推荐厂家
暂无
暂无
以 猪肉香肠为研究对象,研究桂皮、洋葱和茶多酚复配对阻断产品中N一亚硝胺生成的效果。实验结果表明:茶多酚对猪肉发酵香肠中亚硝胺残留量的影响最大,茶多酚、洋葱和桂皮三种物质复配能有效地抑制N一亚硝胺的生成,其最佳配比为(加人量以肉重计):茶多酚含量为0.029%,洋葱汁为3.5%, 6%桂皮浸体液含量为5.4%,此时产品中亚硝胺的含量6.5ug/kg
[b]摘要:[/b]建立了快速、准确、灵敏的蔬菜中仲丁胺的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)检测方法,仲丁胺使用甲醇水溶液(8+2)提取,调节pH后,经丹磺酰氯衍生,使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS测定,串联质谱 ESI 正模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,以保留时间和子离子比定性,外标法定量。在5~100μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于 0.999,方法检出限 ( S /N > 3)为 2.0 μg/kg ,加标水平为 10~100μg/kg时(n = 6),平均回收率为 84%~95%。方法准确、灵敏,适用于蔬菜中仲丁胺残留量的测定。[b]前言仲丁胺(2-aminobutane,2-AB),是一种保护性杀菌剂 , 对多种真菌有抗菌活性, 广泛用作蒜薹、青椒、柑桔、葡萄等蔬菜与水果贮运输、贮藏过程[sup][/sup],虽然至今国内外尚未发现因2-AB而导致的癌变、突变、畸形的报道[sup][/sup],但美国已把其对人体健康的危害等级定为三级,并对其使用范围和允许残留量做了规定。日本于2006年5月29日起正式实施《食品中残留农业化学品肯定列表制度》,其中也对仲丁胺进行做出了最大残留限量要求[sup][/sup]。《食品添加剂使用标准》对蔬菜和水果的最大残留限量作出规定。由于 2-AB 分子量小(73.14),结构上没有生色基团用于最终检测。国内外报道的果蔬仲丁胺残留检测的方法主要有分光光度法[sup][/sup]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[sup][/sup]、薄层扫描、荧光胺衍生-液相色谱法及其他液相色谱方法等。现行的检测标准方法操作困难,柱前衍生剂2,4 二硝基氟苯的毒性较大,不易获得,且价格昂贵[sup][/sup],方法的检出限不高,仅为 0.67 mg/kg。本文利用仲丁胺在pH=9碳酸盐体系下与丹磺酰氯发生衍生反应[sup][/sup],用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液相色谱质谱联用仪[/color][/url]进行检测[sup][/sup],具有操作简单、快速、灵敏、准确的特点,能满足水果中仲丁胺保鲜剂检测的要求[sup][/sup]。1 实验部分1.1 仪器与试剂1290 infinity II超高效液相色谱仪;6460 Triple Quad LC/MS(美国Agilent) SHA-C往复式水浴恒温振荡器(金坛科析);XW-80A漩涡混合器(上海沪西);离心机(湘仪)。仲丁胺(含量99.0%,德国,Dr);甲醇和丙酮(HPLC 级,德国 Merck 公司);甲酸(HPLC 级,CNW 公司);丹磺酰氯(色谱纯,CNW);滤膜(PTFE Hydrophilic 0.22μm);一级水(蒸馏水);碳酸钠(优级纯,上海国药),盐酸(优级纯,上海国药)。1.2 标准工作液及其他溶液的配制[/b]1.2.1准确称取仲丁胺标准品10mg左右,用甲醇-水(8+2)定容10ml,配置1000mg/L的标准储备液,放置冷藏冰箱储存;1.2.2丹酰氯丙酮溶液(50g/L):称取5g丹酰氯用丙酮定容至100mL;1.2.3盐酸溶液(1mol/L):吸取9ml分析纯盐酸,用水稀释并定容至100ml;1.2.4碳酸盐缓冲溶液:称取 8.45g无水碳酸钠,加440ml水溶解,称取9.41g碳酸氢钠加入560mL水溶解,将两种溶液混合。[b]1.3 样品前处理1.3.1采样和试样制备[/b]抽取有代表性的样品, 用四分法缩减取200 g, 粉碎后, 混匀, 装入自封袋中, 冷藏避光, 备用。