微生物分子检测

默克独创Erenna® 单分子免疫检测平台，采用专利单分子检测技术，突破蛋白检测极限，创领生物标志新发现，助力疾病研究再创新。由于激光的聚焦效应，会形成一个非常狭小的检测空间“爱里斑”，这个空间集中了多达84%的激光能量，能够最有效地照射和激发单个荧光分子。SMC™ 单分子检测技术会依次检测通过“爱里斑”区域的单个荧光信号，峰高超过阈值的荧光信号会被统计为数字信号，并将检测到的数字信号进行汇总，显著地提高了检测灵敏度。Erenna® 平台在检测每一个样品时，都会获得三套数据：检测事件（Detected Events, DE），事件光子含量（Event Photons, EP），以及总光子含量（Total Photons, TP）。检测事件指的是在一定检测时间段之内得到的所有高于阈值的信号的数目，这些信号可以是单个分子在爱里斑中产生的，也有可能是几个分子同时进入爱里斑时形成的。事件光子含量指的是在所有的检测事件中，检测器测到的总光子含量。总光子含量为在整个检测过程里面，检测器所收集到的所有光子的含量，高于阈值和低于阈值的信号都会被统计。根据标准品浓度，我们可以使用上述三套检测数据得到三条标曲。其中检测事件标曲在低浓度条件下能很好地反映样品的浓度变化，因为这时一般是单个分子进入爱里斑，检测事件的数据与样品浓度有非常好的一致性。但随着样品浓度的提升，此时越来越多的情况下有几个分子同时进入爱里斑，检测事件就不能准确反映浓度变化了，而此时事件光子含量标曲能接过“接力棒”，测定样品的浓度并在溶液的浓度特别高时。Erenna® 单分子免疫检测平台可以根据不同实验条件灵活选择孵育形式。Erenna® 平台提供严格质控的已验证试剂盒。产品参数：

基于核酸检测技术，荧光定量PCR技术方法，不需要进行任何扩增后处理，检测结果快速、准确、可用于定性、定量和溶解曲线分析，可用于微生物分子核酸定性定量检测、基因表达水平分析、基因突变检测及产物特异性分析等多种研究领域。

一、主要技术参数1.1 工作站① 光源 690 nm② 入射角 40-76 Deg (连续)③ 检测灵敏度 0.6 RU RMS (0.1 mDeg RMS)④ 漂移指数 3 RU/小时 (0.5 mDeg/hr) RMS (当周围环境漂移 1°C/小时)⑤ 温控范围 15°C to 40°C (降温限止在低于室温10°C )⑥ 视场 "Bright Field: 1200 x 900 um SPR: 600 x 450 um"放大率 "Bright Field: x10SPR: x20"⑦ 分辨率 Bright Field & SPR: 1 μm⑧ 样品台平移/旋转 3mm x 3mm / 360 deg⑨ 外围尺寸 690 (w) x 330 (h) x 340 (d) mm1.2 流体操作① 样品容积 1 to 1500 μL (可根据应用需求调节)② 动力学常数 "ka1 X 107 M-1s-1 kd 1 X 10-5 s-1 "③ 解离常数（亲和常数的倒数） KD = 10-3 M (1 mM) to 10-12 M (1 pM)④ 最小可分析的分子量 200 Da1.3 控制系统① 计算机 微软Windows 操作系统② 软件 BI ImageSPRTM 软件,包括数据分析和动力学分析包1.4 自动进样器① 试样容量 "最多可载768样品， 可使用多种载盘包括：2 x SBS standards (384 /96)2 x 48 Vials (1.5mL)2 x 12 Vials (10mL)"② 注射体积 0 mL to 9999 mL③ 样品冷却 控温: 4oC +/- 2oC1.5 自动缓冲液交换泵① 缓冲液选择 可自动更换6种缓冲液② 溶液除气功能 在线除气③ 缓冲液输送 连续二、主要功能2.1 实时定量活细胞分子相互作用2.2 单个细胞/多个细胞动力学定量分析（Ka，Kd，KD）及统计分布2.3 明场成像、SPR成像结合单点动力学分析2.4 生物标记检测, 药物靶向研发2.5 小分子免标分析（200Da）2.6 电化学同步分析2.7 小分子、DNA、抗体、肽段、蛋白、病毒、细菌、细胞三、技术特点3.1 细胞原位：真正实现细胞层面的原位分子互作，无需提纯，可以直接原位分析药物在细胞层面与分子互作，尤其为膜蛋白受体（糖蛋白、GPCR）等提供了研究解决方案3.2 通量：SPR视场600um*600um，可以同时进行多个细胞与分子互作的研究，从而实现药物统计学分析，和细胞异质性研究3.3 精度：良好灵敏度，可以实现200Da 小分子药物与细胞的互作研究3.4 高分辨动态可视化：可以动态可视化观察药物分子与细胞反应的全过程及成像，同时可以得到定量的SPR分析曲线，从而得到定量Ka、Kd、KD四、主要应用4.1基于原位细胞分子互作的研究4.1.1 小分子药物①小分子药物与HEK 293细胞GPR39受体相互作用②小分子药物与细胞ASIC 酸敏感离子通道受体相互作用研究4.1.2 抗体药物 单克隆抗体（MAB）疗法已成为治疗癌症、自身免疫性疾病、哮喘和许多其他疾病的既定方法。单克隆抗体（MAB）药物占整个生物制药50%的份额，其中超过60%都是膜蛋白受体。SPRm200可以在单细胞层面定量研究单克隆抗体（MAB）和膜蛋白结合作用。传统SPR是直接将纯化的蛋白固定在芯片表面，对于膜蛋白而言是有问题的，膜蛋白从细胞环境中提取并保持自身形态非常困难。4.2 基于病毒、细菌载体分子互作的研究4.2.1 快速ASTs实验：抗生素与大肠杆菌代谢活性研究 ASTs实验是确定抗生素易感性和细菌菌株耐药性的重要实验。目前大多数AST实验是基于细胞培养，需要几天时间才能完成。快速AST检测可以降低发病率死亡率和帮助制定早期窄谱抗生素治疗方案。通过SPRm200，我们使用等离子成像和PIT技术跟踪单个细菌细胞的运动。监测随着细胞代谢和抗生素的投入的Z向变化。可以看到，抗生素可以明显减弱细菌细胞的活动，并且可以定量计算，从而成为快速AST检测方法。4.3 基于SPRm200，病毒载体微阵列研究多种不同GPCR受体与配体的相互作用的研究4.3.1 SPRM电化学阻抗方法定量检测分子互作 通过电化学SPRM阻抗分析，测量了传感器表面病毒肽配体和不同GPCR受体的结合动力学常数