核酸扩增荧光定量检测

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核酸扩增荧光定量检测相关的厂商

  • 苏州雅睿生物技术股份有限公司 银牌3年
    400-860-5168转5107
    苏州雅睿生物技术股份有限公司成立于2010年9月，座落在苏州市工业园区国家级产业园——生物医药产业园，是一家以分子诊断及基因检测技术为核心的高新技术企业。雅睿生物历经多年研发，在“自动化控制、图像处理、光学检测、镜检、液路、电子应用和软件”等方面形成了自主技术的积累，拥有国内外专利50余项和软件著作权约20项；自主研发了国际领先的 “基因检测技术平台”、“全自动液路提取技术平台”和“全自动微生物检测技术平台”，在此技术平台上，形成了“荧光定量PCR检测系统、等温荧光定量PCR扩增检测仪、便携式荧光定量PCR检测系统”，“核酸提取加样系统”和“核酸快速诊断系统”的产品组合。秉承“专注、创新和用户体验”的企业精神，雅睿产品全心服务于全球市场。
    主营产品： PCR   核酸提取仪  
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  • 上海零客实业有限公司
    上海零客实业有限公司成立于 2015 年 1 月，资本 100 万元，，是一家专业从事体外诊断仪器研发、制造、销售、技术输出的科技型服务公司，我司团队都具有本科、硕士研究生等以上学历，多年医疗器械的研发、制造工作经验，多名体外诊断仪器、设备研发的专家和独立研发团队领头人，与北京、上海、广州、天津、杭州等地多家试剂、高校、检测、医疗机构建有合作关系。目前公司自主研发、生产的全自动免疫组化分析仪是国内领先与国际同步的一款病理检测仪器，该仪器可以开展上百种肿瘤检测，是病理临床医生的利器， 必将推进国内病理诊断领域的进步以及打破该领域国外仪器垄断的局面。此外我司生产的 QPCR 实时荧光定量基因扩增仪（96、48、16、8 孔）、核酸提取仪POCT 化学发光仪等各项参数、指标达到国际先进水平，并具有高性价比和稳定性、良好的口碑，成功应用于各行各业；其中便携式荧光定量 PCR(16、8 孔） 累计销量超过千台，取得了市场良好的信誉。
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  • 安普未来（常州）生物科技有限公司
    安普未来（常州）生物科技有限公司于2020年12月成立，位于常州市武进区常武中路18-67号中国以色列常州创新园9#厂房4层，建有十万级的生产车间，标准的核酸检测实验室和P2级别的研发实验室，是创业团队在潍坊安普未来生物科技有限公司基础上应产业化应用升级所创设的新公司。创业团队历经十年技术沉淀，以代表未来生物检测技术趋势的多酶恒温快速扩增（Multienzyme Isothermal Rapid Amplification , MIRA）技术为核心，并基于MIRA核心平台技术、超快速核酸提取技术、荧光检测仪技术、全自动封闭检测系统技术和微流控技术的整合打造出分子检测领域整体解决方案，具有灵敏度高、特异性强、快速简便、污染风险小、现场作业等显著特点。MIRA技术，是代表着检测领域未来技术趋势，依靠多种功能蛋白在常温恒温条件下实现核酸的快速扩增。公司是目前国内对该核心技术所需全部功能蛋白具备完全自主供应能力的企业。公司目前已形成恒温快速扩增试剂、各类基于MIRA技术的科研型检测试剂及基于MIRA技术的检测试剂原料、超快速核酸提取试剂和便携式荧光检测仪等系列产品。
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  • 恒温核酸扩增检测仪 400-860-5168转3452
    恒温核酸扩增检测仪深芬仪器厂家生产的CSY-ZW恒温核酸扩增检测仪集恒温扩增与荧光信号检测于一体可实现扩增过程的实时监测，仪器内置人性化操作系统，可自动判读结果；恒温核酸扩增检测仪可用于各类等温扩增反应体系试剂，具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点，恒温核酸扩增检测仪可用于肉类动物源性成分检测、食源性致病菌检测、转基因检测、动物病害检测、科研实验等领域。恒温核酸扩增检测仪技术参数：1、显示屏：7寸触摸屏；2、操作软件：Android；3、样品通量：16x0.2ml兼容单管和8联管；4、加热方式：半导体制冷片结合电性电阻热红外技术；5、温控范围：室温～85℃；6、控温精度：±0.1℃；7、温度准确度：±0.4℃；8、模块温度均匀度：±0.4℃；9、激发光波长：470nm±10nm；10、检测光波长：520nm±10nm；11、荧光强度检测重复性：变异系数为CV≤15%；12、荧光强度检测精密度：变异系数为CV≤15%；13、反应体积：开放式恒温荧光检测试剂，10～100 μl；14、检测器：新型光学检测器，结合数字电路控制，光信号稳定；15、检测试剂：开放式恒温荧光检测试剂；16、数据分析：可对被检指标进行定性或半定量检测，并可导出数据绘制标准曲线；17、结果显示：1）扩增曲线； 2）检测结果；18、判读方式：1）根据扩增曲线判读；2)仪器自动判读；19、通讯接口：USBA型、USB型、全网通卡槽、TF内存扩展卡槽、网口等；20、支持模块定制、程序定制等整机定制解决方案。恒温核酸扩增检测仪产品特点：1、60分钟以内可判断阴阳性结果；2、集成恒温扩增、实时荧光检测、智能数据判读；3、检测结果可通过内置热敏打印机打印；4、不同孔板对应不同曲线，由不同颜色表示，方便用户查看；5、易学易懂操作步骤，无专业背景也可快速上手；6、可用于肉及肉制品动物源性成分检测；乳品及乳制品、饮用水等食品致病菌检测；鱼虾等水产品动物病害检测；动物饲料及农产品转基因检测；7、具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点；8、检测兼容性强，可同时检测5个项目；9、16个检测位置，一次最多可检测14个样品。
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    厂商： 深圳市芬析仪器制造有限公司
    品牌： 深芬仪器/CSY
    型号： 恒温核酸扩增检测仪
    价格： 7万 - 10万元
  • 恒温荧光核酸扩增仪 400-860-5168转3452