[b]1.3.2提取[/b]称取10g(±0.01g)样品于50mL离心管中,加入15mL 甲醇水溶液(8+2)并超声15min,然后定容至20mL,于4000r/min下离心5min。[b]1.3.3衍生[/b]移取5mL上清液于新50mL离心管中,加入2mL pH=9.0的碳酸盐缓冲溶液,再加入1.5mL 50g/L丹酰氯丙酮溶液,在40℃下水浴振荡2h,冷却后用甲醇定容至10mL,于4000r/min下离心5min,吸取1mL过0.22μm滤膜,待上机分析。[b]1.3.4标准品衍生[/b]准确移取1mL 100mg/L的仲丁胺于50mL离心管内,加入1mL甲醇水溶液(8+2)和2mL pH=9.0的碳酸盐缓冲溶液,加入1.5mL 50g/L丹酰氯丙酮溶液,在40℃下水浴振荡2h,冷却后用甲醇定容至10mL,于4000r/min下离心5min,过滤膜即为10mg/L工作液。[b]1.4液相色谱-串联质谱条件1.4.1液相色谱条件[/b]色谱柱: Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm 2.1*100mm;流动相: A 为0.1%甲酸水,B 为甲醇,梯度洗脱程序:0.0~1.0 min,50%B 1.0~3.0 min,50%~95% B 3.0~ 4. 0 min,95%~ 95% B 4.1~6.0 min,95%~50% B 流速: 0. 40 mL /min 柱温: 40℃ 进样量:2 μL,外标法定量。[b]1.4.2质谱条件[/b]ESI 正模式 离子源温度 350 ℃ 雾化气流速:10L/min 喷嘴压力:45psi 去溶剂气温度 375 ℃ 流速 11 L /min 检测模式: 多反应监测(MRM)模式 化合物的监测离子对(m /z)、丰度比及其它优化的质谱参数(锥孔电压、碰撞能等)见表 1,每个离子对的驻留时间均为 0. 1 s。[b]2 结果与讨论2.1 质谱条件的优化丹磺酰氯是强[url=http://baike.baidu.com/item/%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%89%82/6185591][color=windowtext]荧光剂[/color][/url],能专一地与链N-端α-氨基反应,所以仲丁胺的仲胺将丹磺酰氯的Cl[sup]-[/sup]取代,除去HCl(分子量36.5),得到新化合物N-仲丁基一丹磺酰胺(分子量306.3),使用两通连接液相色谱与质谱, 首先在正离子模式下进行全扫描, 确定化合物的分子离子, 将分子离子作为母离子, 给予一定的碰撞能量和碰撞气体, 全扫描二级离子, 选取丰度较强、干扰较小的两个子离子分别作为定性及定量离子, 并优化母离子电压和碰撞电压[sup][[b]15[/b]][/sup], 仲丁胺衍生物质谱参数优化结果见表1表 1 仲丁胺衍生物的质谱分析条件 [/b][table=444][tr][td]中文名称[/td][td]母离子 [/td][td]子离子 [/td][td]碰撞电压 [/td][td]碰撞能[/td][td]加速电压[/td][/tr][tr][td=1,3]仲丁胺衍物[/td][td=1,3]307.2[/td][td]157[sup]*[/sup][/td][td]135[/td][td]25[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]128[/td][td]135[/td][td]70[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]115[/td][td]135[/td][td]70[/td][td]4[/td][/tr][/table][align=left][b]2.2 色谱条件的选择[/b]试验中考察了 0.1%甲酸水-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈、0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水-甲醇3 种流动相体系对分析效果的影响,结果表明,采用0.1% 甲酸水-甲醇作为流动相时目标化合物的离子化效率高,峰型好,灵敏度高目标物标准溶液(50 μg /L)的总离子流图(TIC)和提取[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图见图 1。