利巴韦林标准品

一.背景： 被曝光违规喂食金刚烷胺、利巴韦林等抗病毒药品的&ldquo 速生鸡&rdquo 流入市场，对多家餐饮企业都产生非常大的负面影响。利巴韦林又名病毒唑、三氮唑核苷、尼斯可等，是广谱强效的抗病毒药物，目前广泛应用于病毒性疾病的防治。利巴韦林通常会抑制谷胱甘肽，从而影响红细胞的细胞膜，使氧的红血球细胞溶解，从而可能引起贫血，这也可能恶化已经存在的心脏疾病，另外经动物实验证明利巴韦林还有致畸性、致癌性和生殖毒性等。 鉴于利巴韦林会在动物组织中有残留，所以政府有关部门开始禁止使用利巴韦林等防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病。我国对于动物源性食品中利巴韦林残留含量的相关研究报道属于空白，也未曾制定或立项过国家标准、行业标准，国际上也无特定限量要求及相应检测方法。而且经多方面验证目前还没有准确合适的检测方法。 利巴韦林是弱碱性的极性小分子，易溶于水，所以本实验采用水和乙腈的混合溶液提取鸡肉中的利巴韦林。经实验证明，离子交换类填料对其吸附不稳定，所以本实验采用MAS-QuChERS方法进行净化处理，利用MAS填料直接吸附鸡肉提取液中的杂质，利用LC-MS/MS检测技术建立了动物源性食品中的利巴韦林的快速检测方法。 化合物名称 英文名 结构式 CAS编号 利巴韦林 Ribavirin Granules 36791-04-5 二.实验部分 2.1仪器与试剂 API 4000+质谱检测器，配液相色谱仪；高速离心机；涡旋振荡混合仪；超声波振荡器；氮气浓缩仪。 利巴韦林专用MAS净化管；利巴韦林标准品（纯度99%）。甲醇、乙腈 (色谱纯，博纳艾杰尔科技)、甲酸（色谱级）、实验用水为超纯水；一次性无菌注射器（博纳艾杰尔科技）；针式过滤器(0.22&mu m，直径13mm博纳艾杰尔科技)。 2.2 溶液的配制 标准储备溶液：准确称取利巴韦林标准品适量，用超纯水溶解并定容配制成1mg/mL。 标准工作液：用超纯水稀释至合适浓度。 2.3 样品的提取和净化 酶解前处理方法：准确称取1g（精确至0.01g）均质好的鸡肉至 50 mL 离心管中，加入5mL10mmol/L乙酸铵溶液（pH=4.8）和20ul磷酸酯酶，涡旋混合2min，于37℃下酶解2h，取出冷却至室温，8000r/min离心5min，取全部上清液加入10ml乙腈，涡旋1min后8000r/min离心5min，取5mL上清液加入MAS净化管中，涡旋1min后8000r/min离心5min，取全部上清液于50℃氮气吹干后，用1mL水复溶过0.22&mu m滤膜，待测。 2.4 样品的检测 2.4.1 色谱条件 色谱柱：Venusil MP C18（2.1*150mm，5&mu m，100Å ）； 流动相：0.1%甲酸水溶液-甲醇=95:5 流速：200&mu L/min； 柱温：30℃； 进样量：5&mu L； 2.4.2 质谱条件 电离模式：电喷雾电离正模式；检测方式：多反应监测（MRM）；离子源温度（TEM）：550℃，Curtian Gas: 10，Ion Source Gas 1: 70，Ion Source Gas 2:75 表1 质谱参数 化合物 保留时间/min Q1 Q3 Decluster Potential Collision Energy 利巴韦林 3.36 245.4 113.0 53 39 96.2 53 13 下划线表示定量离子 2.5 实验结果 2.5.1 方法线性关系和定量限 分别添加利巴韦林标准溶液至均质好的鸡肉中，使其形成浓度分别为5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg、50ug/kg、100ug/kg的基质添加样品，在通过2.2所述方法提取净化后检测，以检测得到的峰面积，以样品添加浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标拟合其线性方程，按照S/N=10计算得到该方法的最低定量限。 物质名称 回归方程 相关系数 最低定量限(S/N=10) 利巴韦林 Y=2285.5x-1991.5 0.9984 5ug/kg 表2 线性和检出限 图1 10ug/kg标准品谱图 2.5.2 方法的稳定性 在均质好的鸡肉中添加利巴韦林标准品溶液使其形成10ug/kg的基质添加样品，按照上述方法在相同的条件下检测，按照测得的利巴韦林的出峰时间及峰面积的值计算该方法的稳定性。 表3 方法稳定性 编号 1 2 3 4 5 RSDn=5 ，% 保留时间（min) 3.43 3.41 3.43 3.413.39 0.49 峰面积 23384 21983 22346 23155 24198 1.39 图2 10ug/kg鸡肉加标谱图 2.5.3 准确度与精密度 以均质好的空白净化后溶液加标实验证明该方法基质对目标物检测存在影响，所以在实际样品检测过程中，以空白净化后溶液加标为基础计算样品添加的回收率。 分别在均质好的鸡肉中添加利巴韦林标准品溶液使其分别称为含有5ug/kg和20ug/kg的基质添加样品，按照上述方法净化、检测后，测得的该方法的准确性结果如下。 表4 基质添加实验结果与稳定性 添加浓度 1 2 3 RSDn=3 5ug/kg 78% 87% 95% 9.6% 20ug/kg 75% 70% 79% 6.0% 图3 鸡肉空白谱图 2.6 订货信息 产品名称 规格型号 货号 报价 利巴韦林MAS净化管 15mL，50/PK MS-LBWL01 980 Venusil MP C18 2.1*150mm，5&mu m，100Å VA951502-0 3300 针式过滤器PTFE 0.22&mu m，直径13mm,200/PK AS081320 800 一次性无菌注射器 5mL,100/pk ZSQ-5ML 90 乙腈 4L/瓶 AH015-4 330 甲醇 4L/瓶 AH230-4 120

