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[size=15px][font=宋体]类风湿性关节炎([/font][font=&]RA[/font][font=宋体])是一种严重的异质性自身免疫性疾病,防己黄芪汤([/font][font=&]Fangji HuangqiDecoction[/font][font=宋体],[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体])是一种用于治疗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的经典中药复方,由[/font][font=&]4[/font][font=宋体]种草药(防己、黄芪、白术、甘草)组成,效果令人满意。[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]以其补气强外、祛风祛湿的能力而闻名,但其治疗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的机制和生物活性化合物仍不清楚。[/font][font=&][/font][/size] [font=宋体]防己黄芪汤改善类风湿性关节炎的关键靶点和生物活性化合物,发现环氧合酶[/font][font=&]2[/font][font=宋体]([/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体])是[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]改善[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的关键靶点,粉防己碱([/font][font=&]Tetrandrine[/font][font=宋体])负责[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]对[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]作用的主要生物活性成分。机制上,粉防己碱与[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]的[/font][font=&]Tyr385[/font][font=宋体]残基结合,抑制[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]蛋白表达和抑制[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]的酶催化活性,减少前列腺素和炎性代谢物的产生,发挥抗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]作用。此外,[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]的作用优于汉防己甲素,表明[/font][font=&]FHD [/font][font=宋体]还含有其他化合物在[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]治疗[/font][font=&]RA[/font]时发挥作用,这体现了中医方剂治疗疾病的“多组分”特征。 [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]Highlights[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=&]1[/font][font=宋体])[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]固定化磁珠的用于配体垂钓技术来识别作用于[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]的生物活性成分;[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][font=&]2[/font][font=宋体])粉防己碱([/font][font=&]Tetrandrine[/font][font=宋体])为防己黄芪汤([/font][font=&]FHD[/font][font=宋体])改善[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的生物活性成分;[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][font=&]3[/font][font=宋体])[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]的作用优于[/font][font=&]Tetrandrine[/font][font=宋体]表明[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]可能包含其他成分与[/font][font=&]Tetrandrine[/font][font=宋体]协同作用。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]COX-2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]蛋白是[/color][/font][font=&][color=#0070c0]FHD[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]治疗[/color][/font][font=&][color=#0070c0]RA[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]的关键靶点[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [font=宋体]作者首先通过网络药理学分析预测[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]改善[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的关键靶标,其中[/font][font=&]PTGS2[/font][font=宋体]为最核心靶点,[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]是[/font][font=&]PTGS2[/font][font=宋体]基因编码的蛋白酶,可能是[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]改善[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的关键靶标,且已有报道表明[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]是抗关节炎靶点,可以调节前列腺素的产生来抑制炎症。