    恒温荧光核酸扩增仪深芬仪器厂家生产的CSY-ZW恒温荧光核酸扩增仪集恒温扩增与荧光信号检测于一体可实现扩增过程的实时监测，仪器内置人性化操作系统，可自动判读结果；恒温荧光核酸扩增仪可用于各类等温扩增反应体系试剂，具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点，恒温荧光核酸扩增仪可用于肉类动物源性成分检测、食源性致病菌检测、转基因检测、动物病害检测、科研实验等领域。恒温荧光核酸扩增仪技术参数：1、显示屏：7寸触摸屏；2、操作软件：Android；3、样品通量：16x0.2ml兼容单管和8联管；4、加热方式：半导体制冷片结合电性电阻热红外技术；5、温控范围：室温～85℃；6、控温精度：±0.1℃；7、温度准确度：±0.4℃；8、模块温度均匀度：±0.4℃；9、激发光波长：470nm±10nm；10、检测光波长：520nm±10nm；11、荧光强度检测重复性：变异系数为CV≤15%；12、荧光强度检测精密度：变异系数为CV≤15%；13、反应体积：开放式恒温荧光检测试剂，10～100 μl；14、检测器：新型光学检测器，结合数字电路控制，光信号稳定；15、检测试剂：开放式恒温荧光检测试剂；16、数据分析：可对被检指标进行定性或半定量检测，并可导出数据绘制标准曲线；17、结果显示：1）扩增曲线； 2）检测结果；18、判读方式：1）根据扩增曲线判读；2)仪器自动判读；19、通讯接口：USBA型、USB型、全网通卡槽、TF内存扩展卡槽、网口等；20、支持模块定制、程序定制等整机定制解决方案。恒温荧光核酸扩增仪产品特点：1、60分钟以内可判断阴阳性结果；2、集成恒温扩增、实时荧光检测、智能数据判读；3、检测结果可通过内置热敏打印机打印；4、不同孔板对应不同曲线，由不同颜色表示，方便用户查看；5、易学易懂操作步骤，无专业背景也可快速上手；6、可用于肉及肉制品动物源性成分检测；乳品及乳制品、饮用水等食品致病菌检测；鱼虾等水产品动物病害检测；动物饲料及农产品转基因检测；7、具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点；8、检测兼容性强，可同时检测5个项目；9、16个检测位置，一次最多可检测14个样品。
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    厂商： 深圳市芬析仪器制造有限公司
    品牌： 深芬仪器/CSY
    型号： 恒温荧光核酸扩增仪
    价格： 7万 - 10万元
  • 恒温扩增荧光检测仪 400-860-5168转3520
    Deaou-16P核酸恒温扩增荧光检测仪集核酸恒温扩增与荧光信号检测于一体可实现扩增过程的实时监测，具有控温精度高灵敏度高、重复性好等优点。仪器内置人性化操作系统，同时采用先进的数学模型进行数据处理和图形绘制，可自动判读结果。应用领域食品安全检测：转基因、致病微生物、动物源性、渔牧病害等生物因素检测医学诊断：结核杆菌及登革热、禽流感等流行性病原检测科学研究：可应用于恒温扩增技术的研究 产品优势： 操作简捷，快速准确，60分钟内完成检测 多重检测，单次反应最多可检测14个样本 结果自动判读，避免人工误差，数据可溯源 移动便利，转移位置后无需校正，可实现现场检测 闭管检测，杜绝气溶胶污染导
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    厂商： 广州迪澳生物科技有限公司
    品牌： 迪澳生物/deaou
    型号： Deaou/16P
    价格： 10万 - 30万元
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  • 新一代恒温扩增|先达基因自主研发New ERA技术，助推现场化核酸即时检测
    随着全球新冠疫情爆发，原本只能在专业实验室开展的核酸检测逐步为大众所认知，而对于疫情控制所需要现场快速检测紧迫的需求，也驱动着全球诊断企业加速技术的革新。近两年越来越多的体外诊断企业开始探索居家检测，让传染病检测、癌症早筛等体外诊断项目逐步落地至家庭场景。体外诊断项目如何实现小型化、便捷化、家庭化，如何跳过样本流转和实验室检测环节，居家完成整个检验流程，一直是国内外相关体外诊断企业研发的重点。2020年底，随着Cue Health公司的家用新冠分子POCT检测产品的FDA获批及应用，将分子POCT检测从实验室带入了全程家庭化的全新场景。New ERA技术助推现场化核酸即时检测在此背景下，苏州先达基因科技有限公司将自主开发的新一代核酸检测技术（New ERA），配套微型核酸荧光检测仪（基因镜 GENEYE®），建立了先达基因New ERA核酸检测一体化解决方案，革命性地实现了全程10分钟现场化检测，极大提升了现有检测诊断技术水平。New ERA技术产品与基因镜（GENEYE®） “10分钟一体化核酸检测解决方案”流程图凭借该方案的技术优势，未来有望广泛用于医院床旁、基层诊所、野外、学校、机场、家庭等检测场景，甚至可应用于肿瘤、老年痴呆等早筛领域。基因镜搭配有独立APP及微信小程序，在手机上便可查看相应检测结果，满足了对便捷、私密的检测需求。基因镜（GENEYE®）图底层技术创新是打造行业差异化竞争力的关键PCR技术凭借着优异的敏感度和特异性，被认为是现阶段用于病原微生物检测等项目的理想方法。但PCR技术需要精密昂贵的仪器设备、专业的技术人员，且对实验室环境及标本处理要求较高，检测时限长达两个小时甚至更久，难以实现快速检测的要求。近年来，快速、准确、便捷地进行核酸检测成为行业的迫切需求。先达基因CEO于继彬在PCR扩增技术和基因工程领域有20余年经验，有着深厚的技术和管理积淀，对行业痛点和发展趋势有着更为切身的体会和敏锐的感知。于继彬本人在读研究生期间便开始了PCR法合成基因的尝试，并早在2002年工作期间，在国内率先建立了以PCR扩增法为基础的基因合成工业化流程。2005年加入南京金斯瑞，任职副总裁，负责公司生产与研发业务，成为公司核心管理成员之一。曾领导包括基因合成、蛋白工程、抗体工程、新药筛选、引物合成、基因测序等业务板块。任职金斯瑞高管的十年间，公司实现从初创到成为全球最大的PCR实验基地与基因合成中心的跨越。2017年，于继彬借POCT行业萌发的契机创立了先达基因，旨在创新核酸快速检测技术。