[/align][align=center][img=,249,106]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708011647_01_3081717_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][b]2.3 前处理条件的确定2.3.1 提取条件优化[/b]仲丁胺是有机碱,易溶于水,能与乙醇、乙醚、甲醇等多种有机溶剂混溶,还能与酸形成易溶于水的盐,它的化学性质稳定。因丹磺酰氯与2-A B 的反应在含水的碱性有机溶剂中进行,试验中考察了用水、及水与乙腈、丙酮、甲醇混合作为提取溶剂,用丙酮水时提取溶液颜色很深,纯水提取后离心效果很差,乙腈水和甲醇水提取颜色差不多,但体系流动相为甲醇,为消除容积效应及提取溶液的离心后的溶液状态,最后选择本试验选用甲醇+水=8+2,水作为提取溶剂,离心后定量取样,这样可大大减少干扰。[b]2.3.2 衍生条件优化2.3.2.1 衍生化试剂量[/b]为了能够充分衍生化,添加不同量的衍生化试剂,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS 分析,以1.0mg/L为基准,添加50g/L丹酰氯丙酮溶液0.5,1.0,1.5和 2.0 mL 的衍生化试剂。可以看出,衍生化试剂为1.5 mL 时仲丁胺衍生物的响应面积最大。[/align][align=left][b]2.3 前处理条件的确定2.3.1 提取条件优化[/b]仲丁胺是有机碱,易溶于水,能与乙醇、乙醚、甲醇等多种有机溶剂混溶,还能与酸形成易溶于水的盐,它的化学性质稳定。因丹磺酰氯与2-A B 的反应在含水的碱性有机溶剂中进行,试验中考察了用水、及水与乙腈、丙酮、甲醇混合作为提取溶剂,用丙酮水时提取溶液颜色很深,纯水提取后离心效果很差,乙腈水和甲醇水提取颜色差不多,但体系流动相为甲醇,为消除容积效应及提取溶液的离心后的溶液状态,最后选择本试验选用甲醇+水=8+2,水作为提取溶剂,离心后定量取样,这样可大大减少干扰。[b]2.3.2 衍生条件优化2.3.2.1 衍生化试剂量[/b]为了能够充分衍生化,添加不同量的衍生化试剂,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS 分析,以1.0mg/L为基准,添加50g/L丹酰氯丙酮溶液0.5,1.0,1.5和 2.0 mL 的衍生化试剂。可以看出,衍生化试剂为1.5 mL 时仲丁胺衍生物的响应面积最大。[b]2.3 前处理条件的确定2.3.1 提取条件优化[/b]仲丁胺是有机碱,易溶于水,能与乙醇、乙醚、甲醇等多种有机溶剂混溶,还能与酸形成易溶于水的盐,它的化学性质稳定。因丹磺酰氯与2-A B 的反应在含水的碱性有机溶剂中进行,试验中考察了用水、及水与乙腈、丙酮、甲醇混合作为提取溶剂,用丙酮水时提取溶液颜色很深,纯水提取后离心效果很差,乙腈水和甲醇水提取颜色差不多,但体系流动相为甲醇,为消除容积效应及提取溶液的离心后的溶液状态,最后选择本试验选用甲醇+水=8+2,水作为提取溶剂,离心后定量取样,这样可大大减少干扰。[b]2.3.2 衍生条件优化2.3.2.1 衍生化试剂量[/b]为了能够充分衍生化,添加不同量的衍生化试剂,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS 分析,以1.0mg/L为基准,添加50g/L丹酰氯丙酮溶液0.5,1.0,1.5和 2.0 mL 的衍生化试剂。可以看出,衍生化试剂为1.5 mL 时仲丁胺衍生物的响应面积最大。[/align][align=left][b]2.3.2.2衍生温度和时间优化[/b]在其他条件相同的情况下,分别选取了30℃,40℃,50℃和60℃进行衍生试验,并对50℃样品进行1h,1.5h,2h和2.5h监测。可以看出,衍生化温度在40℃和50℃时相当,就能源考虑选40℃;衍生化反应时间在2h时仲丁胺衍生物的响应面积最大。[b]2.3.2.3.