全层析收集器

[align=center][b][font=宋体]【仪器心得】[/font][font=宋体] [font=宋体]馏分收集器[/font] [/font][font=宋体]使用心得[/font][/b][/align][align=center][b][font=宋体] [/font][/b][/align][font=宋体][color=#333333]今天和大家分享一款[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]上面的一部分组件，馏分收集器[/color][/font][font=Arial][color=#333333]1290 Infinity II[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=宋体][color=#333333]先和大家简单描述一下什么是馏分收集器，可以收集和定时，在实验室等进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]层分析时，仪器能自动计时、计滴分量采样收集层析液，从而代替手工操作实现自动采样收集，提高收集质量和工作效率。我们平时主要用于维生素检验中的样品收集。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]1.关于仪器的使用经验：[/color][/font][font=宋体][color=#333333][font=宋体]每台设备的配制不一样，这台设备是紫外检测器链接的馏分收集装置。在此以维生素[/font][font=宋体]D为例，给大家分享半制备正相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]及系统适用性的制备，取维生素D标准溶液于试管中，40℃氮吹。残渣用正己烷振荡溶解。取该溶液100μL注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]中测定，确定维生素D保留时间。根据正相系统适用性维生素D的保留时间收集待测液维生素D馏分于试管中。将试管置于40℃水浴氮气吹干，取出准确加入甲醇，残渣振荡溶解，即为维生素D测定液。这就起到了分离的作用。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]2.仪器的优点和不足[/color][/font][font=宋体][color=#333333]自动收集，能够任意选择，换管定位精确，收集换管不偏离。收集时间，倒、顺定时任意选择，自由互换同规格试管盘，不需要对号就位。能够对参数进行任意设定，对首管、末管进行设定。手工操作被替代，使工作效率得到了提高。但是我们先用的经常会出现一次样品收集到两个试管的问题且一直没有解决。[/color][/font][font=宋体][color=#333333] [/color][/font][font=宋体][color=#333333]3.总结[/color][/font][font=宋体][color=#333333]在工作效率方面代替了之前手动解馏分的装置，大大的节约了时间成本。但是使用前大家也评估一下设备的利用率。如果不是很高，且不长期使用。建议可以之间采用手动的方法在色谱柱后端直接接受待检样品。[/color][/font]

不过分析液相如果没有馏分收集器的话，怎么样手动收集馏分？按出峰时间？有没有实践过的？如果本身样品几十毫升，不多，在分析液相10ul可以基线分离下

我第一次用硅胶柱层析，洗脱剂为：氯仿、甲系统，收集的洗脱馏分蒸发浓缩后，能在薄层板上检测到物质，但是由于上样量太多，后来的洗脱梯度没用。第二次分离的洗脱洗脱与第一次相同，但收集的馏分蒸干后用PBS缓冲液洗净，结果却在硅胶板上什么都检测不到。我以为原因是点板的溶剂不同（一个是氯仿甲醇洗脱剂，一个是PBS缓冲液），所以用其中一个馏分做了两种溶剂的薄层层析，结果还是什么都没有。求助各位高手，这是什么原因？如果在板上没有检测到物质，是否就说明该馏分中没有洗下东西？

