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药材黄柏中多种成分检测 黄柏是一种中药材,属于芸香科植物黄皮树的干燥树皮。味极苦,略咸。具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮、滋阴降火等药物疗效。是治疗湿热泻痢、带下阴痒、涩痛火旺、脚气痿躄、劳热躁汗、阴虚遗精、疮疡肿毒、湿疹湿疮等病症良药。 黄柏中含有丰富的药物成分,其中以盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱为主。这两种成分也是药典中明确要求检测的项目。同一药材中的这两种成分药典检测方法还不一样,下面我们就来看看。 高效液相色谱法检测药材黄柏中盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱含量。实验部分【原理】 精密称取适量黄柏样品经流动相溶解,超声提取后注入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性,峰面积定量)计算,得出所测成分含量。【仪器及试剂】 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+自动进样器+在线脱气机等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平(0.0001),药典筛(三号筛、四号筛)等。 试剂:乙腈(色谱纯),磷酸(分析纯),十二烷基磺酸钠(优级纯),超纯水等。 这两种成分的结构及特性及药材中的含量等差异可能有些大,药典中的方法是分开检测的,下面我们先来检测黄柏中盐酸小檗碱。【样品制备】 对照品溶液制备:精密称取盐酸小檗碱对照品2.5mg于25ml容量瓶中,加流动相溶解、定容,制成0.1mg/ml盐酸小檗碱对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取黄柏药材适量,充分粉碎后过药典筛三号筛,精密称取过筛后粉末0.1g置于100ml容量瓶中,加流动相80ml,超声处理40分钟,放冷,用流动相稀释至刻度,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:265nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=50:50(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:5μl【色谱图】对照品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312252_563822_2536753_3.png供试品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312252_563823_2536753_3.png 下面我们再来检测黄柏中盐酸黄柏碱。 原理、仪器及试剂和上面一样,在此略过。【样品制备】 对照品溶液制备:精密称取盐酸黄柏碱对照品2.5mg于25ml容量瓶中,加流动相溶解、定容,制成0.1mg/ml盐酸黄柏碱对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取黄柏药材适量,充分粉碎后过药典筛四号筛,精密称取过筛后粉末0.5g置于具塞锥形瓶中,加流动相25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用流动相补足减少的重量,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:284nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=36:64(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:5μl【色谱图】对照品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312253_563824_2536753_3.png供试品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312253_563825_2536753_3.png 药典这个方法有些麻烦,对于成分不是特别复杂的药材大可不必这样,两个方法合并成一个方法完全可以搞定。下面我们就来看看。 原理、仪器及试剂和上面一样,在此略过。【样品制备】 对照品溶液制备:精密称取盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱对照品各2.5mg于25ml容量瓶中,加流动相溶解、定容,制成0.1mg/ml盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱混合对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取黄柏药材适量,充分粉碎后过药典筛三号筛,精密称取过筛后粉末0.5g置于100ml容量瓶中,加流动相至刻度,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用流动相补足减少的重量,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:序号时间(min)波长(nm)10285217285317.1265430265色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液(每100ml磷酸溶液中加十二烷基磺酸钠0.2g)=40:60(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:5μl【色谱图】对照品溶液色谱图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312253_563826_2536753_3.png供试品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508312253_563827_2536753_3.png 这样一个方法很方便的就把两种成分检测了出来,效果还不错。但由于这两种成分在该条件下的响应值和在样品中的含量有很大的差异,这样就导致一个色谱峰很大另一个偏小,对检测结果和色谱效果都有一定影响。 这样检测时我们就得考虑样品中多种成分在同一条件下的响应值及各自的含量,这两个因素如果差异不大,用同一种检测方法检测完全没问题。但如果差异较大,实验对结果准确度要求又不太高,这种方法就非常有优势,检测方便、快速。但如果对结果的准确度要求很高,这种方法最好别用,以防得不偿失。 同一样品检测方法很多,各有优势,实验时我们一定得立足现状,充分考虑样品及实验具体情况,满足实验要求是第一位的,切不可盲目的追求快而丢了准,或是盲目的追求准而浪费了时间、经费和精力等。 实验要求第一位,切记! 以上是个人点小小的心得,仅供参考。
