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女生长期在实验室做实验会对身体有什么影响吗?
细胞CCK-8增殖分析(反映群体细胞的生长) (一)原理 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410082231070587_3898_6698225_3.jpg a在电子耦合试剂环境中,WST-8可被活细胞线粒体内的一些脱氢酶还原成橙黄色的甲臜(formazan),橙黄色的深浅与细胞的增殖成正比 b用酶标仪在450mm波长处测定OD值,可计算细胞群体的细胞活力,间接反映活细胞的数量 c以活力值为纵坐标,测定时间为横坐标,绘制生长曲线,可计算细胞的倍增时间(即在生长曲线上细胞数量增加1倍的时间 ,细胞倍增的时间区间即为对数生长期,细胞传代,实验多在此区间进行) (二) 材料 LLC-ASD细胞 CCK-8 kit 96孔板 含5%FBS的DMEM培养液(含抗生素)酶标仪 超净台 培养箱 (三)操作步骤 1 画板: 建议96孔板最外一圈的孔加入100ul/孔的PBS,中间接种 6day x 5个100μL/孔的含1000个细胞的细胞悬液并设置仅含5 个100ul/孔培养基的副孔作为空白对照。[/font] 2接种与预培养: 收集细胞,计数后用含5%FBS的DMEM培养液极限梯度稀释得5ml 1×104个/ml,剩余的细胞重新收集,以便以后做RT-PCR验证实验。 按实验设计接种细胞,注意接种时不可产生气泡,然后在培养箱中预培养30min 3 加CCK-8与培养: day0的5个孔和空白对照每孔加入10 ulCCK-8溶液,摇匀后在培养箱内孵育1.5h 4 测定当天加入CCK-8各孔在450mm波长处OD值,记录 5 每隔24h向day1~day5相应各孔加入10 ulCCK-8溶液,摇匀后在培养箱内孵育1.5h测定当天加入CCK-8各孔在450mm波长处OD值,记录 (四)细胞的倍增时间的计算: 1计算空白对照组的OD[font=宋体]值的均值A 2 day0~day5各孔OD值均减去A,记为当如该孔的细胞活力值 3以细胞活力值为纵坐标,测定时间为横坐标,绘制生长曲线,根据生长曲线确定细胞生长的对数期 4计算倍增时间 其公式为: Td=Δt×Lg2/(LgNt-LgN0)定义Td为倍增时间,Δt为计数间隔时间,Nt为对数生长期任一点在生长曲线上的理论观察值,N0为对数生长期在生长曲线上的理论初始值 注意: 1.当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 2.在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,可以缩短加入CCK8后的培养时间。例如:可以把加入CCK8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。 3.在CCK-8显色过程中,如何终止反应? 有以下几种方法(96孔板): 在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。 4.必须预培养细胞吗? 不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。 5.CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样? 不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。 6.悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别? 悬浮细胞由于染色比较困那,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易,若细胞数量过大,有时吸光度会超过酶标仪的读数。 7.实验之前,是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应? 在避光条件下CCK-8试剂在4℃可保存一年。如果需要保存较长时间的话,推荐在-20℃下保存。但是CCK-8若反复解冻和冰冻将会增加空白吸收,从而影响检测结果,若经常使用可将试剂存放在4℃冰箱内保存。 建议使用一个孔作一下检测,因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。
常听到客户,包括移液器销售人员在讨论一个话题,就是移液器在储存时,其容量调节钮到底应该放在什么位置才是最合适的?因为,现在有两种声音,一种是放在最大位置,就是将容量调节至最大,另一种则是放在最小位置,就是将容量调节至最新,那么究竟哪一种是正确的呢?要回答上面问题,必须先弄清楚,为什么会出现这样两种想法? 移液器的容量调节按钮,起着2种作用,一是承担这容量调节作用,另一种则是承担着取液、分液作用,如果移液器的容量调节钮,仅仅只承担容量调节的作用,那么,可以说无论将容量调节至哪个位置,对于长期储存来说,都不会给移液器造成什么影响。但因为移液器的容量调节钮同时还承担着取液、分液的作用,也正因为此,才会产生长期储存时,容量应调节至什么位置的问题。 移液器的取液是通过真空原理来实现的,因此,在取液时(对于非电动)需要按下容量调节钮,在分液时需要松开容量调节钮,而容量调节钮是通过预期连接的弹簧来实现自动弹起功能的,因此,在长期储存时,将容量调节至最大容量或最小容量,其主要原因就是涉及到与该容量调节钮相联系的弹簧是出于紧缩还是张弛状态。从理论上将,如果弹簧长期出于紧张状态,则对弹簧会产生一定的影响,如弹簧再次伸展时,无法达到原有的长度或张力不够,因此,如果长期储存时,从理论上说,应该将容量调节至某个位置,使得与调节钮想联系的弹簧处于张弛状态。 但以上仅是从理论上来分析的,具体如处于张弛状态和紧张状态长期存放的弹簧,到底有多少差别,目前还没有试验证明!