专门的计算机软件进行图像分析、结果定量和解释。其中应用最广的是荧光染料标记法,原理较为简单、使用安全、灵敏度高,且有很好的分辨率。可直接用广州博鹭腾 GelView 6000Plus进行拍摄。图1.GelView 6000Plus智能图像工作站GelView 6000Plus 配备600万像素科学级制冷CCD相机,制冷温度为环境温度下 55℃,极低的暗电流,很大程度降低背景干扰。而且独有的红外感应开关,自动控制样品台的开启与关闭,同时也减少了实验时对仪器的污染。
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