因此作者研究了[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]中作用于[/font][font=&]COX-2[/font]的生物活性成分 [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、通过[/color][/font][font=&][color=#0070c0]COX-2@MBs[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]对[/color][/font][font=&][color=#0070c0]FHD[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]进行配体捕捞和分析[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [font=宋体]为了控制[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]提取液的质量,作者获得[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]提取液,质谱鉴定到[/font][font=&]23[/font][font=宋体]个特征峰,其中[/font][font=&]7[/font][font=宋体]个通过标准品确定为粉防己碱、防己诺林碱等。接着作者制备了[/font][font=&]cox-2[/font][font=宋体]固定化磁珠([/font][font=&]COX-2@MBs[/font][font=宋体]),将其与[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]溶液共孵育,并用[/font][font=&]UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url][/font][font=宋体]分析洗脱液,鉴定出[/font][font=&]11[/font][font=宋体]种成分,其中[/font][font=&]7[/font][font=宋体]个在洗脱液中含量较高,通过标准品鉴定为粉防己碱、汉防己丙素、防己诺林碱、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、甘草查尔酮[/font]B [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]3[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、体外筛选对[/color][/font][font=&][color=#0070c0]COX-2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]酶活性有良好抑制作用的成分[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]利用商品化[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]抑制剂筛选试剂盒,测定了[/font][font=&]7[/font][font=宋体]种含量较高的成分的[/font][font=&]IC50[/font][font=宋体]值,其中粉防己碱、汉防己丙素、防己诺林碱、甘草查尔酮[/font][font=&]BIC50[/font][font=宋体]值均小于[/font][font=&]200μM[/font][font=宋体],防己诺林碱的[/font][font=&]IC50[/font][font=宋体]值最低,为[/font][font=&]17.25±1.16μM[/font][font=宋体],表明这[/font][font=&]4[/font][font=宋体]种成分对[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]酶活性有较强的抑制作用,是[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]中通过抑制[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]治疗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的潜在生物活性成分,但其抑制活性并不优于塞来昔布([/font][font=&]celecoxib[/font][font=宋体],对[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]具有选择性抑制作用,已被用于治疗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的一线药物,通过抑制[/font][font=&]COX-2 [/font][font=宋体]酶活性来抑制前列腺素的产生,从而有效缓解[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]患者的炎症症状)。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]4[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、体内筛选对急性关节炎症有抑制作用的成分[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [font=宋体]角叉菜胶诱导的急性水肿模型大鼠通常用于评价潜在的[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]选择性抑制剂如塞来昔布对急性炎症的抑制作用,作者发现虽然这[/font][font=&]7[/font][font=宋体]种成分均能特异性地与[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]结合,但只有粉防己碱一种成分不仅能抑制[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]酶活性,还能抑制急性炎症 [size=15px][b][font=&]5[/font][font=宋体]、粉防己碱作为[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]的主要生物活性成分通过[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]抑制胶原诱导性关节炎[/font][font=&][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]心脏组织[/font][font=&]H&E[/font][font=宋体]染色结果显示粉防己碱不会引起[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠的心脏毒性(图[/font][font=&]5[/font][font=宋体])。粉防己碱可减轻[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠的爪水肿,显著减轻关节炎症,改善[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠的爪子和关节骨质量,降低[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠踝关节[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]水平。