[转贴]凝胶层析法技术简介凝胶层析法技术凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。　　1. 凝胶的选择 根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开，由于它们在分配系数上有显著差异，这种分离又称组别分离，一般可选用Sephadex G-25和G-50，对于小肽和低分子量的物质（1000-5000）的脱盐可使用Sephadex G-10，G-15及Bio-Gel-p-2或4。如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离，这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶，层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部，由于Kd不同，最后得到分离。　　2. 柱的直径与长度 根据经验，组别分离时，大多采用2-30cm长的层析柱，分级分离时，一般需要100cm左右长的层析柱，其直径在1-5cm范围内，小于1cm产生管壁效应，大于5cm则稀释现象严重。长度L与直径D的比值L/D一般宜在7-10之间，但对移动慢的物质宜在30-40之间。　　3. 凝胶柱的制备 凝胶型号选定后，将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去。自然溶胀费时较长，加热可使溶胀加速，即在沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸，1-2小时即可达到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。　　凝胶的装填：将层析柱与地面垂直固定在架子上，下端流出口用夹子夹紧，柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器，柱内充满洗脱液，将凝胶调成较稀薄的浆头液盛于柱顶的容器中，然后在微微地搅拌下使凝胶下沉于柱内，这样凝胶粒水平上升，直到所需高度为止，拆除柱顶装置，用相应的滤纸片轻轻盖在凝胶床表面。稍放置一段时间，再开始流动平衡，流速应低于层析时所需的流速。在平衡过程中逐渐增加到层析的流速，千万不能超过最终流速。平衡凝胶床过夜，使用前要检查层析床是否均匀，有无“纹路”或气泡，或加一些有色物质来观察色带的移动，如带狭窄、均匀平整说明层析柱的性能良好，色带出现歪曲、散乱、变宽时必须重新装柱。　　4. 加样和洗脱 凝胶床经过平衡后，在床顶部留下数亳升洗脱液使凝胶床饱和，再用滴管加入样品。一般样品体积不大于凝胶总床体积的5％-10％。样品浓度与分配系数无关，故样品浓度可以提高，但分子量较大的物质，溶液的粘度将随浓度增加而增大，使分子运动受限，故样品与洗脱液的相对粘度不得超过1.5-2。样品加入后打开流出口，使样品渗入凝胶床内，当样品液面恰与凝胶床表面相平时，再加入数毫升洗脱液中洗管壁，使其全部进入凝胶床后，将层析床与洗脱液贮瓶及收集器相连，预先设计好流速，然后分部收集洗脱液，并对每一馏份做定性、定量测定。　　5. 凝胶柱的重复使用、凝胶回收与保存 一次装柱后可以反复使用，不必特殊处理，并不影响分离效果。为了防止凝胶染菌，可在一次层析后加入0.02％的叠氮钠，在下次层析前应将抑菌剂除去，以免干扰洗脱液的测定。　　如果不再使用可将其回收，一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干，依次用70％、90％、95％乙醇脱水平衡至乙醇浓度达90％以上，滤干，再用乙醚洗去乙醇、滤干、干燥保存。湿态保存方法是凝胶浆中加入抑菌剂或水冲洗到中性，密封后高压灭菌保存。　　6. 凝胶层析的应用　　⑴ 脱盐：高分子（如蛋白质、核酸、多糖等）溶液中的低分子量杂质，可以用凝胶层析法除去，这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速、蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。适用的凝胶为SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6。柱长与直径之比为5-15，样品体积可达柱床体积的25％-30％，为了防止蛋白质脱盐后溶解度降低会形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液使层析柱平衡，然后加入样品，再用同样缓冲液洗脱，收集的洗脱液用冷冻干燥法除去挥发性盐类。　　⑵ 用于分离提纯：凝胶层析法已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。凝胶对热原有较强的吸附力，可用来去除无离子水中的致热原制备注射用水。　　⑶ 测定高分子物质的分子量：用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内，在同一条件下层析，记录每一分钟成分的洗脱体积，并以洗脱体积对分子量的对数作图，在一定分子量范围内可得一直线，即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时，可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗肿后，根据物质的洗脱体积，在标准曲线上查出它的分子量。⑷ 高分子溶液的浓缩：通常将SephadexG-25或50干胶投入到稀的高分子溶液中，这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中，而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外，再经离心或过滤，将溶胀的凝胶分离出去，就得到了浓缩的高分子溶液。

在别的网站上看到了这样的求助帖“今天刚刚又碰到一个问题，序列和方法都编写好了，样品和流动相也准备好了，仪器平衡了３０多后，开始按Ｓtart，可仪器自动进样器不动，在通常显示Ｌast　Ｒun的地方换成了nＲdy　Ｗait：１０，１０分钟过去了，还是不进样．重新按Ｓtart，还是这样，请问这是怎么回事？怎么解决？在一开始打开工作站时，我曾点击了Ｒeset　injector，是不是自动进样器就是这样给不动了，怎么恢复呀？”之后有人回答是“是馏分收集器给去掉了,加上馏分收集器,就好了.因为它是方法中的一部分.”‘我们这的质谱也出现了同样的情况，请问怎么加上馏分收集器？或者说还有别的什么原因吗？

