志贺氏菌显色培养基

蜡样芽孢杆菌显色培养基Bacillus cereus Chromogenic Medium用途：用于蜡样芽孢杆菌的显色培养，蜡样芽孢杆菌显蓝绿色蜡样芽孢杆菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、乳制品和肉制品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。蜡样芽孢杆菌显蓝绿色且菌落比较大，苏云金芽孢杆菌显蓝绿色，李斯特氏菌显深蓝色，菌落比较小，其它菌显黄色或无色，革兰氏阴性菌被抑制。 成份 (g/L) 特殊营养物质41.9 显色剂 0.5 抑菌成份 0.6琼脂 15.0 pH 7.0 ± 0.2 25 ℃ 此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。 注意 此培养基仅供实验室使用。 用法 称取本品 11.6g 加入200ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，备用。 贮存 制备好的平板可保存 2-5 天，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度 2-8 ℃，注意避光保存。 失效 干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。 操作步骤 1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液； 2、样品液在30±1℃增菌培养18-24小时； 3、取增菌液划线接种于蜡样芽孢杆菌显色培养基平板上，30±1℃培养18～24h。蜡样芽孢杆菌典型菌落为蓝绿色且菌落比较大。若24小时没有出现典型菌落，可延长培养至48小时。 4、对可疑蜡样芽孢杆菌可划线接种到营养琼脂平板上，30±1℃培养18-24小时，挑取单菌落做蜡样芽孢杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装SHBG09 7种x2套/盒*5盒)