[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]显著改善了[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠的症状,降低[/font][font=&]CIA[/font][font=宋体]小鼠踝关节[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]水平,表明[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]是[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]治疗[/font][font=&]RA[/font][font=宋体]的关键作用靶点。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][font=宋体]值得注意的是,[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]组与中、高剂量粉防己碱组的[/font][font=&]AI[/font][font=宋体]评分及血清[/font][font=&]IL-6[/font][font=宋体]水平差异均无统计学意义,但低剂量粉防己碱组的这两项指标显著低于[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]组。结果表明,虽然[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]煎剂([/font][font=&]1.55 [/font][font=宋体]μ[/font][font=&]g/mL[/font][font=宋体])中粉防己碱的含量约为低剂量粉防己碱溶液([/font][font=&]1.25 mg/mL[/font][font=宋体])中粉防己碱的[/font][font=&]0.1%[/font][font=宋体],但[/font][font=&]FHD[/font][font=宋体]对胶原诱导的足部水肿和血清[/font][font=&]IL-6[/font][font=宋体]表达的抑制作用优于低剂量粉防己碱。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][font=宋体]此外,体外[/font][font=&]COX-2[/font][font=宋体]酶活性测定和体内角叉菜胶诱导的急性炎症试验结果表明,单独使用其他捕获组分的生物活性作用远弱于同剂量粉防己碱。结果表明,[/font][font=&]FHD [/font][font=宋体]中除了主要活性化合物粉防己碱外,还存在其他活性成分,可能与粉防己碱发挥协同作用,抑制[/font][font=&]RA[/font][font=宋体],体现了中药方剂治病“多成分”特点 [b]6、粉防己碱与COX-2蛋白结合方式的分子对接[/b] 最后,作者通过计算机模拟优化COX-2蛋白和粉防己碱的三维结构,研究了配体粉防己碱与受体COX-2的空间拟合度和能量匹配度,确定了它们的结合亲和力和结合模型。结合能为-7.35kcal/mol,粉防己碱与COX-2残基Thr212之间形成氢键。此外,粉防己碱与 COX-2 的残基 Tyr385结合,该位点被报道是COX-2 将花生四烯酸(AA)转化为前列腺素E2(PGE2)的酶催化位点之一。因此,作者推断粉防己碱竞争性地占据了AA在COX-2蛋白上的结合位点,从而减少前列腺素和炎性代谢物的产生,最终实现其抗类风湿关节炎作用 [/font][/size][/font]
HPLC法测定防己黄芪方中粉防己碱的含量摘 要目的 建立HPLC法测定防己黄芪方中粉防己碱的含量的方法。方法 采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6mm×200mm,5µm)。流动相为甲醇:水(含0.03%二乙胺)=80:20,柱温30℃,流速1.0mL/min,检测波长282nm。结果 粉防己碱在6.25µg·mL-1~200µg·mL-1呈良好的线性关系(r = 0.9993),平均回收率为94.4%,RSD = 1.6%,三种方法测定防己黄芪方中粉防己碱的含量分别为0.506mg·mL-1 ,0.424mg·mL-1 和0.541 mg·mL-1 。结论 本法简便,准确,重现性好,可作为防己黄芪方中粉防己碱的含量测定方法。关键词:防己黄芪汤;粉防己碱;HPLC ;含量测定Determination of Tetrandrine in Stephania andAstragalus Combination by HPLCABSTRACTObjective: To establish a HPLC method for the determination oftetrandrine in Stephania and Astragalus Combination Method : A Hypersil BDS C18 chromatographic column (4.6mm×200mm,5µm)served as the solid phase;methanol-water(80:20)(0.03% diethylamine) was used as the mobile phase;the column temperature was at 30℃;the flow rate,1.0ml/min;UV detection wavelength[fo
粉防己碱药理作用及测定方法 粉防己碱 (汉防己甲素,tetrandrine,Tet)是从千金藤属防己科植物粉防己(Stephaniaterandra S.Moore) 的干燥块根中提取的一种主要活性成分,化学结构属双苄基异喹啉类化合物。近年来 ,国内外对其药理作用机制进行了较为广泛的研究。资料表明,Tet的抗心律失常、抗高血压、抗炎、抗肿瘤多药耐药性等作用均与其直接或间接拮抗钙通道和钙调蛋白有关 ,而且发现其在抗肝、肺纤维化方面有较强活性。其免疫机能调节及肿瘤防治等方面具有很好的应用景。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410241047_519756_2672081_3.jpg粉防己碱结构式1 粉防己碱药理作用1.1 心血管系统的作用(1) 抗心律失常:Tet可拮抗哇巴因及氯化钙诱发的心律失常 ,但对乌头碱及电刺激引起的心律失常拮抗作用较弱或不明显。其作用机制与维拉帕米相似 ,与拮抗Ca2+内流有关。(2) 抗心肌缺血、缺氧及再灌注损伤:Tet可减轻大鼠工作心脏缺血再灌注心肌损伤 ,促进冠脉流出液、心输出量的恢复 ;防止左心室舒张末期压和等容舒张左室内压下降时间常数的升高 ;抑制肌酸激酶释放 ,维持心肌线粒体Ca2+ 稳态,表明Tet尤对心肌舒张功能和冠脉循环的保护为优。(3) 降压作用:Tet可显著降低自发性高血压大鼠的平均动脉压 ,抑制主动脉平滑肌的持续性收缩。还有助于慢性肺源性心脏病时肺动脉高压的降低和肺腺泡内动脉构型改善。1.2 脑缺血缺氧作用 Tet可显著提高脑细胞对缺血缺氧的耐受性。Ca2+超负荷可导致大脑细胞损伤 ,细胞线粒体内Ca2+聚集致氧化磷酸化受阻 ,导致三磷酸腺苷 (ATP)耗竭 ; Ca2+激活蛋白酶和磷酸脂酶而破坏结构的完整性 ,加重脑细胞的损伤 ,加之乳酸中毒使脑细胞膜和血管通透性增加 ,引起细胞毒性脑水肿。Tet作为钙拮抗剂可阻止Ca2+ 内流 ,减轻脑水肿 ,一定程度上逆转了上述病理过程 ,对脑缺血损伤有明显的保护作用。1.3 [font=宋体