一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练，初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质，主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子（近于球形）具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出柱外，而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0～100%之间，其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav（分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示，Kav值的大小和凝胶柱床的总体积（Vt）、外水体积（V0）以及分离物本身的洗脱体积（Ve）有关：Kav = (Ve－V0)/(Vt－V0) ----------- (1)在限定的层析条件下，Vt和V0都是恒定值，而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大，Ve值小，Kav值也小。反之，分子量小Ve值大，Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身（基质）体积（Vg）、外水体积（V0）、内水体积（Vi）及柱床总体积（Vt）的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数，同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下，被分离物质Kav值差异越大，分离效果越好。反之，分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中，我们可以实测出Vt、V0及Ve的值，从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶，在一定的分子量范围内，Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系：Kav ＝－b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到：Ve ＝－b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后，并根据上述的线性关系绘出标准曲线，然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂（一）器材1. 玻璃层析柱（(20mm×60cm）2. 恒流泵（或下口恒压贮液瓶）3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml（或5ml）刻度试管（二）试剂1. 标准蛋白（1）牛血清白蛋白：Mw=67,000（上海生化所）（2）鸡卵清清蛋白：Mw=45,000（美国SIGMA公司）（3）胰凝乳蛋白酶原A：Mw=24,000（美国SIGMA公司）（4）溶菌酶：Mw =14,3002. 未知蛋白质样品：由实验室准备3. 0.025M KCl－0.1M HAC(乙酸)（洗脱液1000ml）4. 蓝色葡聚糖－2000

请问有没有在分析型的高效液相色谱上配的自动馏分收集器，Waters的液相色谱。

我们实验室买了一台岛津FRC-10A馏分收集器，由于我们做的东西不能采用检测器来测，只能依据时间和体积数进行收集，现在根据说明书进行操作根本不会用，因为说明书基本是在检测器可用的情况下来写的。请问谁用过他们的收集器？应该这么用？谢谢啊！

我们实验室买了一台岛津FRC-10A馏分收集器，由于我们做的东西不能采用检测器来测，只能依据时间和体积数进行收集，现在根据说明书进行操作根本不会用，因为说明书基本是在检测器可用的情况下来写的。请问谁用过他们的收集器？应该这么用？谢谢啊！

[color=#013add][size=5]制备型液相色谱有馏分收集器，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]也有制备馏分收集器，你用过哪些呢？[/size][/color]

请问Agilent G1364A/B/C/D 馏分收集器有什么区别现在只知道G1364B（制备级型馏分收集器）和 G1364C（分析级馏分收集器），那么A和 D 呢？ 谢谢！

各位用X荧光的时候有配带辐射收集器么?以前买的台式XRF,从来没有人配带辐射收集器操作,如今刚买的便携式XRF,却说一定要配带辐射收集器操作......难道,便携式的XRF....辐射比台式的要大?你们都戴了么?

铁子们，求购一台自动部分组分收集器，可开票的私我谢谢

大家的XRF实验室是否配置了辐射收集器，都是什么牌子啊？

层析技术的原理和分类（一）层析技术的原理 　　层析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。　　层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。　　（二）层析法分类见表　　（三）层析法的特点与应用表按两相所处状态分类 流动相液体气体 液体液-液层析法气-液层析法固定相 固体液-固层析法气-固层析法

层析实验冷柜专为生化层析实验而研制的特殊用途冷柜，也可用于其他需要低温环境的实验，或用于物品冷藏。主要特点：进口制冷压缩机，工作可靠，噪音低;风冷散热方式，不需水冷却;可选多功能型配置，三层可调开放式钢架;不作层析实验亦可用于样品冷藏保存，一柜多用; 柜内空间高大，便于层析操作; 全透视双层玻璃门，具防露功能，双门锁扣可独立开启;全不锈钢内壁，清洁卫生,美观耐腐蚀; 2根层析固定立柱，2层（YC-2为3层）开放式载重托板；自带照明灯，消毒灯，上下内电源插座; 内胆全部采用优质不锈钢材料；全新改进型智能温控仪表，温度设定、测量均为数显，且设定值可加密码锁定保护;自带超温、差温报警功能 ;下设脚轮，移动方便;

现在使用的是安捷伦1260的馏分收集器，制备的时候不接检测器，直接根据时间段来回收馏分。请问大家，这种情况还需要设置延迟校正的体积吗，我没明白延迟校正是校正的从检测器到馏分收集器的管路体积还是检测上的延迟啊