并组建了富有工业界管理经验的分子生物学专家、分子诊断用酶工艺专家、生物制药工程专家以及医疗器械营销专家的核心管理团队。利用计算机分子设计（Molecular Design）、定向进化(Direct Evolution)、亲和力成熟(Affinity Maturation)等制药领域高端技术对PCR和生物体遗传物质自身扩增复制所必需的聚合酶、核酸内切酶、单链结合蛋白等进行了多次改造筛选，先达基因开发了新一代恒温扩增（New ERA）技术，在恒定温度条件下，5-8分钟即可将DNA/RNA扩增数亿倍，配合独特的引物与探针自环化结构，使全程检测仅需10分钟左右即可完成。灵敏度特异性可与常规荧光定量PCR媲美。同时，先达基因团队还设计了超大的检测反应体系，虽然成本有所增加，但对于用户操作便利性带来极大优势，同时也能容纳更多的样本。这也使得检测装置可以实现简易化的关键之一。一切从用户角度出发，快捷流畅的用户体验是先达基因产品设计的基本逻辑。New ERA技术开发路线图
    时间： 2022-10-26
    作者： YOLO
  • 《食品中沙门氏菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法》等五项CAIA标准发布
    p 来自中国分析测试协会的消息：2017年4月17日，中国分析测试协会标准化委员会“筛检技术标准化工作组”组织有关专家对中国科学院上海生命科学院营养科学研究所申报的四项CAIA标准，山东荣成出入境检验检疫局综合技术服务中心等三家单位共同申报的一项CAIA标准进行了预审。/pp 五项标准的起草人根据工作组专家的意见，修改了标准草案和编制说明。CAIA标委会秘书组将修改后的标准草案报批稿和标准草案编制说明用电子邮件发给中国分析测试协会标准化委员会的每一个委员进行审议。规定的审议时间内，委员们在同意五项标准草案的前提下，对标准草案和编制说明提出了修改意见。五项标准草案的起草人根据委员们提出的修改意见，对标准的报批稿进行了修改，形成了五项“CAIA标准”的正式文件，报中国分析测试协会标准化委员会主任委员张玉奎院士审批。经张玉奎院士审查同意，现将这五项CAIA标准正式发布（发布的五项标准附后）。/ppbr//pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201707/ueattachment/6341c16a-dbfc-406f-9808-8278797b84bf.pdf"食品中沙门氏菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法.pdf/a/pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201707/ueattachment/f135c3a7-2018-426a-ae82-cf4cb4b10877.pdf"食品金黄色葡萄球菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法.pdf/a/pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201707/ueattachment/f19ff5eb-a321-45b6-9523-0457c32bf76d.pdf"食品单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法.pdf/a/pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201707/ueattachment/66b64ad7-7385-4fc8-ab63-0f721cc54451.pdf"食品副溶血性弧菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法.pdf/a/pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201707/ueattachment/4bbda0d5-f741-49de-9215-5defa486a5fd.pdf"清酒 铅砷的测定 电感耦合等离子体质谱法.pdf/a/p
    时间： 2017-07-20
    作者： 铲盐
  • 一文揽尽：荧光定量PCR扩增曲线哪个阶段最重要
    qPCR扩增曲线一般分成四个阶段：基线期、指数期、线性期和平台期。那么每个阶段PCR产物量的变化都有什么区别呢？哪个阶段最重要呢？小编这就一一道来。基线期PCR起始时，刚开始前几个循环的荧光信号还没有发生变化，接近一条直线，将其称之为基线，一般是3-15个循环。在基线期内，扩增的荧光信号被背景荧光信号所掩盖，无法判断PCR产物量的变化。指数期扩增的荧光信号高于背景荧光信号，扩增曲线起峰，开始进入指数期。在指数期内，每个循环积聚的产物准确加倍（假定100%反应效率）。该阶段的PCR反应具有高度特异性和精确度。因为所有试剂均充足，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍，所以产物出现指数级扩增。只有在这个阶段，Cq值与初始模板量的对数之间存在线性关系，所以在此阶段进行定量分析最合适。线性期（高变异性）随着PCR反应体系各成分的消耗，其中的一种或者多种成分限制反应，导致反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍，该阶段不再是指数级扩增。平台期反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期，最终的产物含量也各不相同。由于线性期和平台期的扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的产物量与初始模板量之间没有线性关系，所以也不能通过这两个阶段的PCR产物量计算出初始模板量。想要知道初始模板量的多少，还要依赖指数期的Cq值进行计算。▲ 图1. qPCR 反应的重要阶段如图所示，标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准，不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关，更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说，高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性，是每一台qPCR仪的追求。