缓冲溶液PH[/b]在其他条件相同的情况下,分别选取了缓冲液PH8.6,PH9.0,PH9.4和PH9.8进行衍生试验,缓冲溶液PH9.0 时仲丁胺衍生物的响应面积最大。综上,衍生化试剂为1.5mL 、衍生化温度在40℃、衍生化反应时间在2H、缓冲溶液PH9.0 时仲丁胺衍生物的响应面积在各因素中最大,因此选用上述条件进行后续实验。[/align][align=left][b]2.4线性关系、检出限[/b]在该试验条件下配制浓度为1、5、10、50、100μg/L仲丁胺标准溶液衍生进样,记录色谱图,线性方程为[i]Y=8022.82x+37937.19[/i]和相关系数R[sup]2[/sup]=0.999(如图6),由样品前处理回收率和稀释倍数关系,检出限(LOD,S /N>3)为 2.0μg /kg,定量下限(LOQ, S/N > 10)为 5.0 μg /kg 表明方法较高的灵敏度。[/align][align=center][img=,505,217]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708011650_01_3081717_3.png[/img][/align][align=left][b]2.5方法的回收率与精密度[/b]选取阴性白菜样品,按本实验方法进行 3个加标水平(LOQ、2LOQ、5LOQ)的回收率和精密度实验,检出限水平加标测定6次,2倍和5倍检出限水平加标各测定3次,计算其回收率和相对标准偏差,目标物的平均回收率为70% ~ 90% ,相对标准偏差均不高于10.0% ,表明方法的准确度和精密度良好[sup][/sup]。[/align][align=left]3. 结 论本实验建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)测定蔬菜水果中仲丁胺的方法,以甲醇-水=(8+2)混合体系协同提取,调节pH后,经丹磺酰氯衍生,优化了色谱、质谱和前处理条件,有效提高了检测的灵敏度和准确度;方法具有良好的回收率和精密度,适用于蔬菜中仲丁胺残留量检测。[/align][align=left][/align][align=left][/align]
茶多酚是天然无毒食品添加剂。 国内外已有大量关于从茶叶中提取茶多酚的报道。借鉴前人的研究,我们制备了一种负载型聚酰胺/硅胶吸咐剂(PA/SiO2)。该吸附剂用于提取茶多酚,其特点是工艺简单、效率高、无污染,具有应用前景。本文用IR谱方法表征该吸附剂分别对茶叶中主要组份—茶多酚、咖啡因、氨基酸(以谷氨酸和胱氨酸为例)吸附作用的红外光谱变化规律,从理论上解释该吸附剂吸附提取茶多酚的原理。1 实验部分1.1 仪器和试剂 SORP-1990表面积及孔径分布测定仪,Nicolet 740傅立叶变换红外光谱仪。扩孔硅胶(30~40目, http://lib.ecit.edu.cn/web/chemistry/2000/chemistrymag.org/col/2000/images/c0002105.gif=12nm)系青岛化工厂生产的硅胶经扩孔处理制成。聚酰胺(尼龙-66,颗粒状,上海树脂厂)、茶多酚为自制品,纯度90.2%(用高锰酸钾滴定法测定)。儿茶素、咖啡因、胱氨酸、谷氨酸均为生化试剂,实验用水为去离子水。1.2 PA/SiO2的制备见文献1.3 红外样品的制作 室温下,把1~2g PA/SiO2分别置于茶多酚(儿茶素)、咖啡因、氨基酸饱和溶液中,搅拌30min, 过滤,将吸附上述各种组份的PA/SiO2在80°C下真空干燥4h,得到吸附样品。分别取上述样品约100mg, 加KBr研磨,压片成型。2 结果与讨论2.1 聚酰胺和硅胶吸附作用的红外光谱 http://lib.ecit.edu.cn/web/chemistry/2000/chemistrymag.org/col/2000/images/c0002101.gif 图1 吸附剂的IR谱, a. SiO2; b. PA; c. PA/SiO2 图1是扩孔硅胶(便于茶多酚分离中的传质及反复使用)、聚酰胺和PA/SiO2的红外光谱。在硅胶表面有一个强而宽的O-H吸附峰(3446cm-1)(图1a);图1b显示了聚酰胺分子中的N-H(3299 cm-1)及C=O(1641 cm-1)吸收峰。图1c表明,当聚酰胺负载于硅胶后,IR谱发生了明显的变化,[font=Time