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我单位新进日立L-8900氨基酸分析仪,主要分析浓缩果汁。前处理按照110度水解的办法48小时也不能处理好;后改用微波消解,使用6mol的盐酸,160度消解30分钟,仍然是黑乎乎的。请教分析过氨基酸的朋友,浓缩果汁的糖分含量一般较高,应该如何水解,如果用微波的话,应该怎么处理?
1 实验目的 (1)了解HPLC在食品中的应用。 (2)理解缓冲溶液在流动相中的作用。 (3)掌握用内标法对组分进行定量分析的方法。 2 实验原理 在食品中,主要的有机酸是乙酸、丁二酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸等,它们可能来自原料、发酵过程或是添加剂。这些有机酸在水溶液中有较大的解离度。在反相键合相色谱中易发生色谱峰拖尾现象。苹果汁中的有机酸主要是苹果酸和柠檬酸。在酸性流动相条件下(如pH 2~5),上述有机酸的离解得到抑制,利用分子状态的有机酸的疏水性,使其在键合相色谱柱中能够保留。由于不同有机酸的疏水性不同,疏水性大的有机酸在固定相中保留强,较晚流出色谱柱,否则较早流出,从而使各组分得到分离。
[align=center]一次固相微萃取SPME分析果汁的条件初步优化小结[/align]前 言本文采用顶空固相微萃取-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]质谱法分析较浓果汁中香气物质。进行了初步优化以得到相对较好的分离结果。[b]1试验部分[/b]1.1 仪器与装置美国安捷伦6890N/5975C[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用仪,带有德国Gerstel的MPS2多功能自动进样系统(可以进行全自动固相微萃取操作)。固相微萃取萃取头采用DVB/CAR/PDMS,65μm, 2cm(美国Supelco公司)。1.2样品和标样样品:市场样品。1.3GC/MS条件1.3.1 色谱条件:色谱柱:安捷伦HP-Innowax (60m×0. 25 mm ( i.d.)×0.25μm)毛细管柱;升温程序: 40℃保持2 min,以5 ℃/min升至250℃,保持26 min;载气(He, 纯度99.999%以上)流速1.8mL/min 进样口温度250℃,分流进样,分流比1:1 - 10:1 1.3.2质谱条件: 电子轰击(EI)离子源;电子能量70eV;传输线温度280℃;离子源温度230℃;四级杆温度150℃。SCAN扫描范围:29-400。增益电子倍增EMV: 1306V。[b]1.4样品的提取处理及分析方法[/b][color=black]样品的提取处理[/color][color=black]因为样品为果汁,无法直接进样,本文采取较为方便且灵敏度高的SPME(固相微萃取)法提取香气香味成分。[/color]取出一定量(见后面具体实验用量)果汁样品于20ml顶空瓶中。置于全自动固相微萃取的进样装置。平衡时间:10min, 提取温度:60度,提取时间:40min,解析温度:250度,解析时间1min。萃取头:DVB/CAR/PDMS,65μm,2cm。*******************************************************************************[b]2 结果与讨论[/b]2.1 实验结果用固相微萃取处理果汁样品,简单方便,灵敏度高,有利于香气化合物的提取。固相微萃取的萃取头在进样口自动经过解析后,进入GCMS进行分离。2.1.2 优化取样量下面以往在通常的果汁的SPME提取的做法,也是经过优化萃取温度,萃取时间,取样量,平衡时间等分析条件后得到的。取样2g,分流比1:1条件下(其它条件参见1.3,相同)的色谱总离子图(TIC):[img=,690,421]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711302101_01_1615838_3.jpg!w690x421.jpg[/img][align=center]图1 以往某一果汁的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)[/align]***************************************************************************[align=left]可以看出来分离效果上可以。但按照同样的条件(取样2g,分流比1:1)处理了一个果汁新样品。其的色谱总离子图(TIC)如下:[/align][align=left][img=,690,423]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711302103_01_1615838_3.jpg!w690x423.jpg[/img][/align][align=left]图2 新果汁样品(2g,分流比1:1)的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)[/align]*************************************************************************[align=left]从上面的新果汁样品的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)看到,前面几个甲位蒎烯、乙位蒎烯、柠烯、丙位松油烯等萜烯的峰型很差,有的还是双峰、驼峰、凸峰等,也没有完全分离开,严重超载。说明这个样品浓度很大,此分析条件不适合这个样品。按照以往的经验和已经优化的方法的条件失效了,不可用了。[/align][align=left]对于超载的情况,首先考虑减少进入仪器的样品量。例如减少提取时间,但时间过短可能有些成分无法提取到,平衡时间短不利于样品对比等,不是最好的选项。另外就是减少样品量。开始减少2g到0.5g样品量。分流比1:1未变。其的色谱总离子图(TIC)如下:[/align][align=left][img=,690,423]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711302104_01_1615838_3.jpg!w690x423.jpg[/img][/align][align=left]图3 新果汁样品(0.5g,分流比1:1)的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)[/align][align=left]*************************************************************************[/align][align=left]从上面看出,减少样品量1/4,峰型虽然有所改善,但仍然达不到要求。于是再减少进样量到0.1g。其的色谱总离子图(TIC)如下:[/align][img=,690,423]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711302105_01_1615838_3.jpg!w690x423.jpg[/img][align=left]图4 新果汁样品(0.1g,分流比1:1)的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)[/align][align=left]*************************************************************************[/align][align=left]从上面看出,减少样品量1/20,峰型改善较大,但仍然达不到要求。如果在进一步减少取样品,可能会称量不方便,样品均匀性代表性会受到影响。[/align]2.1.2 优化分流比鉴于减少取样量有一定的局限性,实践起来受某些限制。尝试减少另一种减少进入仪器柱子的样品量的方法,就是加大分流比。开始考虑减少到5:1,但感觉不一定够,就直接减少到10:1。其的色谱总离子图(TIC)如下:[img=,690,423]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712010548_01_1615838_3.jpg!w690x423.jpg[/img][align=left]图5 新果汁样品(0.1g, 分流比10:1)的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)*************************************************************************可以看出来这个分析条件下的峰型比较理想,分离也不错,定量也可以。*******************************************************************下面是4种分析条件下(依次是2g-1:1分流比,0.5g-1:1分流比,0.1g-1:1分流比,0.1g-10:1分流比)的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)对比图:[/align][align=left][img=,690,379]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711302107_01_1615838_3.jpg!w690x379.jpg[/img][/align][align=left]图6. 4种分析条件下的总[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图(TIC)对比图可以看出来四种分析条件下的峰型明显差别和分离效果。********************************************************************2.2 一般认为固相微萃取(SPME)用于样品浓度低,例如以下饮料食品日化产品等,其组分很微量,例如ppm以下,ppb到ppt水平,所以一般取样品尽量多一些,并采用不分流进样或很小的分流比,例如1:1到5:1。但对于含量高的样品,例如本文中果汁样品或香精样品就不适应了,需要调整取样量和加大分流比等方式来优化。也可以适当减少提取萃取时间来减少进入仪器的样品量。[/align]