高性能的Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求，该系统来自美国Azure Biosystems公司，融合了高品质的帕尔特温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3”触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。▲ 图2. Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统高度的灵敏度使用探针法，同时在Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统和其他品牌产品上检测GAPDH基因，结果表明：A）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统对单拷贝基因的检出率更高。B）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的Cq平均值要低于2个Cq。▲ 图3. 单拷贝基因检测对比(n=96)高度的重复性源于优异的孔间均一性。105拷贝数GAPDH模板，GAPDH引物扩增，96孔重复结果。Cq平均值=19.1，变异系数（Cv）=0.002。▲ 图4. 96孔重复扩增曲线 A）线性图 B）对数图 高度的稳定性稳定可靠的温度模块和光学系统，确保仪器连续运行1000轮qPCR实验，数据依然稳定可靠，重复性高度一致。对GAPDH进行检测并连续计算Cq值得出平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4+0.01。▲ 图5. 长时间连续工作数据稳定
    时间： 2021-11-17
    作者： 艾普拜生物
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  • 【实战宝典】荧光定量PCR扩增效率低的原因？

    问题描述：荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增效率低的原因？解答：[align=left][font=宋体][color=black]可能的原因有：[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]1[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。[/back][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]2[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应条件不够优化，可适当降低退火温度或改为三步扩增法。[/back][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]3[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应体系中有[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp]PCR[/url][/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]反应抑制物，一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，以减少抑制物的影响。[/back][/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【原创大赛】荧光定量PCR实验失败原因分析——荧光信号检测出了问题

    [font=宋体][size=14.0pt]荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]实验失败原因分析 ——荧光信号检测出了问题[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]近日某实验室来电，反映其荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪在成功检测了一次病毒核酸后，连续几次检测均失败，表现为阳性对照也无[/size][/font][size=14.0pt]Ct[/size][font=宋体][size=14.0pt]值，请求给予技术支持。[/size][/font][size=14.0pt]1[/size][font=宋体][size=14.0pt]背景[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]该实验室荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪系进口品牌，今年[/size][/font][size=14.0pt]4[/size][font=宋体][size=14.0pt]月份安装调试，当时检测结果较理想。[/size][/font][size=14.0pt]5[/size][font=宋体][size=14.0pt]月份该实验室进行了一次病毒核酸检测，提取采用柱式[/size][/font][size=14.0pt]DNA[/size][font=宋体][size=14.0pt]提取试剂盒，未设阴性对照和阳性对照；扩增采用配套的核酸扩增试剂，设置了阴性对照和阳性对照，检测结果较理想。但在后续的检测工作中，却连续多次实验失败，表现为整个扩增过程荧光信号均为一条几乎无起伏的直线。[/size][/font][size=14.0pt]2[/size][font=宋体][size=14.0pt]思路[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]影响荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]检测结果的因素可分为三个阶段，一是核酸提取，二是核酸扩增，三是荧光信号检测。