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固相萃取柱在不同乳制品中检测三聚氰胺的应用
食品中测三聚氰胺,哪种阳离子交换固相萃取柱最好用?
固相萃取柱在不同乳制品中检测三聚氰胺的应用 在检测奶制品中三聚氰胺前处理过程中,使用的强阳离子交换固相萃取柱的质量会影响三聚氰胺的准确性测定。不同厂家的强阳离子交换固相萃取柱,同一厂家不同批次的强阳离子固相萃取柱及同一家同一批次,在不同的操作者及操作条件都可以对三聚氰胺的准确检测产生影响。不同类型的奶制品中所含的杂质成分不尽相同,因此对三聚氰胺准确性检测的影响程度不一样。 由于本实验室没有质谱检测器,因此只能选择不同厂家的阳离子固相萃取柱研究前处理过程,三聚氰胺检测的不稳定性;选择不同的奶制品研究杂质成分对三聚氰胺准确检测的影响。 1 原理 试样中三聚氰胺经水和乙腈提取后,用液相色谱测定,外表峰面积法定量。2 试剂 方法中所用试剂,除另有所规定外,均为色谱纯,水为超纯水。2.1 乙腈:色谱纯2.2 柠檬酸:分析纯2.3 辛烷磺酸钠:色谱纯2.4 50%甲醇水:准确量取50mL甲醇和50mL水,混匀后备用2.5 三聚氰胺标品:2.6 三聚氰胺标志着储备液:精确称取三聚氰胺(Melamlne C14861400 )0.1005g,用50%甲醇水溶液溶解定容至100mL的容量瓶中,混匀,得1mg/ml三聚氰胺标准储备液,于4℃保存,保存期为3个月。2.7 微孔滤膜:0.45µm,有机相水相3 仪器设备 3.1高效液相色HPLC(岛津):配有紫外检测器或二极管阵列检测器 3.2分析天平(感量为0.0001g):METTCER TVLEDV AB204-N 3.3高速离心机(转速不低于4000r/min):上海安亭科学仪器厂 3.4超声波水浴:SCIENCE AS5150 3.5涡旋混合器:上海青浦沪西仪器厂 XW-80A 3.6水浴氮吹仪:HGC-12A 3.7无油隔膜真空抽滤泵:天津市津腾实验有限公司 CM-033A 3.8PH计:METTCER TOLEDO 1231265113 3.9固相萃取装置:CMW 3.10优普纯水仪器4 试剂配制4.1标准曲线:用不含盐的超纯水将(2.6)三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到浓度为10,8,4,2,1,0.1µg/ml的标准工作液,浓度由低到高进样检测,以峰面积,浓度作图,得到标准曲线回归方程。4.2缓冲液:2.1000g柠檬酸钠+2.1600g辛烷磺酸钠于1000ml容量瓶,加入约980ml超纯水溶解,充分溶解后定容至1000ml4.3 95%氨化甲醇:准确量取5ml氨水于100ml容量瓶,加甲醇定容至100ml4.4 20甲醇水:准确量取20ml甲醇于100ml容量瓶,加超纯水定容至100ml5 实验方法5.1HPLC色谱条件: 分析柱:C8 4.6mm×250mm,5.0µm 流动相:准确称取2.1000柠檬酸和2,1600g辛烷磺酸钠,加超纯水溶解定容至1L,调 节PH3.0 备用 流速:1.0mL/min进样量:20µL柱温:40℃波长:240nm检测器:紫外检测器,254nm波长根据保留时间定性,外表分面积法定量。5.2样品处理 准确称取2.0000-3.0000g(精确到0.0001g)试样(液态纯牛奶、酸奶、奶粉)于25mL比色管中,加入10mL三氯乙酸,振荡均匀,加5mL乙腈,再加三氯乙酸定容至25mL,振荡混合后超声提取20min,然后移到50ml离心杯中,4000r/min离心20min。 净化:用3mL甲醇、3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱,准确移取5mL上待净化澄清液上柱,再用3mL水、3mL甲醇除杂,然后用6ml95%氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,控制过柱速度在1ml/min。洗脱液于50℃下用纯度99.99%氮气吹干,残留物用1mL20%甲醇水溶液定容,涡旋振荡1-2min使其充分溶解,过0.45µm滤膜,待HPLC分析。data:image/png;base64,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