氢型强阳离子交换(磺化苯乙烯－二乙烯基苯共聚物)色谱柱 在利巴韦林注射液分析中的应用 色谱条件： 色谱柱：磺化苯乙烯－二乙烯基苯共聚物离子交换柱(100× 7.8mm，7&mu m，天津博纳艾杰尔科技有限公司，订货号：PSsul 0720008) 流 动 相：水(硫酸调pH=2.5± 0.1，0.45&mu m水膜过滤) 检测波长：207nm， 柱 温：65℃ 进 样：20&mu L 样 品：利巴韦林标准品(1.0mg/mL，流动相溶解) 利巴韦林注射液样品(1mL利巴韦林注射液置于100mL容量瓶中，流动 相稀释至刻度) 利巴韦林标准品色谱图 利巴韦林注射液样品色谱图 利巴韦林标准品和注射液测试结果 保留时间 min 拖尾因子 理论塔板数 利巴韦林标准品 4.254 1.02 3746 利巴韦林注射液 4.229 1.05 3522 05版《药典》要求 N/A 0.95~1.05 实验结果表明，利巴韦林标准品和供试品的出峰时间相近，拖尾因子在0.95~1.05之间，理论塔板数在3000以上，均达到中国药典2005版的要求。 详情请见：www.agela.com.cn/web/news/detail.asp

Austin Hayes（奥斯丁海斯集团公司）是美国著名涂层翻新公司，至今已有50多年的弹药箱翻新经验和30多年的专业表面涂层服务经验。最近，当他们在回收被有害物质CCA（Chromium，Copper，Arsenate，即铬、铜、砷酸盐）污染的弹药箱时，发现没有健康指南以保证员工以高效和无风险的方式处理这些受污染的材料。因此，Austin Hayes与奥林巴斯合作，使用Vanta手持式XRF创建了新的健康和安全协议。 安全处理在弹药箱中发现的有害物质是人们主要关心的问题。铬、铜和砷酸盐都会对人体产生一系列的急性和慢性健康影响，它们可以通过吸入、摄入和/或吸收进入人体。这些物质会造成呼吸系统问题，造成神经系统损伤、心脏症状甚至癌症。简单地说，CCA可能是致命的，应该尽一切努力将其暴露程度降到最低。 这项任务的第一步是查明这些木材究竟受到了多大的污染。奥林巴斯手持式XRF分析仪能够快速提供准确可靠的材料信息，可以轻松实现这一目标，它可以计算木材中不同物质水平的非常具体的读数。为了更高效地使用这项技术，Austin Hayes管理团队的两名成员还参加了强化辐射意识课程，学习了有关安全有效地进行这部分过程的所有知识。 这是一项具有创造性的工作。为了获得尽可能精确的结果，测试人员使用了一种熟悉的方法——表面擦拭取样——来检测表面灰尘中的铅含量。实验中，测试人员试图复制 Austin Hayes的员工接触污染木材的各种方式，以说明这如何影响CCA可能的转移。为了保证实验的可靠性，测试人员反复试验，确定在处理木材时，CCA可以转移到皮肤上。这是因为它之前曾被作为液体使用，然后被吸收到木材中。因此，接触的风险可能是由干燥的CCA颗粒接触到手上，然后理论上被吸入、摄入或吸收到体内，对工人的健康构成风险。 最终，在奥林巴斯Vanta手持式XRF分析仪的帮助下，Austin Hayes制定了新的健康和安全协议。 通过投资一台奥林巴斯手持式XRF分析仪和对所有的员工进行相应的培训，Austin Hayes的整个团队都获得了新的机会。探索这一未知领域，了解受污染的材料相互作用，并识别它们，从而能够安全地处理和处置它们，使Austin Hayes成为一家具有独特能力的公司。