为了分析是哪个阶段出了问题，我们设计了以下方案：[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第一步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]该实验室的扩增试剂，看有无检测结果。如有则说明核酸提取环节存在问题，如无则说明可能是核酸扩增环节或荧光信号检测存在问题，继续进行第二步分析；[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第二步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]经验证可以得到结果的扩增试剂（本实验室在用的扩增试剂及引物探针），看有无检测结果。如有则说明核酸提取环节存在问题，如无则说明可能是荧光信号检测存在问题。[/size][/font][size=14.0pt]3[/size][font=宋体][size=14.0pt]分析验证[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]方案确定后，带上本实验室已知结果的核酸（包括[/size][/font][size=14.0pt]Ct[/size][font=宋体][size=14.0pt]值[/size][/font][size=14.0pt]25[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]28[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]31[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]34[/size][font=宋体][size=14.0pt]及阴性），以及本实验室在用的扩增试剂及引物探针，到该实验室开展分析验证。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第一步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]该实验室的扩增试剂上机检测，结果荧光信号仍为一条几乎无起伏的直线。说明可能是核酸扩增环节或荧光信号检测存在问题。为明确究竟是何原因造成实验失败，继续开展第二步分析验证。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第二步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]经验证可以得到结果的扩增试剂上机检测，结果荧光信号还为一条几乎无起伏的直线。因本次使用的扩增试剂和引物探针是本实验室一直在用的，已知可以得到正确的扩增结果，所以初步判断可能是荧光信号检测存在问题。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]到此，分析验证告一段落，实验失败极有可能是荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪出现故障，最大可能是荧光信号检测存在问题。目前，该实验室已电告设备厂家，要求派工程师上门维修。[/size][/font][size=14.0pt]4[/size][font=宋体][size=14.0pt]思考[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]实验失败看似非常头痛，实则不然。只要理清思路，逐一分析验证核酸提取、核酸扩增、荧光信号检测各个环节，即可快速判断问题所在。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]另外还有一点不吐不快的感受，作为一个世界著名品牌产品，实验室选择它的出发点就是该设备的准确性和稳定性，但这台设备只进行过一次检测就出现故障，实属不该。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt][font=&]5[/font]续[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]最新消息，据该实验室反馈，厂方工程师上门检修，发现是作为荧光光源的灯泡坏了。更换灯泡后，该实验室已能检测出正确结果。[/size][/font]

  • 【参数解读总结篇】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

    【参数解读总结篇】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

    【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用PCR技术的基本原理PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。请您来解析：1、普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类仪器有何异同？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502251536_536341_1608710_3.png2、我们应该如何根据检测需求来选购PCR的四类仪器？根据检测的定量要求来选择仪器类型。3、PCR的核心参数都有哪些？核心参数是温度控制。4、梯度PCR仪可以分离不同DNA的片段吗？与普通PCR的异同在哪？梯度PCR可以分离不同DNA片段,与普通PCR仪不同的地方在于。可以设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样可节省试验时间、提高实验效率，又节约实验成本。5、使用过程中常见的问题PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水 及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量 大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物 污染，就可造成假阳就可形成假阳性. 还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样 枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题. (四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的 检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化 过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简 便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大. 二、污染的监测 一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以 便采取措施，防止和消除污染. 对照试验 1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性 对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳 性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳 性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳 定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照. 2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用 鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂 对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染. 3.重复性试验 4.选择不同区域的引物进行PCR扩增 三、防止污染的方法 (一)合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定 等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开. 最好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区. 其实验用品及吸样枪应专用.实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA或RNA. (二)吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题.由于操作时不慎将样品或模板核酸吸 入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸 样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染. (三)预混和分装PCR试剂:所有的PCR试剂都应小量分装，如有可能，PCR反应液应预先 配制好，然后小量分装，-20℃保存.以减少重复加样次数，避免污染机会.另外，PCR试剂，PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一 冰箱. (四)防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用. (五)设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病 原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照 及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照. (六)减少PCR循环次数，只要PCR产物达到检测水平就适可而止. (七)选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸的进入，打开离心管前 应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部.开管动作要轻，以防管内液体溅出. 常见问题分析与对策 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度 高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单 位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有 引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条 带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条 亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融 或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不 够，引物之间形成二聚体等。 Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特 异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。 反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多 大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。 物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出 现假阴性;退火温度过低，可致

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