流动相比例和色谱柱长度对关黄柏检测的影响 关黄柏是一种药材,属于芸香科植物黄檗的干燥树皮,去除外表粗皮,晒干既得。一般为黄色,黄绿色,棕黄色等。味极苦,具有清热去火、除湿止泻、解毒止痛等多种药物功效,可治疗和预防多种疾病,是中药材中比较便宜而实用的一种。 现在药典对中药材都有严格的检测项目,关黄柏也不例外。下面我们具体介绍下关黄柏高效液相色谱检测方法及效果。实验部分1.原理 取关黄柏适量,粉碎过药典筛三号筛,60%乙醇溶解提取,注入高效液相色谱系统,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性、峰面积定量)计算出结果。2.仪器及试剂 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+梯度泵+柱温箱+在线脱气机等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平,药典筛(三号筛)等。 试剂:乙腈(色谱纯),磷酸二氢钠(分析纯),磷酸(分析纯),乙醇(分析纯),超纯水,盐酸小檗碱对照品、盐酸巴马汀对照品等。3.样品制备 对照品溶液制备:分别准确称取盐酸小檗碱对照品、盐酸巴马汀对照品各2.5mg于50ml容量瓶中,加60%乙醇适量,使对照品完全溶解,再加60%乙醇至刻度,摇匀,配制成各含50μg/ml的混合对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取关黄柏适量,充分粉碎后过药典筛三号筛,精密称取过筛粉末0.2g于50ml容量瓶中,加入60%乙醇30-40ml,超声处理1小时,放冷,加60%乙醇至刻度,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,滤液待测。 4.色谱条件检测器:紫外检测器检测波长:345nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm × 4.6 mm,5μm )流动相:A(乙腈):B(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=25:75(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:10μl5.色谱图对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562126_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562127_2536753_3.png供试品局部放大色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562128_2536753_3.png 上面这种流动相方式,供试品色谱图被测物峰后面杂质没被洗脱出来,这样进几针样品后色谱柱柱容量就会下降,很有可能会影响到后面的检测。6.流动相改为:A(乙腈):B(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=30:70(V:V),其它条件不变,效果如下。色谱图对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562129_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212212_562130_2536753_3.png供试品局部放大色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562131_2536753_3.png 上面这种流动相方式,色谱图中被测物保留时间缩短了,但分离度也差了,也可能有一些杂质没被洗脱出来,检测结果的准确性可能会受到一定程度影响。7.下面采用梯度洗脱方式,其它条件不变,梯度表:序号时间(min)A(%)B(%)102575220257534065354419010 50901055125756652575色谱图对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562132_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562136_2536753_3.png供试品局部放大色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562134_2536753_3.png 这种流动相方式效果就很好,既达到保留时间短的效果,又保证了分离度,检测结果准确、可靠,连续进样也不会受到影响。8.色谱柱长由250mm变为150mm,流动相仍采用:A(乙腈):B(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=25:75(V:V),其它条件不变,效果如下。色谱图对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508220959_562145_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212213_562136_2536753_3.png 这种方式,被测物的保留时间更短了,但分离度也更差了,色谱柱理论塔板数也明显低了,这种方式不适合该样品检测。 看来流动相和色谱柱对检测效果影响很大,主要体现在保留时间、分离度和色谱柱理论塔板数上。9.总结1)对于反相色谱来说流动相中有机相比例越高被测物保留时间越短,分离度越差,色谱柱理论塔板数越低,反之相反。2)流动相中有机相比例低到一定程度,样品中某些成分可能洗脱不出来,一是可能影
哪位老师帮忙解答哈黄柏的供试品和对照药材不出点的问题啊?没有盐酸黄柏碱对应的点,急! [img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/02/202102281401144420_8460_4147998_3.png[/img]