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仪器信息网 3i讲堂 基于生物技术的中药有效性和安全性质控方法建立
0 0 投诉 分享 12 2023-12-28
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基于生物技术的中药有效性和安全性质控方法建立

基于“高通量靶向筛选+干细胞定向诱导”模式,构建了4种药物筛选模型,分别靶向于脑神经营养因子、肝细胞生长因子、肺部炎症因子及血管内皮生长因子,针对不同靶标病候,如:神经病变、肝病、肺部疾病和心血管疾病进行药效成分筛选和机制探讨。基因启动子是位于基因编码区上游的DNA序列,含有多种顺式作用元件,调控基因的表达。因此我们根据药效检测的需要,选择相应目的基因启动子序列,来构建分子靶向细胞模型。.将目的基因启动子:STK11(丝氨酸/苏氨酸激酶,作为肺癌治疗的新靶标)、NGF(神经保护因子)、VEGF(血管生成因子)、HGF(促进肝细胞再生)、Nrf2(在肝中发挥抗氧化抗炎作用)、合成并装载到具有荧光素酶报告基因的质粒载体上,构建能定量和定性评估基因启动子的质粒载体。通过将靶基因的启动子序列,连接到含有荧光素酶报告基因的质粒上,并将合成得到的质粒转入HEK-293细胞中,构建基于启动子的初步筛选稳定的细胞模型。用阳性药进行验证细胞模型的准确性,并用验证后模型筛选中药不同单体成分。结合bMSCs能不断自我更新和多向分化的潜能,将通过模型筛选得到的单体成分与bMSCs共培养,检测其诱导bMSCs的增殖分化作用,因此,整合两部分内容,形成“分子靶向筛选+干细胞定向诱导”模型,用于中药微量单体筛选,并同时准确指向单体化合物的药效作用及潜在机制。 如:肝样细胞的糖原染色、尿素合成功能检测、低密度脂蛋白的摄取等指标测定以证明筛选得到的单体成分 具有促进BMSCs向肝样细胞分化的潜能。

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