质谱的离子对试剂

[align=center] [/align] [font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][size=18px][color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中，我们在分析离子化合物样品时，为使目标峰有较好的保留，开发方法时会考虑加入离子对试剂（IPRs）以增加保留并改善峰形，这种也称离子对色谱法（IPC）。离子对试剂种类较多，今天小编就和大家分享下离子对试剂的类型。 根据离子对试剂的历史地位和物理化学性质等，其类型有以下几种： 01、传统离子对试剂 这类是最早被使用，到现在也是最常用的，包括以下两类： ? 阳离子型离子对试剂：常见的是带有不同链长烷基的有机胺或者铵盐，比如三乙胺，四丁基溴化铵等，加入流动相中可以增强阴离子型分析物的保留。 ? 阴离子型离子对试剂：常见的是烷基磺酸盐，比如十二烷基磺酸钠，庚烷磺酸钠等，加入流动相中可以增强阳离子型分析物的保留。 02、挥发性离子对试剂 现在越来越多的实验室配置有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]设备，传统的离子对试剂没有挥发性，不能与质谱兼容。另外，为增加分析物的保留加入的离子对试剂，可能也会对分析物的离子化产生影响，需要使用与MS兼容的离子对试剂。 甲酸、乙酸等小分子有机酸是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]分析中常用的挥发性离子对试剂，会影响对pH条件敏感的化合物的保留行为，改变它们的带电性并提供质子化的作用。同时，这些有机酸也能够抑制色谱柱填料表面残余硅羟基的活性，对分析物的峰形有利。 当分析物对酸不稳定或者在低pH条件下没有较好分离时，可能需要更中性的条件，这种情况就需要用到挥发性盐比如甲酸铵，乙酸铵等，这些盐的pH能兼容正离子和负离子模式的检测，要注意的是使用这些盐，要关注在有机溶剂（特别是乙腈）中的溶解性。 在多肽、氨基酸等项目分析中，全氟羧酸类（如三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）、五氟丙酸（PFPA））的应用增加。这类试剂也可以抑制硅醇活性、改善峰形。其中TFA由于水溶性好和低的截止波长使用广泛；HFBA有区别于TFA、PFPA的选择性，也被用于与MS联用，但是它一定程度上会污染质谱。 03、离液剂 离液剂是一种可以扰乱水分子间的氢键、增加其混乱度的盐，在离子对色谱中常见的是高氯酸盐、六氟磷酸盐、四氟溴酸盐等。加入合适的离液剂可以增强离子型分析物的疏水性，从而提高其保留。 注意事项 1）某些情况下需要严格控制流动相的pH以及检测的柱温，另外，对于要加入挥发性离子对试剂的流动相，配制时建议在溶剂液面以下放液，避免出现重现性问题。 2）使用离子对试剂的流动相条件，有时会观察到同时出现正峰和负峰的现象，这些峰会干扰建立方法或者日常检测，这类问题，主要是使用不纯的离子对试剂、缓冲盐或者其他其他流动相添加剂等。另外，不纯的离子对试剂，也影响分析物的保留时间。 3）使用含离子对试剂的流动相，特别是疏水性较强的离子对试剂，柱平衡缓慢，如果平衡时间不够，会出现保留时间漂，结果不稳定的情况，一般建议含离子对试剂的流动相采用等度洗脱条件，因为走梯度，易出现基线波动和保留重现性问题，为保证色谱柱达到较好的平衡状态，使用前最好能小流速过夜平衡。 4）较弱的离子对试剂，比如TFA、PFPA以及离液剂，这些试剂不会减慢柱平衡过程，通常用流动相平衡10-20倍柱体积就足以达到平衡。 5）当样品中同时含有酸性和碱性化合物时，这两种IPC试剂都可能有效，但我们不能把这两种试剂都添加到流动相中，这些试剂之间有形成离子对的趋势，会抵消它们对分离的净效应，而且同时使用两种试剂还会使方法建立变得复杂。 6）当需要有选择性地增加碱性溶质的保留时，首选的IPC试剂应是烷基磺酸盐，而四烷基铵盐则在需要增加酸性溶质的保留时应用。[/color][/size][/font]

