睿科推出针对β2-受体激动剂检测的整体解决方案
&beta 2-受体激动剂是指含氮激素中的苯乙胺类药物(phenethylamines,PEAs)苯乙胺类药物具有苯乙醇胺结构母核,苯环上连接有碱性的&beta -羟胺侧链。盐酸克伦特罗为国家按兴奋剂管制的&beta 2-受体激动剂,目前,&beta 2-受体激动剂已有20多种,我国禁止所有&beta 2-受体激动剂用于养殖业。近年来,非法使用盐酸克伦特罗(非法用于养殖时俗称&ldquo 瘦肉精&rdquo )饲养生猪事件屡禁不绝,严重危害食品安全和人民群众身体健康。一些不法养殖户转向购买人用盐酸克伦特罗或其他&beta 2-受体激动剂直接饲喂生猪。本文在已有的方法基础上改进了仪器方法,睿科仪器新推出的全自动固相萃取系统,与串联四极杆液质联用系统可以同时测定九种&beta 2-受体激动剂。实验证明该方法快速、简单,灵敏度高,完全达到了国内,欧盟和日本的要求。试剂 标准品化合物的结构见图1。乙腈购买于Fisher公司,甲酸购买于Merck公司,甲酸铵购买于Acros Organics公司,水为Milli Q。 图1. 被测&beta 2-受体激动剂的结构试样制备与保存 牛、猪肌肉组织:若为冷冻样品,将其放置室温下化冻。从原始样品中取出部分有代表性样品约100g,经组织搅拌机将样品均匀搅碎,用四分法缩分出适量试样,均分成两份,装入无菌采样袋中,加封后作出标记,一份作为试样,一份作为留样(-18℃保存),试样再利用匀质机10000r/min转速下将样品制备均匀。 样品前处理 样品制备 提取 1)称取制备好的样品2.00(± 0.02)g,置于50mL离心管中,加入8mL乙酸钠缓冲液,再加入50&mu L&beta -葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,匀质机匀质30s(10000 r/min),37℃水浴酶解12h。2)取出后放置室温,加入100&mu L &beta -激动剂内标工作溶液(8.7),100&mu L &beta -激动剂加标溶液,加盖后涡旋振荡, 离心10min(5000 r/min),取4mL上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL,混合均匀,用高氯酸调节pH值至1± 0.3。离心10min(5000 r/min),将全部上清液转移至另一50mL离心管中,用10mol/L氢氧化钠调节pH值至11。3)加入10mL氯化钠饱和溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液,加盖至于水平振动器振荡10min。在5000 r/min下离心10min。 转移全部的有机相,在40℃水浴下氮气将其吹干。4)加入5mL pH=5.2的乙酸钠缓冲溶液,涡旋振荡10s后,进行SPE净化 净化 1)将固相萃取小柱置于固相萃取装置Fotector上,次用5mL 甲醇、3mL水活化小柱;2)将上述待净化的溶液加入萃取小柱,弃取流出液,然后依次用3mL去离子水,3mL 2%甲酸水溶液(v/v),3mL甲醇淋洗小柱,弃取流出液,并采用负压抽干小柱;3)10mL 5%氨水氨化的甲醇溶液洗脱目标物,此时收集洗脱液; 系统自动浓缩定容;4)往管中加入1mL含0.1%甲酸的5%甲醇溶液复溶样品,涡旋震荡后,滤液待测。 分析条件 样品采用串联四极杆液质联用仪进行分析。 液相条件 采用液相色谱仪,配置有脱气机,二元泵,自动进样器。色谱柱: SB-C18, 2.1× 100, 1.8&mu m。流动相组成:A为10mM Ammonium Formate +0.1% Formic Acid水溶液(用乙酸调节pH值4.5),B为乙腈溶剂。流速0.3mL/min,柱温40℃。梯度洗脱。 质谱条件串联四极杆质谱仪。在(+)ESI模式下,采集数据,设定质谱参数如下:Capillary 4000V,Drying Gas 11L/min,Neb Press 35 psi,Gas Temp 350℃,碰撞气为高纯氮气,Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下:保留时间化合物母离子子离子驻留时间(ms)碰撞电压(V)碰撞能量Energy (V)4.95特布它林226152101001517010100304.98齐帕特罗262244101001018510100254.98沙丁胺醇24022210100514810100155.04塞曼特罗220202108051601080155.80莱克多巴胺302284101001016410100156.15妥布特罗228119101003017210100106.18克伦特罗(瘦肉精)27720310100102591010056.37溴布特罗367349101001029310100156.49克仑潘特29120310100152731010056.52马布特罗311237101001529310100106.83马喷特罗32523710100152171010025表2. MRM模式下的质谱参数 结果与讨论 实际样品添加了2ppb的激动剂,经萃取、净化等步骤,其回收率在80-100%之间。其检测灵敏度, 如瘦肉的灵敏度可达10ppt。图2. 0.5ppb的&beta 2-受体激动剂测得的谱图更多信息请联系:厦门总部:地址:厦门火炬高新区创业园伟业楼北楼N206室邮编:361004联系人:游经理电话:0592-5800190传真:0592-5800191服务热线:400-885-1816E-mail: info@reeko.cc 北京分公司:地址:北京市朝阳区东三环南路58号富顿中心C座518邮编:100022联系人:张经理电话:010-58674766传真:010-58674656E-mail:liangku_zhang@reeko.cc 上海办事处:地址:上海市长宁区法华镇路751弄34号404邮编:201103联系人:陈经理电话/传真:021-52300176E-mail:yufei_chen@reeko.cc 关于睿科 睿科仪器(厦门)有限公司是一家专业从事实验室分析仪器研发和生产的高科技企业,是集实验室样品前处理设备研发生产、前处理方法开发、实验室仪器销售为一体的专业厂家。 睿科仪器有限公司拥有专业的销售人员,配备具有研发经验的安装维修工程师和多年应用经验的应用工程师,为实验室分析工作者提供先进、优质的产品和高质量的技术服务。