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培养结核杆菌的培养基,从性状上分主要有固体培养基、液体培养基、半流体培养基、固液双相培养基等类型,这些培养基各有特点。 1.1 固体培养基 最常用的是罗氏(Lownstein-Jenson,L-J)培养基,也是最具代表性的一种,其他的还有小川辰次(Tatsujiogawa)鸡蛋培养基和Middle brook 7H10、7H11等琼脂培养基等。在固体培养基中,由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用,因此常用于临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面,缺点是结核菌生长缓慢。 1.2 液体培养基 常用的有苏通(Sauton)培养基、Middle brook 7H9等液体培养基。结核杆菌在液体培养基中能够更广泛的接触营养成分,因此在液体中生长相对较快,主要在液体表面生长,搅动时下沉至管底,可获得大量的结核杆菌。主要缺点是:在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面;不能根据肉眼观察菌落形态;培养基污染机会多,影响结核杆菌的生长,污染时不易与结核杆菌鉴别,需涂片染色镜检判断结核杆菌是否生长。 1.3 半流体培养基 改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合培养基,基质透明,呈半流体状态,生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于培养基中段,便于观察。 1.4 固液双向培养基 Septi-Check AFB双相培养基是国外应用较早的一种培养基,采用BD专利式封闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middle brook 7H9分枝杆菌专用增菌培养基,可迅速繁殖分枝杆菌,固相为3种固体培养基平面:Middle brook 7H11和改良的L-J培养基用于及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落,巧克力琼脂用于早期发现污染菌,避免时间浪费。由于有液相作为基础,因此结核杆菌生长较快,也是一种非常有效的培养基。国内有用平菇制备的平菇双相培养基是利用平菇浸出液为基础,加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基,根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少,主要特点是成本低,制备简单,适合于基层使用,有一定的研究价值。
1.固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后,单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团,称为菌落(colony)。(1)菌落的形态特征:大小、形状(露滴状、圆形、菜花样、不规则等)、突起或扁平、凹陷、边缘(光滑、波形、锯齿状、卷发状等)、颜色(红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等)、表面(光滑、粗糙等)、透明度(不透明、半透明、透明等)和粘度等。据细菌菌落表面特征不同,可将菌落分为3型: ①光滑型菌落(S型菌落):菌落表面光滑、湿润、边缘整齐,新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落(R型菌落):菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状,边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整,毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型,如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落(M型菌落):菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征:菌落溶血有下列3种情况。①α溶血:又称草绿色溶血,菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环,为高铁血红蛋白所致;②β溶血:又称完全溶血,菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环,是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致;③γ溶血:即不溶血,菌落周围的培养基没有变化,红细胞没有溶解或缺损。(3)色素:有些细菌产生水溶性色素,使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色,产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味:某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味,如铜绿假单胞菌(生姜气味)、变形杆菌(巧克力烧焦的臭味)、厌氧梭菌(腐败的恶臭味)、白色假丝酵母菌(酵母味)和放线菌(泥土味)等。
在做沙门氏菌时,在HE培养基上长出桔红色菌落,培养基也变成红色了,做革兰氏染色为阳性菌,请问这是什么菌?各位大神有知道的么?