推荐厂家
暂无
暂无
在一定的温度下,同一化学物质在不相混溶的两种介匝间分布达平街时.该物质在这两种介质中的浓度比是一常数.称分配系数。不同化学物质的分配系数不同。层析法即利用混合物中各组分的分配系数不同而崖其分离的方法。其两种介质,一为固定不动,称固定相,另一为可相对流动,称流动相。 层析法已广泛应用在生物化学领域中,无论是少量分析还是大量制备,都能体现出它的高效性,简便性等特点。在实脸室中的常用层析法有:凝胶过滤,纸层析.薄层层析,离子交换层析,亲和层析,高效液相层析等。 以下介绍几种常用的层析法凝胶过滤 凝胶过滤的别名很多,如凝皎扩散层析,分子筛层析,排阻层析等。这种技术具有操作简便,回收率高(近100%),条件缓和等特点,但它的分离操作速度较慢。该法常用于蛋白质,多糖,核酸的分离纯化。 凝胶过滤的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。柱的总体积为VA,它包括填料的骨架体积VGM。,填料的孔体积Vi(内水体积)及填料颗粒间的体积VO(外水体积)。分布在填料的孔中的溶剂是固定相,分布的填料颗粒间的溶剂是流动相。填料颗粒含有许多不同大小的孔.如果待分离的物质分子大小合适,则可以不同程度地向孔中扩散,大分子物质只能占有较少的大孔,小分子则能占有大孔及另外一些小孔。所以当不同分子量物质的混合物流经凝胶柱时,较小的分子在柱中停留的时间比大分于停留的时间长,于是混合物中各组分即按分于大小分开,最先流出的是最大的分子。示意图如下所示,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010171831_251966_1638724_3.jpg用于生物材料分离的凝胶主要有交联葡聚糖凝胶(商品名为Sephadex),聚丙烯酰胺凝胶(商品名为Bio—Gel),琼脂糖凝胶(商品名Sepharose)等。如常用的交联葡聚糖是将葡聚糖(Dextran)悬浮于有机溶剂,加入交联剂表氯醇交联聚合而成多糖链的三维结构,这种聚合物为白色珠状微粒,是多孔性网状结构,凝胶的孔径大小与交联剂的量有关,交联剂多则交联度大,网状结构紧密,孔径小,反之交联剂少则孔径大。 将含有三种不同分子量物质的混合样品用某种规格的凝胶柱进行分离。首先将样品小心自柱顶端加入,洗脱,以分步收集器收集洗脱液,测定每管物质浓度,然后以洗脱体积为横坐标,各物质浓度为纵坐标即得如下的洗脱曲线:由图可见最先流出的物质是,A,它的分子量最大,大于该种凝胶的排阻限(A物质分子的直径大于凝胶的孔径),完全不能进入颗粒内部,只能从颗粒间隙流过,称“全排阻”。其流经体积最小,与外水体积VO相等。最后流出的物质是C,它的分子量最小,小于该种凝胶的渗入限,其分子可以自由进出凝胶颗粒,这叫“全渗入”。流经体积是外水体积VO与内水体积Vi的和。而物质B的分子量介于排阻限与渗入限之间,其分子能够部分地进入凝胶颗粒之中,不能全部地不受限制的通过,这叫做“部分排阻”或“部分渗入”。它的流经体积Ve是全部外水体积加上内水体积的一部分,即 Ve=VO+KdVi式中Kd称作“排阻系数”或“分配系数”。它反映了物质分子进入凝胶颗粒的程度。Kd=(Ve-VO)/Vi当Kd=1时,Ve=VO+Vi为全渗入。当Kd=0时,Ve=VO为全排阻。当0t,则说明该物质分子与凝胶有吸附作用。这三种物质的分离过程可见示意图如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010171832_251967_1638724_3.jpgVi也可通过计算求出:Vi=aWra=凝胶千重Wi=每克干凝胶吸水毫升数Vt=Vo+Vi+VgVg=凝胶骨架体积Vt=可通过测定层析柱内径及高度计算得出:Vt=1/4D2h下表为交联葡聚糖凝胶的种类和规格:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010171832_251968_1638724_3.jpg
[align=center][b][font=宋体]【仪器心得】[/font][font=宋体] [font=宋体]馏分收集器[/font] [/font][font=宋体]使用心得[/font][/b][/align][align=center][b][font=宋体] [/font][/b][/align][font=宋体][color=#333333]今天和大家分享一款[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]上面的一部分组件,馏分收集器[/color][/font][font=Arial][color=#333333]1290 Infinity II[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=宋体][color=#333333]先和大家简单描述一下什么是馏分收集器,可以收集和定时,在实验室等进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]层分析时,仪器能自动计时、计滴分量采样收集层析液,从而代替手工操作实现自动采样收集,提高收集质量和工作效率。我们平时主要用于维生素检验中的样品收集。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]1.关于仪器的使用经验:[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]每台设备的配制不一样,这台设备是紫外检测器链接的馏分收集装置。在此以维生素[/font][font=宋体]D为例,给大家分享半制备正相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]及系统适用性的制备,取维生素D标准溶液于试管中,40℃氮吹。残渣用正己烷振荡溶解。取该溶液100μL注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]中测定,确定维生素D保留时间。根据正相系统适用性维生素D的保留时间收集待测液维生素D馏分于试管中。将试管置于40℃水浴氮气吹干,取出准确加入甲醇,残渣振荡溶解,即为维生素D测定液。这就起到了分离的作用。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]2.仪器的优点和不足[/color][/font][font=宋体][color=#333333]自动收集,能够任意选择,换管定位精确,收集换管不偏离。收集时间,倒、顺定时任意选择,自由互换同规格试管盘,不需要对号就位。能够对参数进行任意设定,对首管、末管进行设定。手工操作被替代,使工作效率得到了提高。但是我们先用的经常会出现一次样品收集到两个试管的问题且一直没有解决。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]3.总结[/color][/font][font=宋体][color=#333333]在工作效率方面代替了之前手动解馏分的装置,大大的节约了时间成本。但是使用前大家也评估一下设备的利用率。如果不是很高,且不长期使用。建议可以之间采用手动的方法在色谱柱后端直接接受待检样品。[/color][/font]
不过分析液相如果没有馏分收集器的话,怎么样手动收集馏分?按出峰时间?有没有实践过的?如果本身样品几十毫升,不多,在分析液相10ul可以基线分离下