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在自然界存在一种叫做土壤杆菌的细菌,它能感染植物的受伤组织,特别是根茎交接处的受伤组织,引起冠瘿瘤。冠瘿病损害为数众多的双子叶植物,特别是葡萄、核果类树木和观赏植物。冠瘿细胞是植物肿瘤细胞,在许多方面与动物肿瘤细胞类似。它们只有无限生长的能力,把一小块冠瘿组织放入不含植物激素的培养基中培养,能长成大的细胞团块(愈伤组织),而正常植物细胞在不加植物激素的培养基中则不能生长。冠瘤拥胞能制造一类叫做冠瘿碱(opine)的氨基酸衍生物(如章鱼碱和蓝曙红),供根癌土壤杆菌作为养料使用,在正常植物细胞中从未发现过这类物质。 根癌土壤杆菌能把植物细胞转化为肿瘤细胞,是由于它含有一种肿瘤诱导质粒,简称Ti质粒。当细菌感染植物时,Ti质粒中大约占这个质粒l/10的DNA片段(称为转移DNA或T—DNA)进入植物细胞,并整合到植物的染色体上,随染色体一起复制。随后T—DNA携带的细菌基因(致瘤基因和合成冠瘿碱的基因)使在植物细胞中表达,使植物细胞转化成肿瘤细胞,并合成冠瘿碱。由于根癌土壤杆菌能把细菌基因引入植物细胞,并在那里表达出蛋白质来,所以人们称它为天然的“遗传工程师”。这给人们以启示。能否用重组DNA技术把与高产、优质、抗病、抗旱和抗盐碱等优良件状有关的基因循人到T—DNA中,然后再通过根癌土壤杆菌的感染把这些基因引入植物细胞呢?最近几年的研究进展表明,这是完全可能的。 Ti质粒是独立复制的环状DNA分子。由大约1.5—2xl05碱基对组成,相当于细菌染色体的3—5%。它有两个主要类型:一类叫章鱼碱质粒,含有这种质粒的细菌能以章鱼碱为氮源和碳源生长;另一类叫蓝署红质粒,含有这种质粒的细菌能利用蓝曙红。每一种根癌土壤杆菌只含有一种Ti质粒,或者是章鱼碱质粒,或者是蓝曙红质粒。这两种质拉的DNA同源性很低,一般为12—16%,说明它们可能具有不同的进化史。T—DNA是Ti质粒中最重要的组成部分.它所携带的基因主要有两个功能:一是决定肿瘤的形成和肿瘤的形态;二是控制冠瘿碱的合成。如果T—DNA中的致瘤基因发生突变,可能出现三种表型:一是产生比正常肿瘤个大的肿瘤;二是使肿瘤长出许多根;三是使肿瘤长出许多芽。在T—DNA区域以外也有一些基因已被定位,其中毒性基因的功能是决定根癌土壤杆菌对植物的感染以及T—DNA的进入和整合;章鱼碱代谢基因和蓝曙红代谢基因分别编码代谢这两种冠瘿碱的酶;质粒转移基因控制细菌的接合作用;不相容性基因控制Ti质粒与其它质粒的不相容性。 Ti质粒之所以能成为把外源基因引入植物的良好载体有两方面的原因。第一,携带质粒的根癌土壤杆菌的寄主范围很广,实际上它能转化所有的双子叶植物。第二,整合到植物染色休上的T—DNA能随种子遗传,而且T—DNA有自己的启动基因,可以启动与其连接的外源基因的转录。此外,也有人研究以植物病毒DNA为载体转移目的基因,或者直接把DNA注射到植物的花粉管和子房中。Ti质粒直接用作基因载体有两个困难:一是它的分子量太大,内切酶位点很多,不容易进行体外重组DNA操作;二是被T—DNA转化的植物细胞成为肿瘤细胞,不能再生成植株。克服第一个困难的办法是先把T—DNA克隆到大肠杆菌的小质粒上,把目的基因插入到小质粒的T—DNA中,然后再设法转移到天然的Ti质粒中。克服第二个困难的办法是在T—DNA的特殊位点中插入目的基因和供筛选用的抗药基因,一方面使致瘤基因发生插入突变,从而使转化细胞能再生成植株,另一方面使目的基因正好位于T—DNA的启动基因的下游,以便启动目的基因的转录。有人经过研究发现了这样一种作用模型:大多数双子叶植物受伤后会产生一种叫丁香酮(acetosyringone)的物质,这时土壤农杆菌感染后,丁香酮在Ti质粒上Vir A的产物A的协同作用下促进了Vir G产物G的活化(即磷酸化),然后产物G相继激活Vir B、V ir c、Vir D、Vir E等操纵子,特别是Vir D和Vir E。前者产生两种蛋白,D1为缺刻酶(nickase),它能特异性地在T—DNA两端产生缺刻;D2则是一种蛋白复合物,它粘在已断开的T—DNA的两端,具“导航”的功能,有人认为它是Rec A,起重组的作用。后者产生单链结分蛋白(SSB),有保护缺刻产生后的T—DNA的功能。T—DNA在诸多蛋白的导航、保护下重组进核基因组。这种转比方法优点是方便,不需分离原生质,且插入的基因拷贝数目少,比较稳定。但它的缺点是土壤农杆菌主要只适于侵染双子叶植物,单子叶植物能被侵染的较少,这就在一定程度上影响了这种方法的推广。有人发现单子叶植物受伤后很少产生丁香酮,这是否是侵染的关键呢?目的许多实验室都在作这方面的探索,以期望能克服这种方法的局限性。http://hiphotos.baidu.com/wfvcshengwu/abpic/item/629fdb39539824d63b87ce6e.jpg
请问各位老师:检测土壤中的芽孢杆菌数和细菌总数需选择什么型号的显微镜,价格
革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌,该类群中与食品关系密切的菌属如下。1.芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢,对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧,绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。此外,也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B.ccrcl2S):该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中,污染牛乳后可产生卵磷脂酶,破坏脂肪球膜,使得脂肪不能很好地乳化,还可以产生类似凝乳酶的酶,使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃,pH值为4·9~9·3,发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后,可以引起食品腐败变质,并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等,引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B.subtilis):该菌菌落呈圆形或不规则形状,表面粗糙或有皱纹,呈奶油色或褐色,菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后,可以使发酵面团产生液化黏丝状现象,使烤制的面包**头出现斑点或斑纹,并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌,但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长,可以使牛乳变稠,有时在不变酸时使牛乳凝固,即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B.megaterium):该菌可以在含氨的环境中生长,不需要生长因子,无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下,于葡萄糖肉汤中不生长,多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到,可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体,使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus):该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落,表面光滑或粗糙,能在49~65℃范围内生长,对热的抵抗力很强。该菌在pH值5.0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B.coagulans):该菌菌落为不透明的小菌落,生长温度范围为18~60℃,可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长,产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸,不产气。该菌能在pH值3.5~**5的食品中生长,引起食品变质,罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中,通常使乳形成坚实凝结,偶尔呈碎片状凝结,并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2.梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌,只有少数种可在大气条件下生长,但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形,位于菌体中央,使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2.5%~6.5%NaCl浓度的渗透压,对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C.butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇),在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C.putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸,产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物,在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化,在熟肉上生长使肉变黑,在罐头中生长时,因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c.botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素,当人们食入含有该毒素的食品时,可发生毒素型食物中毒,早期症状为全身无力、头痛、头晕,继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C.terni)是人和动物的破伤风病病原菌。