[align=center][b]食品微生物志贺氏菌方法验证[/b][/align][align=left]近期在做食品中志贺氏菌的方法验证，与大家分享一下试验过程及结果。[/align][b]1[/b]、[b]目的：[/b]本实验是通过从人员能力、仪器设备、标准菌株及试剂、方法、环境五个方面对食品微生物志贺氏菌检验进行验证。[b]2、人员能力验证情况[/b]目前实验室人员经培训、考核，具备测定食品微生物学检验志贺氏菌测定的能力，人员能力验证合格。[b]3、仪器设备验证情况[/b]3.1方法对测试设备的要求恒温培养箱 ：36℃±1℃、41.5℃±1℃3.2目前配备的设备情况：生化培养箱 上海龙跃LBI-150：36℃±1℃，生化培养箱 上海龙跃LBI-150：41.5℃±1℃；设备经过校准并确认合格。[b]4、标准菌株及试剂验证情况[/b]4.1方法对标准菌株、试剂的要求标准菌株：福氏志贺氏菌 ATCC12022培养基：志贺氏菌增菌肉汤、XLD培养基、麦康凯琼脂(MAC)、志贺氏菌显色培养基、三糖铁(TSI)琼脂、志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒、志贺氏菌属四种多价诊断血清、福氏志贺氏菌TR-204、鲍氏诊断血清TR-205试剂：0.85%灭菌生理盐水4.2配备情况福氏志贺氏菌 ATCC12022：美国菌种保藏中心，有效期至2020.8.31志贺氏菌增菌肉汤：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，批号20180919麦康凯琼脂(MAC)：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，批号20181227XLD培养基：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，批号20190305三糖铁(TSI)琼脂：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，批号20180828志贺氏菌显色培养基：北京陆桥生物技术有限公司，批号180518志贺氏菌干制生化鉴定试剂盒：北京陆桥生物技术有限公司，批号190122志贺氏菌属四种多价诊断血清：宁波天润生物药业有限公司，批号190101福氏志贺氏菌TR-204：宁波天润生物药业有限公司，批号20190101鲍氏诊断血清TR-205：宁波天润生物药业有限公司，批号20180101无菌生理盐水（氯化钠）：AR 国药集团化学试剂有限公司，批号201811204.3验收情况：已验收合格[b]5、检测方法[/b]食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012，适用于食品中志贺氏菌的检验；方法现行有效，已受控。[b]6、环境条件验证情况[/b]6.1方法对测试环境的要求在环境温度为18℃~26℃，环境湿度为30%~70%，试验区域为百级洁净度进行。6.2目前对环境的设施和监控情况环境控制设备：空调 环境监控设备：温湿度表，已检定合格，在有效期内6.3环境验证情况定期进行沉降菌监测，验证洁净度，合格。[b]7、方法验证情况[/b]7.1验证方式：向样品中加入标准菌株。7.1.1合格标准：供试品+目标菌组生长良好。7.1.2样品：香肠[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271322285776_2548_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2验证内容7.2.1菌液制备：取福氏志贺氏菌 ATCC12022的工作菌斜面，用5mL生理盐水洗脱；将上述洗脱液用0.85%生理盐水稀释至菌浓度约为10~100CFU/mL的菌悬液备用。7.2.2培养基制备：按 GB 4789.5-2012 要求配制。7.2.3样品前处理：按 GB 4789.5-2016、GB /T4789.17-20037.2.4供试品+目标菌组7.2.4.1增菌：以无菌操作称取25g样品，放入盛有225mL的生理盐水无菌均质袋内；向此均质袋中加入每毫升含菌量约为10~100CFU/mL的福氏志贺氏菌 ATCC12022菌悬液1mL，混匀后作为试验组。于41.5℃±1 ℃，厌氧培养16h~20h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271323545716_9092_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.2分离：取增菌后的志贺氏菌增菌液分别划线于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见下表。[table][tr][td][align=center]选择性琼脂平板[/align][/td][td][align=center]志贺氏菌的菌落特征[/align][/td][/tr][tr][td]MAC琼脂[/td][td]无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]XLD琼脂[/td][td]粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐[/td][/tr][tr][td]志贺氏菌显色培养基[/td][td]表面白色，周围紫红色菌落（在陆桥志贺氏菌显色培养基）[/td][/tr][/table][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324513903_7521_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324505666_7879_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271324525123_1111_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4生化试验：将6.2.4.2中选择性平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种三糖铁和营养琼脂斜面、半固体各一管，置36℃±1℃培养20h～24h，分别观察结果。凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸、不产气、不产硫化氢的菌株，进行生化试验和血清学试验。将可疑菌落制成0.5麦氏浊度的菌悬液分别接种生化试剂盒内，每孔接种0.2mL,置于36℃±1℃培养18h~24h。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325394036_2347_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325396586_4193_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271325414073_5644_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.5血清鉴定：多价O菌体抗原，挑取菌胎于载玻片上两个区域，其中一个区域加生理盐水，一个区域滴多价O血清，将菌胎研磨成乳状。将玻片摇动混合1min，如果抗血清中出现凝结成块的颗粒，而且生理盐水中没有发生自凝现象，凝集反应为阳性。判定检出志贺氏菌/25g样品中。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271326275466_3029_3949637_3.jpg!w690x517.jpg[/img]7.2.4.4同时做样品空白，样品均无菌生长。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329172668_5569_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271329162206_1964_3949637_3.jpg!w690x920.jpg[/img]7.2.5以上试验验证结果如下：[table][tr][td][align=center][b]样品信息[/b][/align][/td][td][align=center][b]检测结果/25g[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠+福氏志贺氏菌[/align][/td][td][align=center]检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]香肠[/align][/td][td][align=center]未检出[/align][/td][/tr][/table]7.3验证结果：供试品+目标菌组生长良好。8、试验结论：本实验室在人员能力、仪器设备、标准物质、试剂、检验方法、环境条件等方面均具备了测定食品微生物志贺氏菌的能力；方法验证方面，综上所述本实验室通过样品加标与样品空白检验均达到食品微生物学检验 志贺氏菌GB 4789.5-2012 的要求，综合考虑，本实验室可以开展此项目。

[b][color=#ff0000]第一位回答正确者奖励20积分！[/color][/b]显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色或产生不同菌落形态及周边培养基变化的原理来检测微生物的新型培养基。随着技术的发展显色培养基也逐步的被写入各类标准，但检测人员对该培养基的依赖程度越来越高，使得致病菌检测的漏检率或误判率逐步升高。这不仅给生产企业带来损失也给检测机构的检测成本大大增加。为此我们将给大家带来一系列关于食品微生物检测显色培养基的图片与相关菌株名称。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/02/201902211841216520_9391_3830199_3.png[/img] 图A[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/02/201902211841222460_8924_3830199_3.png[/img] 图B上图所用培养基为[color=#333333]chromagar 科玛嘉 李斯特氏菌显色培养基。[/color][color=#333333]培养条件为36℃±1℃，30h。图A为[color=#333333]ATCC 19111 [color=#333333]单核细胞增生性李斯特氏菌 图B为 ATCC 19119 伊氏李斯特氏菌（绵羊李斯特氏菌）[/color][/color][/color]