我的Agilent 1200使用流份收集器制备样品时，出现重复进样，不能重复收集的问题。具体是：我一个样品进过多针进样制备，希望每一针进样时，流份收集器都能从第一瓶收集或指定瓶收集。比如制备A样品第一针时，流份收集器运行的的是1-10个收集瓶，进下一针时，流份收集器则从第11瓶开始新的序列。我改变了很多设置，都不能让它再收集到1-11瓶。有经验者请指教一下哟。谢谢了！

◆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]层析 属于分配层析或吸附层析，仅适用于分析分离挥发性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物（如磨细的耐火砖）上覆盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点石蜡和油脂、环氧类聚合物。外涂层约为支持物重量的20％。分析时操作温度范围，一般从室温到200℃。特殊的层析柱能达到500℃。流动相常用氦、氩或氮为展层气体。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]层析分离的区带十分清晰，是由于挥发性物质在两相间能很快达到平衡，所需分析时间大为缩短，一般为数分钟至10余分钟。检测记录系统绘出的各峰是测定流出气体电阻变化的结果，因而测定样品量可到微克和毫微克水平。具有快速、灵敏和微量的优点。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]层析也能用于分离制备样品，但需增加将流出气体通过冷冻将分离物回收的装置。

使用带馏分收集器的 LC 和 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]/MS 分析土壤里的总石油烃类 http://www.chem.agilent.com/scripts/Literaturepdf.asp?iWHid=50302

实验室的液相有好几台了，A和T的都有，打算买个通用型的液相馏分收集器，主要是分析型液相用的，有没有哪位童鞋用过的给点品牌和型号的建议啊？非常感谢！

请问哪里有卖干、湿沉降收集器？

各位： 由于是新手，刚接触安捷伦1260组分收集器，一点头绪都没有，大家能帮忙给点指导，谢谢

（1）柱层层析硅胶【40～400目，粒度均匀、下料匀速通畅、阻力小、分离效果好、规格等级齐全，厂家直销，价格优惠】（2）高效薄层层析硅胶板【G、H、GF254、HF254平整光滑、荧光翆亮、无任何斑点、常用于照相】（3）硅胶制备板【0.5～1.5mm，板面光洁、牢固、载样量大、可替代小量级层析柱，H、G、GF254、HF254】（4）薄层层析硅胶和高效薄层层析硅胶【H、G、GF254、HF254】（5）微晶纤维素薄层层析板【特定有机物质的分析、分离、提纯，H、G、GF254、HF254】（6）活化硅胶【30～60目，气体鉴定剂的载体，或用于分离提纯有机混合物中活性有效成分。是一种高纯、高活性硅胶】厂家:*安徽良臣硅源材料有限公司联系电话：0564－5033328、3131877、3131977、13505647362；传真：0564－5023598；联系人：赵震。E-mail：wxhsgy@hotmail.com, huangran@mail.hf.ah.cn网址：http://www.wxhsgy.com

我想把所有样品瓶的同一个组分收集到馏分收集器的同一个试管里，而不是一个样品瓶对应一个试管这样收集，请问应如何设置收集器，希望各位大师指点，多谢啦~

谁用过岛津的馏分自动馏分收集器 如何确定收集馏分时间 和延迟时间 还有怎么判断馏分是否收集完整 我现在一直都是出锋前一分钟和出锋后一分钟 一共三分钟 感觉收集的不完全 做出样品比原来的低好多 只能加标测试回收率看吗

安捷伦馏分收集器重置的时候发生故障，机械臂初始化失败，冒红灯，在故障排除里面说要进行自动化校准操作，实在不知道如何是好?求大佬指路

我们实验室有一台岛津的制备色谱仪,但没有流份收集器,最近计划购买,因为本人从未用过,希望高手给些建议。是否一定要岛津厂家的还是可以配国产的？如果可以配国产的，哪些厂家的质量好些？

第一次做凝胶柱层析，想分离分子量 在100至5000之间的化合物，选择凝胶柱排阻范围为100-7000，因为没有在线检测器，上样以后，不知道什么时间段该收集样品，才能收集到分子量在100-7000之间的化合物，各位有经验的前辈指点我啊