使用液相色谱法分析电离能力比较强的样品时，样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留，这时要加入相应的离子对试剂，将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子。我们使用离子对试剂将它留住。一、离子对试剂的定义：离子对试剂是由强亲水离子形成，反作用于样品分子的中性离子对。因此，可用于同时分离带电分子和非带电分子。二、适用范围：一般可适用所有色谱固定相。当使用长链的离子对试剂时，如：十六烷基硫酸铵或十二烷基硫酸钠，色谱柱将选用反相色谱柱。三、使用浓度：离子对试剂的适用浓度短链离子对试剂：5×10-3mol/L 长链离子对试剂：5×10-4mol/L使用液相色谱法分析电离能力比较强的样品时，样品在反相色谱柱上的保留时间很短或者根本不保留，这时要加入相应的离子对试剂，将分析物上的离子进行结合，形成在柱子上有保留的分子。就像是一个物质要穿色谱柱而过时，我们使用离子对试剂将它留住。离子对试剂是在高效液相色谱法中引入了离子色谱方法的一种表现。它主要是作用于样品和固定相之间的一种物质，所以在选择离子对试剂时，要考虑色谱柱的填料和样品的酸碱性。离子对试剂的种类和浓度对分离效果都有较大的影响.离子对试剂种类的选择依赖于被分离样品的性质.被分离溶质是强酸或强碱,离子对试剂可以是强酸或强碱,弱碱或强酸,弱酸,如被分离的溶质是弱酸或弱碱,则选用的离子对试剂必须是强碱或强酸.对于溶质结构性质相差较大的混合样品,离子对试剂种类的选择并没有特殊要求.离子对试剂疏水性的差别可以通过调节离子对试剂浓度和有机溶剂浓度获得满意的分离效果。离子对试剂用于高压液相离子对萃取的液相色谱法分离分析强极性有机酸和有机碱的好方法。广泛应用于生物化学，药物学，和石油化工等领域。一、用于酸性化合物 1、四丁基氢氧化铵（10%水溶液） 2、四丁基溴化铵3、十二烷基三甲基氯化铵二、用于碱性化合物 1、戊烷磺酸钠2、己烷磺酸钠 3、庚烷磺酸钠4、辛烷磺酸钠5、癸烷磺酸钠离子对试剂是高效液相色谱专用试剂，主要分析测试有机碱类离子化合物，代替离子交换法，具有可靠的分离效果。也可用于分析多肽和蛋白质，是制备抗静电聚脂纤维的中间体.常用离子对试剂1-戊烷磺酸钠 CAS:22767-49-31-己烷磺酸钠 CAS:2832-45-31-庚烷磺酸钠 CAS:22767-50-61-辛烷磺酸钠 CAS:5324-84-51-癸烷磺酸钠 CAS:13419-61-91. 选择一根适合的色谱柱，常为C18柱；2.准备流动相时仅使用HPLC级别的水和色谱级试剂；3.选择能给出最佳分离度的流动相成分和浓度；4.如果样品中有非离子化物质，在尝试离子化分离之前首先优化分离情况；5.选择合适的离子对系列试剂以提供相应的离子配对：对于酸性分析物使用酸性离子对试剂；对于碱性分析物使用碱性离子对试剂；6.通过比较选择所得分离度最好的离子对试剂；7.一旦离子对试剂已经确定，调节流动相的pH值将分离度最大化；因为微小的pH值改变对保留性质和选择性都有较大的影响，所以仔细小心的小幅度调节pH值；8.理想状况下，流动相中的离子对试剂浓度应为0.005M，但是稍微增加离子对试剂可能会稍微增加保留性质并因此优化分离情况。在过去，带电荷分析物的色谱分离通过离子抑制（小心调节流动相PH值以使分析物非离子化）来达到。然而，要确定离子抑制状态下的最佳流动相PH值，却往往需要额外的摸索过程。含有一个以上的可离子化成分的样品，通常是不稳定的。离子抑制的局限性导致了一种新的、更普遍适用的方法进行可离子化物质色谱分离的方法：离子对色谱。离子对色谱由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是将离子性化合物添加到流动相中以促使离子与带电荷分析物形成配对离子。这些试剂由带有可离子化终端的烷基链组成。当在反相条件下用于常见的憎水性HPLC固定相时，离子对试剂可选择性的增加带电荷分析物的保留时间。尽管离子交换色谱已经成为常见的分离模式，它并非在所有情况下都起作用。较离子交换色谱，离子对色谱的优点在于：ü缓冲液制备简单；ü碳链长度选择众多，可用于增加保留时间、改善分离性质；ü显著缩短分离时间；ü同时分离离子化和非离子化分析物；ü有效改善峰形对色谱柱伤害较大。离子对试剂会对色谱柱造成不可逆的伤害，离子对试剂和固定相结合产生不可逆吸附，进而影响固定相活性位点。比如十八烷基硅胶键合色谱柱，离子对试剂会影响色谱柱键合，从而达到分析样品的作用。这种反应对色谱柱影响很大，而且离子对试剂很难从色谱柱上冲洗干净，会大大缩短色谱柱的使用寿命。ü实验条件不稳定。离子对试剂的浓度与其样品的保留时间有直接的影响，而且离子对试剂对pH值比较敏感，配制流动相时要求精确度较高。否则直接影响实验的重复性和重现性